A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物及制备与应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物，该共聚物由D-葡萄吡喃糖（），D-葡萄吡喃糖-聚乳酸-羟基乙酸（），A54-D-葡萄吡喃糖（）三种结构单元无规交替而成。本发明在合成葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物的基础上，进一步A54多肽修饰葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物，合成了A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物，该共聚物可在水性介质中，通过自聚集形成胶团，并且可快速被肿瘤细胞所摄取，对人肝癌细胞系BEL-7402具有特异性靶向作用。该材料可有效包封水难溶性抗肿瘤药物，并具有对药物的缓释功能，通过A54多肽的修饰，实现对BEL7402肝肿瘤的靶向，从而大幅度提高药物的疗效。
【专利说明】A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物及制备与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属化合物合成方法，涉及A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物和合成方 法，以及作为胶束载体在制备抗肿瘤药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 在过去的几十年里，聚合物胶束作为一种潜在的载体，在药物输送系统中得到广 泛的关注。聚合物胶束具有核-壳结构，其疏水性链段构成胶团的内核，可作为难溶性药 物的储库；亲水性链段形成胶团的外壳，可以保持胶团在水性环境中的稳定性。另外，可以 对聚合物胶束进行理化性质修饰以达到特定的目的，如胶团的主动靶向等。目前，聚合物 胶束主要用作难溶性药物的载体，特别是抗肿瘤药物的载体。由于其粒径一般小于lOOnm， 可通过"增强的透过及滞留效应"聚集于肿瘤部位。
[0003] 寻靶肽作为靶向制剂的主动靶向修饰物质，在肿瘤治疗中发挥着越来越重要的作 用。在过去的十年中，研究人员成功地使用噬菌体展示技术证明，与细胞表面结合的多肽 可应用于肿瘤靶向。这些寻靶肽的优势包括相对分子量小、易于合成，具有较低的细胞毒性 和免疫原性、在体内可降解等。肝癌结合肽AGKGTPSLETTP (A54)是从噬菌体展示随机肽 库体内筛选出来的，可有效靶向结合人肝癌细胞系BEL-7402细胞表面。
【发明内容】
[0004] 本发明的一个目的是提供A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物，该共聚物由 D-葡萄吡喃糖(I )，D-葡萄吡喃糖-聚乳酸-羟基乙酸(Π )，A54-D-葡萄吡喃糖(ΠΙ )三种 结构单元无规交替而成。三种结构单元为：
【权利要求】
1. 一种A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物，其特征在于，该共聚物由D-葡萄吡喃 糖(I)，D-葡萄吡喃糖-聚乳酸-羟基乙酸(II )，A54-D-葡萄吡喃糖(III)三种结构单元无规 交替而成，三种结构单元分别为：
其中，A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物中所使用的葡聚糖的分子量为IOkDa-IOOkDa;结构单元II中聚乳酸-羟基乙酸共聚物的分子量为I. 5kDa，其乳酸和羟基 乙酸的比例为70 : 30;每个A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物中含有D-葡萄吡喃 糖-聚乳酸-羟基乙酸结构单元(II )1?3个；A54为多肽，其序列为丙氨酸-甘氨酸-赖 氨酸-丙氨酸-苏氨酸-脯氨酸-丝氨酸-亮氨酸-谷氨酸-苏氨酸-苏氨酸-脯氨酸 (AGKATPSLETTP);每个A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物中含有A54-D-葡萄吡喃糖 结构单元(III) 1~2个。
2. 权利要求1所述的A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物，具体通过以下方法实 现： (1) 葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物的合成 称取聚乳酸-羟基乙酸、Ν，Ν' -二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶，三者投料摩尔比 为1 :3 :0. 3,置于IOOmL干燥圆底烧瓶中，加入15mL无水二甲亚砜，60°C搅拌使反应物完全 溶解，反应30min以活化聚乳酸-羟基乙酸的羧基，向圆底烧瓶中加入IOkDa?IOOkDa的 500mg葡聚糖，在氮气保护下继续反应24h。
3. 反应结束后，将反应产物置于截留分子量为7000的透析袋中，用纯水持续透析48h， 收集透析袋中的混悬液，于4000rpm离心lOmin，取其上清液进行冷冻干燥，将得到的冻干 产物溶于浓度为20mg/mL的丙酮，减压抽滤，得到的固体物质复溶于去离子水，继续冷冻干 燥，即得葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物固体； (2) A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物的合成 取20mgA54多肽，加20mL的无水二甲亚砜并超声溶解，冰浴搅拌下，加入4. 90μ]： (Boc)2O,十分钟后转至室温下避光搅拌12h，另取葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸、Ν，Ν' -二环 己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶，用IOmL无水二甲亚砜溶解后加入反应体系，室温搅拌反 应24h，反应结束后，向体系中加入25mL去离子水，所得混悬液于4000rpm下离心IOmin后， 取上清液调酸去除Boc保护基，终反应液置于截留分子量为7000的透析袋中，纯水透析48h 后冷冻干燥，既得A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物。
4. 根据权利要求1所述的A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物，其特征是：步骤（2) 中A54 多肽与（Boc)2O的摩尔比为A54 : (Boc)2O=I:1. 3。
5. 根据权利要求1所述的A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物在制备负载阿霉素 胶团中的应用。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，A54-葡聚糖-聚乳酸-羟基乙酸共聚物 在水性介质中通过自聚集形成胶团，lmg/mL的共聚物水溶液形成粒径为60?160nm的胶 团，负载水难溶性抗肿瘤药物阿霉素。
【文档编号】C08G63/91GK104311831SQ201410576224
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年10月26日 优先权日:2014年10月26日
【发明者】杜永忠, 司徒俊青, 余日胜, 应晓英, 游剑, 赵梦丹 申请人:浙江大学