一种辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制备方法
【专利摘要】本发明请求保护一种辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制备方法。辣椒素人工半抗原分子结构式见式Ⅰ，人工抗原的分子结构式见式II。本发明提供的辣椒素人工半抗原最大程度保留了辣椒素类物质的特征结构，可作为抗原决定簇，又具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团。由此得到的人工抗原可免疫获得亲和力高，灵敏度高，特异性强的辣椒素抗体，可用于食用植物油中辣椒素的免疫检测。
【专利说明】一种辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制备方法，属于免疫化学【技术领域】。【背景技术】
[0002]近年来，把非正常食用油(俗称地沟油)掺入合格食用油中以获取利益的行为屡禁不止，严重威胁着消费者的健康，成为当前我国食品安全领域亟须解决的问题。
[0003]国家科技部、工商总局、质检总局、食品药品监管局、粮食局以及中国疾控中心等7部委联合攻关地沟油鉴定方法，主要包括:重金属含量、多环芳烃、胆固醇、3-氯丙二醇及其酯、粘度、电导率、介电常数等，但由于地沟油来源多、成分复杂，现有检测方法不能实现对通过白土吸附脱色、水洗、真空高温脱臭等精炼处理，掺入正常食用油进行销售的新型地沟油进行识别，迄今仍缺乏能够有效鉴别方法。
[0004]我国传统饮食习惯及口味爱好中辣椒是使用量较大、应用范围广泛的调味品，辣椒素是引起辣味的主要化学成分，主要存在于辣椒属植物的果实及种子中。辣椒素具有脂溶性、强稳定性好、沸点高等性质，而餐饮行业的泔水油是地沟油的主要来源之一，目前地沟油加工工艺很难完全去除具有以上性质的化合物。正常食用油基本不含辣椒素，而接触过辣椒的餐厨废弃油脂难以避免地含有这类成分，因此辣椒素能够作为鉴别餐厨废弃油脂的特征指标。现有辣椒素的检测方法主要是高效液相色谱法(HPLC)、液质联用法(LC/MS)，需要对样品进行稀释、过滤、提取、净化，操作复杂、繁琐、检测成本高、周期长，无法满足大批量样品快速筛查，尤 其是现场快速检测的要求。免疫分析是基于抗原、抗体的特异性反应的一种分析方法，在医学上已广泛应用于微量物质的检测。免疫分析具有特异性强、灵敏度高、分析容量大、方便快捷、成本低廉等优点，近年来得到迅速发展。
[0005]建立免疫分析方法，首先必须制备出对辣椒素特异性强、亲和力高的抗体。由于辣椒素分子量较小，不具备刺激机体产生针对辣椒素抗原决定簇的特异性抗体，作为小分子抗原其必须与大分子载体偶联后才具有免疫原性。要实现与大分子物质的偶联，半抗原分子上必须具备能共价结合到载体上的活性集团(如氨基、羧基、羟基和巯基等)。影响免疫分析方法的关键因素在于特异的抗原和抗体，因此获得一种可免疫获得特异性好，亲和力高的辣椒素抗体的抗原具有十分重要的意义。
【发明内容】
[0006]本发明的发明目的是提供一种新型的辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制备方法。
[0007]为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案。
[0008]本发明提供的辣椒素人工半抗原化合物，具有式I所示的分子结构:
[0009]
【权利要求】
1.辣椒素人工半抗原化合物，其特征在于:它具有式I所示的分子结构:.NH
2.辣椒素人工抗原化合物，其特征在于:它的分子结构式如式II所示:
3.根据权利要求2所述的辣椒素人工抗原化合物，其特征在于:所述载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、卵清白蛋白OVA或钥孔血蓝蛋白KLH。
4.权利要求1所 述的辣椒素人工半抗原化合物的合成方法，其特征在于:以Ν-(4-羟基-3-甲氧基苄基)壬酰胺与4-溴代丁酸乙酯为原料经溴代成醚反应，得到式III化合物，然后将其中的酯基团水解制得辣椒素人工半抗原化合物I，合成路线如下:
5.根据权利要求4所述的辣椒素人工半抗原化合物的合成方法，其特征在于:包括以下步骤: (I)将摩尔比为1: (1.2~1.5)的N-(4-羟基-3-甲氧基苄基)壬酰胺和4-溴丁酸乙酯分别溶解于N，N- 二甲基甲酰胺中，得到相应的Ν-(4-羟基-3-甲氧基苄基)壬酰胺溶液和4-溴丁酸乙酯溶液，然后将4-溴丁酸乙酯溶液置于恒压漏斗，缓慢滴加至N- (4-羟基-3-甲氧基苄基)壬酰胺溶液中，待滴加完毕，在105~110°C条件下反应5-7h，后处理得到中间产物III ； (2)将中间产物III在碱性条件下 水解，后处理得到辣椒素人工抗原。
6.权利要求2所述的辣椒素人工抗原化合物的合成方法，其特征在于:它是将权利要求I所述的辣椒素人工半抗原通过N，N’ - 二环己基碳二亚胺DCC与N-羟基琥珀酰亚胺NHS活化后，再与载体蛋白进行偶联得到。
7.权利要求6所述的辣椒素人工抗原化合物的制备方法，其特征在于:包括以下具体步骤: (1)将辣椒素人工半抗原在N，N-二甲基甲酰胺中与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)室温反应1-2小时，然后加入二环己基碳二亚胺的N，N- 二甲基甲酰胺溶液，室温反应4-6小时，静置过夜，取上清液即活化的辣椒素人工半抗原溶液，所述N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和二环己基碳二亚胺的摩尔比为1:1-1.1 ； (2)将上清液滴加到载体蛋白浓度大于等于2mg/mL的载体蛋白的磷酸盐缓冲液中，室温条件反应12_14h，其中:所述步骤(1)中的辣椒素人工半抗原与载体蛋白的摩尔比大于5:1，然后透析得到辣椒素人工抗原。
8.权利要求2所述的辣椒素人工抗原化合物在制备辣椒素特异性抗体中的应用。
9.权利要求2所述的辣椒素人工抗原化合物在食用植物油中辣椒素免疫检测中的应用。
10.辣椒素特异性抗体，其特征在于:它是由权利要求1所述的辣椒素人工抗原经动物免疫得到的可与辣椒素发生特异性免疫反应的球蛋白。
【文档编号】C07K16/44GK103951577SQ201410171292
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2014年4月25日 优先权日:2014年4月25日
【发明者】李培武, 马飞, 张奇, 杨青青, 张良晓, 丁小霞, 张文 申请人:中国农业科学院油料作物研究所