专利名称：海参多糖的制备方法
技术领域：
本发明涉及保健品技术领域，尤其是海参多糖的制备方法。
背景技术：
海参属棘皮动物门，海参纲。海参又名刺参，在南海、黄海分布极广。海参作为养 生食品渊源流长，据《本草纲目拾遗》记载海参，味甘成、补肾经、摄小便、壮阳疗萎，其性温 补，足敌人参，故名曰海参。目前研究发现海参营养丰富，蛋白质含量达52. 2%，海参多糖 等活性物质约占15%，主要为粘多糖和海参糖氨聚糖，具有抗癌防癌、增强免疫力、抗血栓、 延缓衰老、抗病毒等功效。目前虽有海参多糖的相关提取工艺专利及文献，但皆存在以下缺点一、生产周期 较长，如中国专利申请CN101451157A，至少需要28小时；二、产品得率及纯度较低，得率不 及1 %、纯度也低于80% ；三、有机溶剂使用量大，大量使用氯仿，既污染环境，同时对最终产 品也有影响。
发明内容
本发明针对以上不足，提出一种海参多糖的制备方法，生产周期短、目标产物得率 及纯度较高，且避免了有机溶剂的大量使用，其生产工艺简单可行，符合大生产条件。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案一种海参多糖的制备方法，包 括以下步骤①、提取取新鲜海参或干海参绞碎，加入2 4倍重量的2%氢氧化钠溶液；室温 搅拌2 4小时，过滤，调滤液的pH值至7. 0 9. 0 ；②、酶解向步骤①滤液中加入滤液重量1. 0 % 3. 0 %的胰蛋白酶，搅拌均勻， 35°C 50°C酶解1 4h，调pH值至3. 5 6. 0 ；再加入滤液重量1.0% 3.0%的胃蛋白 酶，搅拌均勻，35°C 50°C酶解1 4h，在100°C沸水中保温5 15分钟；③、除蛋白搅拌步骤②酶解后的溶液，同时加入10%的三氯乙酸至pH至3.0 ；于 4°C静置4h，离心取上清液，加上清液2倍体积的95%乙醇于4°C静置4h，离心沉淀，沉淀物 真空干燥。优选的，向步骤①过滤后的滤渣中加入2 4倍滤渣重量的2%氢氧化钠溶液中， 室温搅拌2 4小时，过滤，合并滤液。优选的，步骤①中滤液的PH值调至8. 0。优选的，步骤②中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解温度为40°C。优选的，步骤②中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解时间为2h。优选的，步骤②中胰蛋白酶或胃蛋白酶的用量为2.0%。与现有技术相比，本发明采用碱提双酶水解法提取海参多糖，避免了原料加热胶 化(70 130°C )造成多糖蛋白变性，影响酶解反应的效价，同时采用2%氢氧化钠溶液提 取的优点在于(1)强碱环境抑制海参自溶酶活性，保留目标产物；(2)能更大程度的提取海参酸性粘多糖。先采用碱液处理提取之后，海参多糖蛋白结构改变，当加入复合酶时便能对海参 多糖蛋白进行彻底酶解，无需进行原料的超微粉碎及纳米粉碎，从而节约成本和有效防止 产品的二次污染。酶解液于100°c钝化，主要是为了使其过量的酶失活，以免造成海参多糖 含量的降低及损失。采用三氯乙酸进行除蛋白，使用量极低(约为酶解液重量0. 2%左右)，且易回收 再利用，去除蛋白率高反应条件易控制，避免了传统Sevage法除蛋白中高毒性有机溶剂氯 仿的使用，也避免了采用双氧水除蛋白而造成的目标产物结构异构化导致海参多糖含量下 降，生产相对较安全，产品纯度相应较高。采用高浓度乙醇进行重结晶海参多糖，产品晶型较好，能使海参多糖纯度达到 98%以上，无需进行反复脱色、脱蛋白，从而大大缩短生产周期，仅需要19h左右。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释 性，不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。实施例1取干海参绞碎1. 0kg，加入2倍重量2%氢氧化钠溶液2L，室温搅拌提取2小时， 共提取2次，过滤，合并得3. 82L滤液，滤液冷却至室温，采用1 %盐酸溶液调pH值至8. 0， 加入2%的胰蛋白酶20ml (酶液浓度lmg/ml)充分搅勻，于40°C酶解2小时，后将酶解液用 1 %盐酸调PH值至4. 0，再添加2%的胃蛋白酶20mL(酶液浓度lmg/ml)，同样于40°C酶解 2h后，再于100°C沸水中进行酶解钝化5min。酶解完毕后，用三氯乙酸除蛋白，将10%的三 氯乙酸IOml直接加到酶解液中调pH至3. 0，边加边搅即产生沉淀，然后4°C放置4h，离心取 上清液3. 06L，加2倍体积的95%乙醇于4°C静置4h，离心沉淀并减压回收乙醇，沉淀真空 干燥即得海参多糖110. 2g ；约耗时18h。实施例2取新鲜海参绞碎1. 5kg，加入4倍重量2%氢氧化钠溶液，室温搅拌提取3小时， 过滤；滤渣加入3倍重量2%氢氧化钠溶液，室温搅拌提取4小时，过滤；合并两次滤液，得
4.13L滤液，滤液冷却至室温，采用调节0. 5%硫酸溶液调pH值至7. 2，加入的胰蛋白酶 30ml (酶液浓度1. 5mg/ml)充分搅勻，于36°C酶解3小时，后将酶解液用0. 5%硫酸调pH值 至5. 0，再添加1. 5%的胃蛋白酶30mL(酶液浓度1. 4mg/ml)，于42°C酶解Ih后，再于100°C 沸水中进行酶解钝化15min。酶解完毕后，用三氯乙酸除蛋白，将10%的三氯乙酸约15ml直 接加到酶解液中调PH至3. 0，边加边搅即产生沉淀，然后4°C放置4h，离心取上清液3. 56L， 加2倍体积的95%乙醇于4°C静置4h，离心沉淀并减压回收乙醇，沉淀真空干燥即得海参多 糖108. 4g ；约耗时20h。实施例3取新鲜海参绞碎2. Okg,加入3倍重量2%氢氧化钠溶液，室温搅拌提取4小时， 过滤；滤渣加入4倍重量2%氢氧化钠溶液，室温搅拌提取2小时，过滤；合并两次滤液，得
5.25L滤液，滤液冷却至室温，采用调节盐酸溶液调pH值至9. 0，加入3%的胰蛋白酶 20ml (酶液浓度1.5mg/ml)充分搅勻，于50°C酶解4小时，后将酶解液用盐酸调pH值至6. 0，再添加3%的胃蛋白酶20mL(酶液浓度1. 4mg/ml)，于50°C酶解Ih后，再于100°C沸水 中进行酶解钝化lOmin。酶解完毕后，用三氯乙酸除蛋白，将10%的三氯乙酸约15ml直接 加到酶解液中调PH至3. 0，边加边搅即产生沉淀，然后4°C放置4h，离心取上清液3. 56L，加 2倍体积的95%乙醇于4°C静置4h，离心沉淀并减压回收乙醇，沉淀真空干燥即得海参多糖 124. 3g ；约耗时 20h。根据以上实施例得到的三批样品，按含量测定方法依法测定海参多糖含量。结果 见下表1 表1样品中海参多糖含量测定结果
权利要求
1.一种海参多糖的制备方法，包括以下步骤①、提取取新鲜海参或干海参绞碎，加入2 4倍重量的2%氢氧化钠溶液；室温搅拌 2 4小时，过滤，调滤液的pH值至7. 0 9. 0 ；②、酶解向步骤①滤液中加入滤液重量1.0% 3.0%的胰蛋白酶，搅拌均勻，35°C 50°C酶解1 4h，调pH值至3. 5 6.0 ；再加入滤液重量1. 0% 3. 0%的胃蛋白酶，搅拌 均勻，35°C 50°C酶解1 4h，在100°C沸水中保温5 15分钟；③、除蛋白搅拌步骤②酶解后的溶液，同时加入10%的三氯乙酸至pH至3.0 ；于4°C 静置4h，离心取上清液，加上清液2倍体积的95%乙醇于4°C静置4h，离心沉淀，沉淀物真 空干燥。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于向步骤①过滤后的滤渣中加入2 4倍 滤渣重量的2%氢氧化钠溶液中，室温搅拌2 4小时，过滤，合并滤液。
3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于步骤①中滤液的pH值调至8.0。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤②中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解 温度为40°C。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤②中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解 时间为2h。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤②中胰蛋白酶或胃蛋白酶的用量 为 2. 0%。
全文摘要
本发明公开了一种海参多糖的制备方法，包括以下步骤①提取用2％氢氧化钠溶液提取新鲜海参或干海参；②酶解向提取液中采用胰蛋白酶和胃蛋白酶两步酶解过程；③除蛋白采用三氯乙酸来去除蛋白，再使用高浓度的乙醇重结晶海参多糖。本发明制备的海参多糖得率平均为11.27％，纯度平均为98.4％，生产周期约19小时左右，比现有的工艺制得的产品有很大的改善。
文档编号C08B37/00GK102002110SQ20101055920
公开日2011年4月6日 申请日期2010年11月24日 优先权日2010年11月24日
发明者刘全胜, 周海妹, 展学孔 申请人:刘全胜