一种银杏内酯l的制备方法
【专利摘要】银杏内酯类化合物作为血小板活化因子(PAF)的强力拮抗剂，对局灶性脑缺血和弥散性全脑缺血有很好的保护作用。银杏内酯分为银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯、银杏内酯K、银杏内酯L等。银杏内酯L在银杏叶中含量极低，难以获得，研究报道几乎为零。本专利涉及一种银杏内酯L的制备方法，从市售或根据已知方法得到的银杏总内酯中提取出来。该方法操作简单，原料价格低廉，可快速大量获得银杏内酯L，为银杏内酯L的研究提供了基础。
【专利说明】-种银杏内酯L的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药【技术领域】，具体涉及一种银杏内酯L的制备方法。
【背景技术】
[0002] 银杏（Ginkgo biloba L.)为银杏科（Ginkgoaceae)银杏属唯一生存种，被称为植 物界的"活化石"，是我国特有的古树之一。银杏叶具有敛肺，平喘，活血化瘀，止痛的功能， 用于治疗肺虚咳嗽、冠心病、心绞痛、高脂血症。银杏叶标准提取物主要成分是22%?24% 的黄酮和5%?7%的内酯。
[0003] 1967年，美国哥伦比亚大学的中西香尔教授的团队报道了从银杏叶提取物中发现 的若干化合物，其中首次报道了从银杏叶提取物中发现的4个具有特殊结构的二萜内酯类 (diterpene lactones)化合物即银杏内酯 A、B、C 和 M(ginkgolide A、B、C、M)。银杏内酯 类成分的化学结构非常奇特，分子骨架小、结构非常紧密，分子中碳骨架高度官能团化，整 个分子呈扭曲的笼形结构，6个五元环互相缠绕在一起，包含1个螺[4,4]壬烷碳骨架、3个 Y-内酯环、1个四氢呋喃环、1个叔丁基侧链和十几个手性中心，如银杏内酯B含有11个 立体中心。1987年又分离得到银杏内酯J(ginkgolide J)，均为含有20个碳原子的二萜 类化合物，后来又发现了银杏内酯K和Uginkgolide K、L)。银杏内酯类成分在银杏叶和 根皮中的量极低，仅为万分之几甚至百万分之几，茎皮及根皮内部组织中则更低，其中银杏 内酯M仅存在于银杏的根皮中，其他银杏内酯类化合物仅在银杏叶中发现。1988年，哈佛 大学的Corey教授领导的研究团队成功地完成了银杏内酯B、A的全合成。银杏内酯B全 合成研究工作的完成推动了复杂天然分子全合成学科的发展。Corey教授正是在全合成银 杏内酯B和前列腺素类化合物（prostanoids)的研究过程中创立及应用了逆合成分析法 (retrosynthetic analysis)，同时发现了很多新的合成反应路线和方法及合成试剂，因此 获得了 1990年的诺贝尔化学奖。但由于其结构复杂因而合成工艺复杂繁琐、工业化成本过 高，目前仍仅限于实验室研究，因此银杏叶仍是提取银杏内酯类化合物的主要来源。（《天 然药物化学史话：银杏内酯》，《中草药》，第44卷，第6期，2013年3月，郭瑞霞，李骘，李力 更）。
[0004] 银杏内酯是从银杏叶中提取出来的内酯类化合物，目前获得银杏萜内酯的途径有 4种：化学合成、生物合成、细胞培养和天然提取。前3种途径目前仍仅限于实验室研究，未 进入工业化大生产。因此，银杏叶仍是天然提取银杏萜内酯化合物的主要来源。而银杏萜 内酯在银杏叶中的含量很低，一般在0.25%以下，银杏萜内酯的药用资源受到限制，因此如 何提高其含量成为当前研究工作的重点与难点（《银杏叶萜内酯的研究进展》，《安徽农业科 学》，2006, 34 (19) :4956-4958,廖咏玲、许锋、程水源）。
[0005] 对于银杏内酯的提取分离，目前已经有很多报道，例如刘大伟等人利用溶剂萃 取-柱层析方法，得到了纯度较高的银杏总内酯（银杏叶中银杏内酯的提取、分离和测定方 法研究，刘大伟等，科技创新导报，2011年25期）。韩亚荣建立了合适的柱层析方法，得到 了高纯度的银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C单体（柱层析技术提取和分离银杏内酯，韩 亚荣，亚太传统医药，2009年8月，第5卷第8期）。
[0006] 银杏内酯类化合物都是血小板活化因子（PAF)的强力拮抗剂，具有很好的脑保护 作用。例如任俊等人研究表明，银杏内酯对急性不完全性脑缺血、大脑中动脉阻塞、全脑缺 血等情况均有很好的改善效果，具有明确的脑保护作用（任俊，银杏内酯对三种脑缺血模 型大鼠的保护作用，中药新药与临床药理2005年1月第16卷第1期）。目前来讲，对于银 杏内酯单体的药理活性研究已经越来越深入，银杏内酯L作为银杏内酯的某一个单体化 合物，其在银杏总内酯中含量极低，目前，未见国内外有对于银杏内酯L的研究报道。
[0007] 银杏内酯L结构式为：
[0008]
【权利要求】
1. 一种银杏内酯L，其特征在于：由银杏叶提取制备得到。
2. -种银杏内酯L的制备方法，其特征在于： 银杏总内酯高温脱水，生成内酯的脱水产物，其中含有银杏内酯L，经过硅胶柱层析分 离得到高纯度的银杏内酯L，含量在98%以上。
3. 根据权利要求1的一种银杏内酯L的制备方法，其特征在于： 在酸性环境中，银杏总内酯高温脱水，生成内酯的脱水产物，其中含有银杏内酯L，经过 硅胶柱层析分离得到高纯度的银杏内酯L，含量在98%以上。
4. 根据权利要求1的一种银杏内酯L的制备方法，其特征在于： 在碱性环境中，银杏内酯高温开环并脱水，经过酸化后，内酯环闭环，在闭环后的产物 中，含有银杏内酯L，经过硅胶柱层析分离得到高纯度的银杏内酯L，含量在98 %以上。
5. 根据权利要求2的一种银杏内酯L的制备方法，其特征在于： 所用的酸是硫酸，盐酸，磷酸，醋酸中的任意一种。其浓度是0.1?3mol/L.反应温度 为70?170°C。溶剂是水、醇或水和醇的混合液，醇为甲醇、乙醇、或异丙醇，水和醇的混合 液其比例为1 : 1?1 : 10。
6. 根据权利要求3的一种银杏内酯L的制备方法，其特征在于： 碱是氢氧化钠，氢氧化钾，吡啶，或者葡聚胺中的任意一种。其浓度为〇. 1?3mol/L。 反应温度为75-170°C。溶剂是水、醇或水和醇的混合液，醇为甲醇、乙醇、或异丙醇，水和醇 的混合液其比例为1 : 1?1 : 10。
7. 根据权利要求1或2所述的一种银杏内酯L的制备方法，其特征在于： 所用柱层析硅胶为100?300目，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、氯仿-丙 酮、氯仿-甲醇、二氯甲烷-丙酮、二氯甲烷-甲醇。柱层析所用洗脱剂比例为100 : 1? 1 : 100。
8. 根据权利要求1或2所述的一种银杏内酯L的制备方法，其特征在于：银杏内酯L的 检测方法是： HPLC-DAD 检测，HPLC 为 Agilent S1290-HPLC，所用色谱柱为 Zorbax Extend C-18 column(2. l*150mm, 5 u m) 液相条件为：A相：0. 1%甲酸水，B相：乙腈。 洗脱梯度： 0 ?10min，20% B ?30% B， 10 ?13min，30% B ?35% B， 13 ?17min，35% B ?100% B， 17-20min，100% B ?100% B。 柱温：30°C，检测器DAD，检测波长为203nm。 质谱条件为： 正离子扫描，mass rangel00-1100m/z ESI ：Gas temp ：350〇C Drying gas ：7.5L/min Nebulizer ：30psig MSTOF ：Fragmentor ：145V Skimmer :70V OCT RFV ：350V ESI (scan) ：capillary ：3000V Capillary ：0. 018uA Chamber :0?16uA〇
【文档编号】C07D493/22GK104356141SQ201410717704
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年11月27日 优先权日:2014年11月27日
【发明者】李萍, 杨华, 郭汝洲, 楼凤昌, 刘新光 申请人:中国药科大学