一种盐藻多糖热水浸提法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物工程领域，具体涉及一种盐藻多糖热水浸提法。
【背景技术】
[0002]盐藻，隶属于绿藻门、绿藻纲、团藻目、盐藻科、盐藻属，又称为盐生杜氏藻，是一种形态微小、没有细胞壁、原生质裸露的嗜盐性沲游藻类。盐藻富含多糖类化合物、微量元素、蛋白质、高度不饱和脂肪酸及胡萝卜素等多种营养成分，是国内外公认的天然
胡萝卜素的主要来源之一。目前，盐藻中胡萝卜素的提取已形成了产业化，而提取后的藻渣中仍含有多种维生素、矿物质及多糖。目前，人们发现盐藻具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等多种生理活性。研宄显示，盐藻多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗辐射等多种生物活性，对重金属及其他毒素也具有强烈的阻吸作用，具有极高的研宄及开发价值，现在已用于药品(增强药物活性)，护肤品(促进肌肤再生、促进皮肤保湿)等相关领域中。由此可见，盐藻多糖是盐藻发挥一系列生理作用的主要活性成分。因此，对盐藻中的多糖成分进行进一步开发和利用，提高盐藻在食品或保健品或药品中的应用具有重要的意义。
[0003]利用溶解度的不同，根据提取多糖的性质，选择适当的溶剂，冷采用冷提或热提是主要的两种传统的多糖提取方法，但传统的提取工艺存在工艺未完善，提取不充分或是多糖损失较大等缺点。为此，本发明提供一种碱性条件下热水浸提的方法，对盐藻多糖提取的工艺进行了最大程度的优化，不仅多糖损失上，提取率高，而且工艺简单，方便可行。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是解决现有技术中存在的上述问题，提供一种工艺简单、多糖损失少的盐藻多糖提取方法。
[0005]本发明的技术方案如下:
一种盐藻多糖热水浸提法，其特征在于，包括以下步骤:
(1)去除杂质及β-胡萝卜素:取10-20g原藻粉，加5-10倍体积的纯化水，超声混匀，过滤，取滤液，加丙酮，超声混匀，抽滤，再次加入丙酮，相同条件下混匀、抽滤，烘干去除β-胡萝卜素，得去除胡萝卜素的盐藻粉；
(2)去除蛋白质:取步骤(I)中去除β-胡萝卜素的盐藻粉，加入PH调节剂调节ΡΗ，并加入盐溶液静置，离心，取上清液，将上清液转移至水浴三角瓶中，在三角瓶中加5-8倍量的乙酸乙酯浸泡，加150-200ml蒸馏水水浴加热浸提，离心，取上清液，减压浓缩至原体积的1/3，加入PH调节剂调节PH至7-8，超声提取后过滤，取滤液加3-5倍体积无水乙醇沉淀，在50-60°C条件下醇沉，抽滤，将沉淀冻干得粗多糖；
(3)测定样品中多糖含量:取步骤(2)中制得的粗多糖0.5-lg，加水定容至50ml，取l-5ml，采用蒽酮-硫酸法测定多糖含量。
[0006]优选的，步骤(I)中所述的丙酮的加入量为10-20倍的滤液体积量。
[0007]优选的，步骤(I)中超声混匀的温度为28_35°C，超声混匀时间为l_3h。
[0008]优选的，步骤(2)中的PH调节剂选自0.5-2mol/L的盐酸水溶液或l_3mol/L的氢氧化钠水溶液中的一种或多种。
[0009]优选的，步骤(2)所述的盐溶液选自1-2%的氯化钠水溶液或1-2%的醋酸钠水溶液中的一种或多种。
[0010]优选的，步骤(2)中所述的调节PH为调节PH至3-3.5。
[0011]优选的，步骤(2)中所述的静置时间为l_2h。
[0012]优选的，步骤(2)中所述的水浴加热温度为65_75°C，水浴浸提时间为5_10min。
[0013]优选的，步骤(2)中所述的离心速度4000-6000r/min，离心时间10_20min。
[0014]优选的，步骤(2)中所述的超声提取时间为60_100min，所述的醇沉时间为3_6h。
[0015]本发明与现有技术相比，有益效果体现在:
1.盐藻多糖的常规提取时，现有技术采用乙醇回流，虽然乙醇回流可提高盐藻中多糖的提取率，但是乙醇回流可损失多糖，本发明先将原藻粉加纯化水超声混匀、过滤，可将样品中的杂质及大颗粒物质去除，然后采用丙酮对原藻粉进行预处理，再去除胡萝卜素，可明显降低盐藻中多糖的损失，最终提高多糖的提取量。
[0016]2.传统的盐藻多糖在提取时，提取时间在约240min时，多糖得率仍在增加，在提取约300min时，多糖得率才达到最大化，提取时间较长，本发明中，在对盐藻去除了 β-胡萝卜素及蛋白质后，加入了乙酸乙酯及150-200ml蒸馏水水浴加热，减压浓缩，并调节PH至7-8，可使超声提取时间缩短至60-100min，在不影响多糖提率的同时，大大节省了提取时间，而且在步骤(2)中去除蛋白质过程中，加入了适量的盐溶液，不仅可使蛋白质去除更彻底，而且也缩短了后续的醇沉时间。
[0017]3.在提取盐藻多糖时，随着提取温度的增加，多糖提取率也随之增加，而当温度达到80°C时，多糖的生理活性也会受到破坏，为此，本发明将整个实验温度控制在75°C以下，可避免多糖被过高的温度破坏，也避免了多糖提取率过低。
【具体实施方式】
[0018]下面结合具体实施例对本发明进行详细说明:
实施例1
一种盐藻多糖热水浸提法，包括以下步骤:
(1)去除杂质及β-胡萝卜素:取1g原藻粉，加5倍体积的纯化水，28°C超声混匀lh，过滤，取滤液，加10倍的滤液体积量的丙酮，在28°C超声混匀Ih,抽滤，再次加入丙酮，相同条件下混匀、抽滤，烘干去除胡萝卜素，得去除β-胡萝卜素的盐藻粉；
(2)去除蛋白质:取步骤(I)中去除β-胡萝卜素的盐藻粉，加入0.5mol/L的盐酸水溶液调节PH至3，并加入1%的氯化钠水溶液，静置lh，以4000r/min离心lOmin，取上清液，将上清液转移至水浴三角瓶中，在三角瓶中加5倍量的乙酸乙酯浸泡，加150ml蒸馏水水浴加热至65°C浸提5min，以4000r/min离心lOmin，取上清液，减压浓缩至原体积的1/3，加入lmol/L的氢氧化钠水溶液调节PH至7，超声提取60min后过滤，取滤液加3倍体积无水乙醇沉淀，在50°C条件下醇沉3h，抽滤，将沉淀冻干得粗多糖；