一种从木耳中提取木耳多糖的方法
【专利摘要】本发明涉及一种从木耳中提取木耳多糖的方法，其是选取干木耳为原料，经浸泡、清洗、捣碎后加入纤维素酶，控制酶解条件酶解破除细胞壁；酶解后的木耳渣采取热水浸提；木耳酶解液与木耳浸提液合并后经过滤，再加入鞣酸溶液去除过滤液中的蛋白，离心收集的多糖溶液采用乙醇溶液醇沉；最后经真空干燥而成多糖产品。本发明的提取方法工艺合理，操作简单，成分保留全面，多糖得率及纯熟高，产品安全性好。
【专利说明】一种从木耳中提取木耳多糖的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及多糖类的制备，尤其是一种从木耳中提取木耳多糖的方法。
【背景技术】
[0002]我们知道，木耳在真菌学分类中属担子菌纲，木耳目，木耳科。色泽黑褐，质地柔软，并可防治缺铁性贫血及其他药用功效。主要分布于黑龙江、吉林、福建、台湾、湖北、广东、广西、四川、贵州、云南等地。木耳子实体含酸性粘多糖，由L-岩藻糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和葡萄糖醛酸等单糖组成。从木耳中提取的木耳多糖，具有降血糖、降血脂、降低胆固醇、抑制血小板聚集、提高机体免疫功能、抗血栓形成、抗衰老、抗溃疡、抗放射的功效。
[0003]木耳细胞壁关键组分几丁质和β -葡聚糖，质地坚韧，不易被人体所消化，细胞壁内所含有的多种有效成分很难透过细胞壁，被人体所吸收，因而破壁处理对于开展黑木耳深加工尤为重要，破壁可使黑木耳细胞内富含的功能性成分溶出于水中，提高黑木耳的消化吸收率。
[0004]传统的木耳多糖的提取方法多采用水提取法和酸碱提取法。木耳细胞粗大、壁厚，水提取多糖难以从胞内溶出；而酸碱提取法易破坏多糖结构，降低其生物利用率。因此，研究开发一种通过纤维素酶酶解细胞壁与热水浸提相结合的从木耳中提取木耳多糖的方法，以提高多糖的得率及成份全面、结构不被破坏，这对于木耳的综合利用具有重要的意义。
【发明内容】
[0005]为了克服现有技术中木耳多糖水提取法存在多糖难以从胞内溶出造成提取率低、及酸碱提取法易破坏多糖结构，降低其生物利用率的不足。本发明的目的是提供一种从木耳中提取木耳多糖的方法，该提取方法采用酶酶解破壁与热水浸提相结合，不仅工艺合理、操作简单、生产成本低，而且成分保留全面、多糖得率高、产品安全性好。
[0006]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:一种从木耳中提取木耳多糖的方法，其特征在于:经过下列工艺步骤: a、原料选取选取成熟的、无病虫害的干木耳为原料；
b、原料处理将步骤(a)所选取的木耳原料加入木耳质量5~10倍的水，浸泡3~4h，再采用清水冲洗干净，然后送入组织捣碎机加入木耳质量2~4倍的水捣碎成浆状，得木耳浆液；
C、酶解破壁将步骤(b)所得到的木耳浆液加入木耳质量4~5倍的水，搅拌均匀，控制温度为45~50°C，调节PH值为6.5~7.0，加入液体固含量0.2%~0.5%的纤维素酶进行酶解，酶解时间为2~3h ;酶解完成后升温至90~100°C，保持20~30min，灭酶；将灭酶后的木耳固液混合物转移至离心机中，固液分离，得木耳酶解液和木耳渣；
d、热水浸提将步骤(c)所得到的木耳渣加入木耳质量5~10倍的水，控制温度90~100°C，水浴提取I~2h ;将提取完毕后的木耳固液混合物转移至离心机中，固液分离，得木耳浸提液；
e、过滤将步骤(C)所得到的木耳酶解液与步骤(d)所得到的木耳浸提液合并，然后采用100~200目的滤布进行过滤，去除木耳小颗粒及其他不溶性杂质，得木耳过滤液；
f、去除蛋白将步骤(e)所得到的木耳过滤液升温至85~90°C，然后逐渐向该过滤液中滴加浓度为0.3~0.5%的鞣酸溶液析出过滤液中的蛋白，直到无沉淀产生为止；将蛋白沉淀液送入离心机中，固液分离，得去除蛋白后的多糖溶液；
g、醇沉将步骤(f)所得到的去除蛋白后的多糖溶液中加入浓度为90~95%的乙醇溶液，添加量为多糖溶液质量的40~60%，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止；静置3~4h，再用100~200目纱布过滤，得多糖沉淀；
h、干燥将步骤(g)所得到的多糖沉淀送入真空干燥机，控制干燥机内真空度-0.09~0.03 kpa，温度在35~60°C，进行低温真空干燥，得多糖粉末。
[0007]本发明是选取干木耳为原料，经浸泡、清洗、捣碎后加入纤维素酶，控制酶解条件酶解破除细胞壁；酶解后的木耳渣采取热水浸提；木耳酶解液与木耳浸提液合并后经过滤，再加入鞣酸溶液去除过滤液中的蛋白，离心收集的多糖溶液采用乙醇溶液醇沉；最后经真空干燥而成多糖产品。本发明的提取工艺采用了纤维素酶酶解细胞壁与热水浸提相结合的方式，纤维素酶酶解使细胞破壁，极大的提高木耳多糖的溶出率；再将木耳高温水浸提，酶解破壁后的未能溶出的部分多糖进一步溶解出来，进一步提高了多糖的得率；而后采用易挥发的采用乙醇溶液进一步纯化，提高多糖纯度。经实验测定:采用本工艺流程木耳多糖的多糖含量可达40%以上， 木耳多糖的提取率为15%以上。本发明的提取方法工艺合理，操作简单，成分保留全面，多糖得率高，产品安全性好，提高了对原料的利用程度，降低了生产成本。
【具体实施方式】
[0008]下面结合实施例对本发明做进一步详细说明。
[0009]实施例一
一种从木耳中提取木耳多糖的方法，经过下列工艺步骤:
a、原料选取选取成熟的、无病虫害的干木耳IOOkg作为原料,备用；
b、原料处理将步骤(a)所选取的木耳原料加入木耳质量8倍的水，浸泡3.5h，再采用清水冲洗干净，然后送入组织捣碎机加入木耳质量3倍的水捣碎成浆状，得木耳浆液；
C、酶解破壁将步骤(b)所得到的木耳浆液加入木耳质量4.5倍的水，搅拌均匀，控制温度为48 °C，调节PH值为6.8，加入液体固含量0.3%的纤维素酶进行酶解，酶解时间为
2.5h ;酶解完成后升温至95°C，保持25min，灭酶；将灭酶后的木耳固液混合物转移至离心机中，控制转速2000r/min，进行固液分离，得木耳酶解液和木耳渣；
d、热水浸提将步骤(c)所得到的木耳渣加入木耳质量8倍的水，控制温度95°C，水浴提取1.5h ;将提取完毕后的木耳固液混合物转移至离心机中，控制转速2000r/min，进行固液分离，得木耳浸提液；
e、过滤将步骤(c)所得到的木耳酶解液与步骤(d)所得到的木耳浸提液合并，然后采用150目的滤布进行过滤，去除木耳小颗粒及其他不溶性杂质，得木耳过滤液；
f、去除蛋白将步骤(e)所得到的木耳过滤液升温至88°C，然后逐渐向该过滤液中滴加浓度为0.4%的鞣酸溶液析出过滤液中的蛋白，直到无沉淀产生为止；将蛋白沉淀液送入离心机中，控制转速2000r/min，进行固液分离，得去除蛋白后的多糖溶液；
g、醇沉将步骤(f)所得到的去除蛋白后的多糖溶液中加入浓度为93%的乙醇溶液，添加量为多糖溶液质量的52%，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止；静置
3.5h，再用150目纱布过滤，得多糖沉淀；
h、干燥将步骤(g)所得到的多糖沉淀送入真空干燥机，控制干燥机内真空度
0.01kpa，温度在50°C，进行低温真空干燥，得多糖粉末15.83kg，经测定:该多糖粉末中多糖含量达到44.93%。
[0010]实施例二
一种从木耳中提取木耳多糖的方法，经过下列工艺步骤:
a、原料选取选取成熟的、无病虫害的干木耳200kg做为原料,备用；
b、原料处理将步骤(a)所选取的木耳原料加入木耳质量10倍的水，浸泡3h，再采用清水冲洗干净，然后送入组织捣碎机加入木耳质量2倍的水捣碎成浆状，得木耳浆液；
C、酶解破壁将步骤(b)所得到的木耳浆液加入木耳质量5倍的水，搅拌均匀，控制温度为50°C，调节PH值为6.5，加入液体固含量0.5%的纤维素酶进行酶解，酶解时间为2h ；酶解完成后升温至100°C，保持20min，灭酶；将灭酶后的木耳固液混合物转移至离心机中，控制转速1800r/min，进行 固液分离，得木耳酶解液和木耳渣；
d、热水浸提将步骤(c)所得到的木耳渣加入木耳质量10倍的水，控制温度100°C，水浴提取Ih ;将提取完毕后的木耳固液混合物转移至离心机中，控制转速1800r/min，进行固液分离，得木耳浸提液；
e、过滤将步骤(c)所得到的木耳酶解液与步骤(d)所得到的木耳浸提液合并，然后采用200目的滤布进行过滤，去除木耳小颗粒及其他不溶性杂质，得木耳过滤液；
f、去除蛋白将步骤(e)所得到的木耳过滤液升温至90°C，然后逐渐向该过滤液中滴加浓度为0.5%的鞣酸溶液析出过滤液中的蛋白，直到无沉淀产生为止；将蛋白沉淀液送入离心机中，控制转速1800r/min，进行固液分离，得去除蛋白后的多糖溶液；
g、醇沉将步骤(f)所得到的去除蛋白后的多糖溶液中加入浓度为95%的乙醇溶液，添加量为多糖溶液质量的40%，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止；静置4h，再用200目纱布过滤，得多糖沉淀；
h、干燥将步骤(g)所得到的多糖沉淀送入真空干燥机，控制干燥机内真空度0.03kpa，温度在35°C，进行低温真空干燥，得多糖粉末30.4kg，经测定:该多糖粉末中多糖含量达到42.6%0
[0011]实施例三
一种从木耳中提取木耳多糖的方法，经过下列工艺步骤:
a、原料选取选取成熟的、无病虫害的干木耳IOOkg做为原料,备用；
b、原料处理将步骤(a)所选取的木耳原料加入木耳质量5倍的水，浸泡4h，再采用清水冲洗干净，然后送入组织捣碎机加入木耳质量4倍的水捣碎成浆状，得木耳浆液；
C、酶解破壁将步骤(b)所得到的木耳浆液加入木耳质量4倍的水，搅拌均匀，控制温度为45°C，调节PH值为7.0,加入液体固含量0.2%的纤维素酶进行酶解，酶解时间为3h ；酶解完成后升温至90°C，保持30min，灭酶；将灭酶后的木耳固液混合物转移至离心机中，控制转速1500r/min，进行固液分离，得木耳酶解液和木耳渣；
d、热水浸提将步骤(c)所得到的木耳渣加入木耳质量5倍的水，控制温度100°C，水浴提取Ih ;将提取完毕后的木耳固液混合物转移至离心机中，控制转速1500r/min，进行固液分离，得木耳浸提液；
e、过滤将步骤(c)所得到的木耳酶解液与步骤(d)所得到的木耳浸提液合并，然后采用100目的滤布进行过滤，去除木耳小颗粒及其他不溶性杂质，得木耳过滤液；
f、去除蛋白将步骤(e)所得到的木耳过滤液升温至90°C，然后逐渐向该过滤液中滴加浓度为0.3%的鞣酸溶液析出过滤液中的蛋白，直到无沉淀产生为止；将蛋白沉淀液送入离心机中，控制转速1500r/min，进行固液分离，得去除蛋白后的多糖溶液；
g、醇沉将步骤(f)所得到的去除蛋白后的多糖溶液中加入浓度为90%的乙醇溶液，添加量为多糖溶液质量的60%，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止；静置3h，再用100目纱布过滤，得多糖 沉淀；
h、干燥将步骤(g)所得到的多糖沉淀送入真空干燥机，控制干燥机内真空度-0.09kpa，温度在60°C，进行低温真空干燥，得多糖粉末15.64kg，经测定:该多糖粉末中多糖含量达到42.76%。
[0012]以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属【技术领域】的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
【权利要求】
1.一种从木耳中提取木耳多糖的方法，其特征在于:经过下列工艺步骤: a、原料选取选取成熟的、无病虫害的干木耳为原料； b、原料处理将步骤(a)所选取的木耳原料加入木耳质量5~10倍的水，浸泡3~4h，再采用清水冲洗干净，然后送入组织捣碎机加入木耳质量2~4倍的水捣碎成浆状，得木耳浆液； C、酶解破壁将步骤(b)所得到的木耳浆液加入木耳质量4~5倍的水，搅拌均匀，控制温度为45~50°C，调节PH值为6.5~7.0，加入液体固含量0.2%~0.5%的纤维素酶进行酶解，酶解时间为2~3h ;酶解完成后升温至90~100°C，保持20~30min，灭酶；将灭酶后的木耳固液混合物转移至离心机中，固液分离，得木耳酶解液和木耳渣； d、热水浸提将步骤(c)所得到的木耳渣加入木耳质量5~10倍的水，控制温度90~100°C，水浴提取I~2h ;将提取完毕后的木耳固液混合物转移至离心机中，固液分离，得木耳浸提液； e、过滤将步骤(c)所得到的木耳酶解液与步骤(d)所得到的木耳浸提液合并，然后采用100~200目的滤布进行过滤，去除木耳小颗粒及其他不溶性杂质，得木耳过滤液； f、去除蛋白将步骤(e)所得到的木耳过滤液升温至85~90°C，然后逐渐向该过滤液中滴加浓度为0.3~0.5%的鞣酸溶液析出过滤液中的蛋白，直到无沉淀产生为止；将蛋白沉淀液送入离心机中，固液分离，得去除蛋白后的多糖溶液； g、醇沉将步骤(f)所得到的去除蛋白后的多糖溶液中加入浓度为90~95%的乙醇溶液，添加量为多糖溶液质量的40~60%，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止；静置3~4h，再用100~200目纱布过滤，得多糖沉淀； h、干燥将步骤(g)所得到的多糖沉淀送入真空干燥机，控制干燥机内真空度-0.09~0.03 kpa，温度在35~60°C，进行低温真空干燥，得多糖粉末。
【文档编号】C08B37/00GK103641924SQ201310609349
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年11月27日 优先权日:2013年11月27日
【发明者】倪海平, 唐茂林, 杨众, 唐严芳 申请人:威海市桢昊生物技术有限公司