一种体内活性氧水平失调动物模型的试剂盒的制作方法

文档序号:11809252阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种体内活性氧水平失调动物模型的试剂盒,所述试剂盒包括的材料为:

①isp-1基因RNAi后的秀丽隐杆线虫;

②NGM培养基;

③大肠杆菌OP50。

2.根据权利要求1所述的一种体内活性氧水平失调动物模型的试剂盒,其特征在于,所述的isp-1基因RNAi后的秀丽隐杆线虫是通过分子生物学手段将秀丽隐杆线虫isp-1基因片段插入到质粒载体上,并将其转化到宿主细胞中,构建克隆菌,诱导转化后的克隆菌表达isp-1的dsRNA,给秀丽隐杆线虫饲喂克隆菌,即建立isp-1基因RNAi后的秀丽隐杆线虫。

3.根据权利要求2所述的一种体内活性氧水平失调动物模型的试剂盒,其特征在于,所述isp-1基因片段是用PCR的方法从秀丽隐杆线虫基因组DNA中扩增出来的。

4.根据权利要求2所述的一种体内活性氧水平失调动物模型的试剂盒,其特征在于,质粒载体为质粒L4440,宿主细胞为大肠杆菌HT115(DE3)。

5.根据权利要求4所述的一种体内活性氧水平失调动物模型的试剂盒,其特征在于,将isp-1基因片段插入到质粒L4440两个反向T7启动子之间的多克隆位点处构建重组质粒。

6.根据权利要求2所述的一种体内活性氧水平失调动物模型的试剂盒,其特征在于,所述的诱导转化后的重组克隆菌时所用的诱导剂为异丙基硫代半乳糖苷。

7.如权利要求1-6所述体内活性氧水平失调动物模型试剂盒在筛选治疗体内活性氧水平失调疾病药物中的应用,其特征在于,所述活性氧水平失调是由活性氧下降引起的。

8.如权利要求1-6任一项所述一种体内活性氧水平失调动物模型试剂盒在筛选 治疗体内代谢异常药物中的应用,其特征在于,所述代谢异常是活性氧下降所引起的。

9.如权利要求1-6任一项一种体内活性氧水平失调动物模型试剂盒在研究体内活性氧升高对机体各种生理生化代谢过程的影响中的应用。

10.一种体内活性氧水平失调动物模型的试剂盒的使用方法,将isp-1基因RNAi后的秀丽隐杆线虫用镍铬丝挑针分别转移到含有待测化合物的NGM培养基平板和不含有待测化合物的NGM培养基平板上,不含有待测化合物的NGM培养基平板作为空白对照组,每块平板上接种25条isp-1基因RNAi后的秀丽隐杆线虫,待测化合物组与空白对照组均设置3个平行,上述平板均接种大肠杆菌OP50作为秀丽隐杆线虫食物,每天计数待测化合物组与空白对照组的秀丽隐杆线虫的存活条数,直至平板上所有的秀丽隐杆线虫全部死亡,计算待测化合物组与空白对照组中秀丽隐杆线虫的寿命。

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