雌二醇半抗原、抗原、抗体及其制备方法与应用的制作方法
【专利摘要】本发明一种雌二醇半抗原，雌二醇半抗原具有如下结构式：以及抗原、抗体及其制备方法和应用，现有的雌二醇检测技术以仪器法居多，而仪器法操作繁复，前处理复杂，成本高；本发明提供了雌二醇半抗原、抗原及其制备方法与应用；通过延长雌二醇特征基团的手臂制备半抗原，进而制备抗原，免疫动物获得特异性抗体；该抗体可以特异性识别雌二醇；延长半抗原的特征基团手臂长度，增大了与载体蛋白的距离，减小空间位阻，有利于刺激动物免疫应答产生特异性更强、灵敏度更高的抗体；本发明提供的雌二醇特异抗体对雌二醇的抑制率高达91％。
【专利说明】雌二醇半抗原、抗原、抗体及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及半抗原、抗原和抗体的制备方法，尤其涉及雌二醇半抗原、抗原、抗体 及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 雌二醇（17i3-Estradi〇l)是天然雌激素的重要成分，因其可以明显促进动物生 长及提高畜禽瘦肉比，而被应用于畜禽业生产中，雌二醇在动物体内的半衰期比较长，可以 在畜禽肝脏肌肉和肾脏中蓄积，通过食物链进入人体，对人体正常的内分泌系统产生干扰， 引起儿童性早熟及男性儿童乳腺发育呈女性化等问题。许多国家已经规定了雌二醇及其衍 生物的最高残留限量，例如：美国农业部食品安全检验署1991年公布，在家禽的可食用部 分雌二醇棕榈酸的最高残留限量为0.002mg/kg;韩国兽药残留限量规定牛肉中苯甲酸雌 二醇最高限量是〇. 〇〇〇12mg/kg ;2010年我国农业部第235号公告规定，雌二醇允许作治疗 用，但不得在动物性食品中检出。因此，食品中雌二醇检测不容忽视。
[0003] 目前国内外检测雌二醇的常用方法主要集中在仪器方法如高效液相色谱-质谱 联用等方法，这些方法样品预处理要求高、步骤复杂、操作需专业人员、检测费用高、所依 赖仪器昂贵复杂、费时费力，很难适应多种不同场合的快速检测需要，在应用上不能广泛推 广。
[0004] 基于抗原-抗体特异性结合的免疫分析法具有样品前处理简便、操作简单、快速、 灵敏、高通量等特点，被誉为是21世纪最具竞争和挑战的快速检测技术，在食品安全领域 具有广阔的应用前景。但是，对于免疫分析法而言，抗体是决定整个方法性能的重要基础， 而抗体的效果很大程度上取决于引起相应动物发生免疫反应的抗原结构。由于雌二醇属于 淄体化合物，极可能存在载体决定簇竞争性干扰、免疫耐受性及内分泌系统的干扰，制备其 抗体常常较困难。
[0005] 有鉴于上述现有的雌二醇半抗原、抗原、抗体及其制备方法存在的缺陷，本发明人 基于从事此类产品设计制造多年丰富的实务经验及专业知识，并配合学理的运用，积极加 以研究创新，以期创设一种新型雌二醇半抗原、抗原、抗体及其制备方法与应用，使其更具 有实用性。经过不断的研究、设计，并经反复试作样品及改进后，终于创设出确具实用价值 的本发明。
【发明内容】
[0006] 本发明的主要目的在于，克服现有的雌二醇半抗原、抗原及抗体制备方法存在的 缺陷，而提供一种新型雌二醇半抗原、抗原、抗体及其制备方法，提高抗体效价和灵敏度，并 且可重复性高，从而更加适于实用，且具有产业上的利用价值。
[0007] 本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本发明提出 的一种雌二醇半抗原，所述雌二醇半抗原具有如下结构式：
[0008]
【权利要求】
1. 一种雌二醇半抗原，其特征在于，所述雌二醇半抗原具有如下结构式：
2. -种雌二醇抗原，其特征在于，所述雌二醇抗原具有如下结构式：
式中：R为载体蛋白。
3. 根据权利要求2所述的雌二醇抗原，其特征在于，所述载体蛋白为匙孔血蓝蛋白、牛 血清蛋白或卵清蛋白。
4. 权利要求1所述的雌二醇半抗原的制备方法，其特征在于，所述制备方法操作步骤 为：将雌二醇与戊二酸酐在催化剂的作用下反应得到产物，通过乙醚萃取纯化上述产物，得 到所述雌二醇半抗原。
5. 根据权利要求2所述的雌二醇抗原的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括如 下步骤： 1) 制备雌二醇半抗原的N，N-二甲基甲酰胺溶液； 2) 在上述溶液中加入N，N-二环己基碳酰亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺； 3) 搅拌，静置； 4) 离心后得上清液； 5) 将所述上清液加入载体蛋白的磷酸盐缓冲液中； 6) 反应后离心，取上清夜，用生理盐水透析，得到目标产物。
6. 根据权利要求5所述的雌二醇抗原的制备方法，其特征在于：所述载体蛋白为匙孔 血蓝蛋白、牛血清蛋白或卵清蛋白。
7. -种雌二醇抗体，其特征在于，所述抗体通过将所述抗原与免疫佐剂乳化后刺激动 物机体免疫应答获得。
8. 将权利要求1所述的雌二醇半抗原用于检测食品中的雌二醇。
9. 将权利要求2或3所述的雌二醇抗原用于检测食品中的雌二醇。
10. 将权利要求7所述的雌二醇抗体用于检测食品中的雌二醇。
【文档编号】C07K14/77GK104059119SQ201410253502
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2014年6月10日 优先权日:2014年6月10日
【发明者】高海岗, 陆建荣, 顾菲菲, 张月峰, 马光焰, 施妮莎, 许国平 申请人:高海岗