水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法
【专利摘要】本发明提供了一种水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法；包括如下步骤：步骤一，取水仙花的副冠组织，冻干并研磨至粉状，加入色素提取液，超声提取；步骤二，加入正己烷萃取，将萃取液合并洗涤，离心、真空浓缩、皂化、二次洗涤、二次浓缩、溶解即可。本发明方法获得的β-胡萝卜素样品液的纯度达98％以上，可直接作为高效液相色谱级标准品使用。本发明材料来源广泛、操作简便、成本低廉、纯度较高，适用于天源β-胡萝卜素标准品的制备。
【专利说明】水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物中色素的提取方法，具体地，涉及一种水仙花中β-胡萝卜素的 提取分离方法。
【背景技术】
[0002] 水仙是石蒜科（Amaryllidaceael)水仙属（Narcissus)多年生草本植物，是一种 重要的观赏花卉。有研究发现水仙花中最主要的色素成分为类胡萝卜素。类胡萝卜素是一 类重要的天然色素，主要包括胡萝卜素类和叶黄素类。其中β_胡萝卜素是胡萝卜素类最 重要的一种化合物，且具有广泛的抗氧化、抗肿瘤和消炎功效。
[0003] β_胡萝卜素在类胡萝卜素定性定量分析中广泛被用作标准品使用，但由于提取 工艺复杂、合成困难、成本较高、且易氧化、易光解的特性而致使其价格昂贵。目前已发现一 些从植物中获取类胡萝卜素的相关报道，如专利号201010515845. 6使用乙醚等有机溶剂 提取了野菊花中类胡萝卜素混合物，专利号201210097866通过无溶剂提取法获得了类胡 萝卜素混合物，并推荐直接用作食品添加剂，专利号201010233243. 1使用乙醇及微波辅助 提取方式获取类胡萝卜素混合物。然而，针对类胡萝卜素中高纯度的β-胡萝卜素的提取 分尚方式尚未见报道。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种水仙花中β-胡萝卜素的提取 分离方法。本发明采用的为大杯状副冠型水仙品种Narcissus pseudonarcissus 'Prof. Einstein'，其副冠为橙红色。本发明对其花色成分初步定性分析发现其副冠内含大量 β-胡萝卜素。因此，本文以N. pseudonarcissus 'Prof.Einstein'为植物材料，不仅发现 新型的天然源的类胡萝卜素，而且为制备廉价β-胡萝卜素标准品提供了可能。
[0005] 本发明是通过以下技术方案实现的：
[0006] 本发明涉及一种水仙花中β -胡萝卜素的提取分离方法，包括如下步骤：
[0007] 步骤一，取水仙花的副冠组织，冻干并研磨至粉状，加入色素提取液，超声提取；
[0008] 步骤二，加入正己烷萃取，将萃取液合并洗涤，离心、真空浓缩、皂化、二次洗涤、二 次浓缩、溶解即可。
[0009] 优选地，包括如下步骤：
[0010] 步骤一，取新鲜的水仙花的副冠组织，加液氮冻干并研磨至粉状，加入色素提取 液，超声提取；
[0011] 步骤二，加入料液比（副冠组织g:正己烷ml)为1-2:5-20的正己烷，萃取至下层 为无色，合并各萃取液；
[0012] 步骤三，向萃取液内加入料液比（副冠组织g:饱和NaCl溶液ml)为1-2:10-30 的饱和NaCl溶液洗涤，使上清至中性，弃下层；
[0013] 步骤四，将萃取液置于真空干燥箱内真空浓缩，至溶剂挥净；
[0014] 步骤五，加入料液比（副冠组织g:甲基叔丁基醚ml)为1-2:2-4的甲基叔丁基 醚溶液溶解，同时加入料液比（副冠组织g: 10% Κ0Η-甲醇溶液ml)为1-2:4-10的10% Κ0Η-甲醇溶液，避光皂化；
[0015] 步骤六，向皂化液内加入料液比（副冠组织g:饱和NaCl溶液ml)为1-2:4-10的 饱和NaCl溶液和料液比（副冠组织g:甲基叔丁基醚ml)为1-2:2-4的甲基叔丁基醚溶液 使其分层，同时加入料液比（副冠组织g:饱和NaCl溶液ml)为1-2:10-30的饱和NaCl溶 液洗涤至中性，弃下层；
[0016] 步骤七，取上层至离心管内，置于真空干燥箱内二次真空浓缩至干，即得橙红色 β_胡萝卜素粉末；
[0017] 步骤八，将β-胡萝卜素粉末溶解于料液比（副冠组织g:甲基叔丁基醚ml)为 1-2:1-2的甲基叔丁基醚溶液内，即可。
[0018] 优选地，所述水仙花的为 Narcissus pseudonarcissus 'Prof. Einstein'。
[0019] 优选地，步骤一中，所述色素提取液组成为正己烷：丙酮：无水乙醇：水= 6-12:1-3:1-3:0. 5-1。
[0020] 优选地，所述水仙花的副冠组织与所述色素提取液的质量体积比为1-3:20-50。
[0021] 优选地，所述皂化的时间为2_5h，温度为18_25°C。
[0022] 优选地，所述真空浓缩的压强为100_800Pa，温度45_70°C。
[0023] 优选地，所述甲基叔丁基醚溶液中含有抗氧化剂BHT，其含量为0. 005-0. 1 %。
[0024] 优选地，所述超声提取的时间为30_120min。
[0025] 与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
[0026] 1.本发明方法获得的胡萝卜素样品液的纯度达98%以上，可直接作为高效液 相色谱级标准品使用。
[0027] 2.本发明材料来源广泛、操作简便、成本低廉、纯度较高，适用于天源β_胡萝卜 素标准品的制备。
【具体实施方式】
[0028] 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术 人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术 人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明 的保护范围。
[0029] 实施例1
[0030] 本实施例涉及的水仙花的品种为 Narcissus pseudonarcissus 'Prof. Einstein'。
[0031] 本实施例涉及一种水仙花中β -胡萝卜素的提取分离方法，包括如下步骤：
[0032] 步骤一，取新鲜的水仙花的副冠组织，加液氮冻干并研磨至粉状，加入色素提取 液，超声提取；
[0033] 步骤二，加入料液比（g:ml)为1:5的正己烧，萃取至下层为无色，合并各萃取液；
[0034] 步骤三，向萃取液内加入料液比（g:ml)为1:10的饱和NaCl溶液洗漆，使上清至 中性，弃下层；
[0035] 步骤四，将萃取液置于真空干燥箱内真空浓缩，至溶剂挥净；
[0036] 步骤五，加入料液比（g:ml)为1:2的甲基叔丁基醚溶液溶解，同时加入料液比为 1:4的10% Κ0Η-甲醇溶液，避光皂化；
[0037] 步骤六，向皂化液内加入料液比（g:ml)为1:4的饱和NaCl溶液和料液比（g:ml) 为1:2的甲基叔丁基醚溶液使其分层，同时加入料液比（g:ml)为1:10的饱和NaCl溶液洗 涤至中性，弃下层；
[0038] 步骤七，取上层至离心管内，置于真空干燥箱内二次真空浓缩至干，即得橙红色 β_胡萝卜素粉末；
[0039] 步骤八，将胡萝卜素粉末溶解于料液比为1:1的甲基叔丁基醚溶液内，即可。
[0040] 实施效果：经本实施例方法获得的β -胡萝卜素样品液的纯度达98%以上，可直 接作为高效液相色谱级标准品使用。
[0041] 实施例2
[0042] 本实施例涉及的水仙花的品种为 Narcissus pseudonarcissus 'Prof. Einstein'。
[0043] 本实施例涉及一种水仙花中β -胡萝卜素的提取分离方法，包括如下步骤：
[0044] 步骤一，取新鲜的水仙花的副冠组织，加液氮冻干并研磨至粉状，加入色素提取 液，超声提取；
[0045] 步骤二，加入料液比（g:ml)为1. 5:10的正己烧，萃取至下层为无色，合并各萃取 液；
[0046] 步骤三，向萃取液内加入料液比（g:ml)为1. 5:20的饱和NaCl溶液洗漆，使上清 至中性，弃下层；
[0047] 步骤四，将萃取液置于真空干燥箱内真空浓缩，至溶剂挥净；
[0048] 步骤五，加入料液比g:ml)为1. 5:3的甲基叔丁基醚溶液溶解，同时加入料液比为 1. 5:6的10% Κ0Η-甲醇溶液，避光皂化；
[0049] 步骤六，向皂化液内加入料液比（g:ml)为1.5:6的饱和NaCl溶液和料液比 (g:ml)为1-2:2-4的甲基叔丁基醚溶液使其分层，同时加入料液比（g:ml)为1. 5:20的饱 和NaCl溶液洗涤至中性，弃下层；
[0050] 步骤七，取上层至离心管内，置于真空干燥箱内二次真空浓缩至干，即得橙红色 β_胡萝卜素粉末；
[0051] 步骤八，将β-胡萝卜素粉末溶解于料液比为1.5:2的甲基叔丁基醚溶液内，即 可。
[0052] 实施效果：经本实施例方法获得的β_胡萝卜素样品液的纯度达98%以上，可直 接作为高效液相色谱级标准品使用。
[0053] 实施例3
[0054] 本实施例涉及的水仙花的品种为 Narcissus pseudonarcissus 'Prof. Einstein'。
[0055] 本实施例涉及一种水仙花中β -胡萝卜素的提取分离方法，包括如下步骤：
[0056] 步骤一，取新鲜的水仙花的副冠组织，加液氮冻干并研磨至粉状，加入色素提取 液，超声提取；
[0057] 步骤二，加入料液比（g:ml)为1:10的正己烷，萃取至下层为无色，合并各萃取 液；
[0058] 步骤三，向萃取液内加入料液比（g:ml)为1:15的饱和NaCl溶液洗漆，使上清至
【权利要求】
1. 一种水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤一，取水仙花的副冠组织，冻干并研磨至粉状，加入色素提取液，超声提取； 步骤二，加入正己烷萃取，将萃取液合并洗涤，离心、真空浓缩、皂化、二次洗涤、二次浓 缩、溶解即可。
2. 如权利要求1所述的水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，其特征在于，包括如下 步骤： 步骤一，取新鲜的水仙花的副冠组织，加液氮冻干并研磨至粉状，加入色素提取液，超 声提取； 步骤二，加入料液比为1-2:5-20的正己烷，萃取至下层为无色，合并各萃取液； 步骤三，向萃取液内加入料液比为1-2:10-30的饱和NaCl溶液洗漆，使上清至中性，弃 下层； 步骤四，将萃取液置于真空干燥箱内真空浓缩，至溶剂挥净； 步骤五，加入料液比为1-2:2-4的甲基叔丁基醚溶液溶解，同时加入料液比为 1-2:4-10的10% KOH-甲醇溶液，避光皂化； 步骤六，向皂化液内加入料液比为1-2:4-10的饱和NaCl溶液和料液比为1-2:2-4的 甲基叔丁基醚溶液使其分层，同时加入料液比为1-2:10-30的饱和NaCl溶液洗涤至中性， 弃下层； 步骤七，取上层至离心管内，置于真空干燥箱内二次真空浓缩至干，即得橙红色β -胡 萝卜素粉末； 步骤八，将β -胡萝卜素粉末溶解于料液比为1-2:1-2的甲基叔丁基醚溶液内，即可。
3. 如权利要求1所述的水仙花中β_胡萝卜素的提取分离方法，其特征在于，所述水仙 花的品种为 Narcissus pseudonarcissus
4. 如权利要求1或2所述的水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，其特征 在于，步骤一中，所述色素提取液组成为：正己烷、丙酮、无水乙醇、水的体积比为 6-12:1-3:1-3:0. 5-1。
5. 如权利要求1所述的水仙花中β_胡萝卜素的提取分离方法，其特征在于，所述水仙 花的副冠组织与所述色素提取液的料液比为1-2:20-40。
6. 如权利要求1或2所述的水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，其特征在于，所述 皂化的时间为2-5h，温度为18-25°C。
7. 如权利要求1或2所述的水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，其特征在于，所述 真空浓缩的压强为100_800Pa，温度45-70°C。
8. 如权利要求2所述的水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，其特征在于，所述甲基 叔丁基醚溶液中含有抗氧化剂ΒΗΤ，其含量为0. 005-0. 1 %。
9. 如权利要求1或2所述的水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，其特征在于，所述 超声提取的时间为30-120min。
【文档编号】C07C403/24GK104059008SQ201410253476
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2014年6月9日 优先权日:2014年6月9日
【发明者】李欣, 史益敏, 卢敏 申请人:上海交通大学