本技术领域涉及苯并噁嗪酮酰胺的某些衍生物(包括其药学上可接受的盐)，其充当可减少内皮中氧化应激并且因此改善血管功能的盐皮质激素(MR)受体调节剂，涉及它们潜在地在治疗和/或预防包括心血管和代谢疾病(例如高血压、心力衰竭、慢性肾脏疾病、糖尿病性肾病、糖尿病、眼部脉管系统疾病)的临床病症中的效用，涉及用于它们潜在的治疗用途的方法，涉及包含它们的药物组合物并且涉及用于制备这些化合物的方法。
背景
醛固酮(一种生理盐皮质激素)调节上皮组织中(特别是远侧肾单位和结肠)的钠输送。对醛固酮的响应由核受体、盐皮质激素受体(MR；NR3C2)介导并且涉及非基因组连同基因组效应。MR在盐皮质激素响应中的关键作用在MR缺陷型小鼠中得到证实；这些小鼠显示出深厚的盐皮质激素-无反应盐-消耗，这在早期新生儿阶段必然是致命的。在患有高血压或充血性心力衰竭的患者中，受损的盐皮质激素作用与盐分平衡障碍相关联，并且醛固酮过多症与内皮功能障碍和受损的血管反应性相关联。MR拮抗作用与在内皮中降低的氧化应激以及因此改进的血管功能是耦联的。
在患高血压者和患有充血性心力衰竭的患者中，高水平循环的醛固酮与内皮功能障碍相关联，主要地由盐皮质激素受体介导该作用。长期的醛固酮过多症还与肾纤维化相关联并且最终衰竭(内分泌学和新陈代谢趋势(Trends Endocrinol Metab.)2008，19(3)，88-90)。尽管剂量受MR介导高钾血症限制，但在心力衰竭研究中阻断MR导致死亡率和发病率实质性降低(新英格兰医学杂志杂志(N.Engl.J.Med.)1999，341(10)，709-17)。有限的临床试验已经证明，MR拮抗剂在治疗肾疾病(包括糖尿病肾病)中也有益效果(国际肾脏期刊(Kidney International)2011，79，1051)。然而，高钾血症的风险目前正限制着MR拮抗剂的使用并且尤其排斥糖尿病患者。新颖、有效和选择性的MR拮抗剂应该扩大在内皮改进和上皮来源的高钾血症之间这种治疗窗口。
披露在生物有机化学与医药化学快报(Bioorg.Med.Chem.Lett.)2005，15，2553中的非甾体MR拮抗剂描述3,3-双芳基羟吲哚的优化作为MR拮抗剂用于治疗充血性心力衰竭的用途。
WO 2006/015259涉及苯并噁嗪酮作为类固醇激素受体的有效调节剂(包括MR)，来治疗影响心脏、肾和脉管系统的多种障碍。
治疗术专利评论(Opin.Ther.Pat.)2007，17，17综述了MR拮抗剂领域。该综述还包括两种关键的甾体MR拮抗剂：依普利酮以及螺内酯。
治疗术专利专家评论(Expert Opin.Ther.Patents)2014，24(2)，177综述了在涵盖了应用领域2007-2012的专利综述中的MR调节剂领域。
WO 2007/077961涉及稠合杂环化合物作为MR拮抗剂用于治疗高血压、心力衰竭和类似疾病。
DE 10 2007 009 494披露了4-芳基-1,4-二氢-1,6-萘啶-3-甲酰胺作为MR拮抗剂用于治疗高血压、心力衰竭、肾疾病和其他病症。
WO 2007/089034披露了双环化合物(例如N-(2,2-二甲基-3-氧代-4-苯基-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-7-基)甲磺酰胺)作为粘合剂粘合至MR。
WO 2008/118319涉及具有MR结合亲和力的二苯甲基咪唑用于治疗一系列病症(包括心血管和肾脏疾病)。
WO 2008/53300披露了MR拮抗剂用于治疗一系列病症(包括心血管和肾脏障碍)。
WO 2008/126831涉及N-(对甲基磺酰基苯基)-5-(2-三氟甲基苯基)吡咯-3-甲磺酰的阻转异构体作为MR拮抗剂。
WO 2009/085584涉及6H-二苯并[b,e]噁呯类似物作为MR拮抗剂用于治疗生理障碍例如充血性心力衰竭、高血压和糖尿病肾病。
WO 2009/017190披露了苯并噁嗪和色烯衍生物作为MR拮抗剂可用作利尿剂并且用于预防和/或治疗高血压、心力衰竭、心肌梗死、心绞痛、心脏肥大、心肌纤维化、血管纤维化、压力感受器障碍、体液过量、心律不齐、原发性或继发性醛固酮症、阿狄森氏病、库欣综合征、或巴蒂综合征。
US 20100094000涉及吡唑衍生物作为MR拮抗剂用于高血压、心力衰竭等的用途。
WO 2010/098286披露了(+)-1,4-二甲基-N-[4-(甲基磺酰基)苯基]-5-[2-(三氟甲基)苯基]-1H-吡咯-3-羧基作为一种试剂用于治疗糖尿病肾病。
WO 2010/104721涉及5-((E)-(3-氟二苯并[b,e]二氢二苯噁庚英-11(6H)-亚基)甲基)-1-((7R,8aR)-六氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-7-基)-1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮作为MR拮抗剂用于预防疾病(包括充血性心力衰竭、糖尿病性肾病和慢性肾脏疾病)的特定用途。
WO 2010/116282涉及二氢吡唑作为MR拮抗剂用于高血压的治疗。
WO 2011/141848涉及吗啉衍生物作为MR拮抗剂并且涉及它们用于治疗多种病症(包括糖尿病肾病和内皮功能障碍)的用途。
WO 2012/064631披露了吡啶基脲作为MR的拮抗剂用于例如心力衰竭的治疗。
WO 2012/008435披露了二芳基酰胺衍生物抑制MR用于一系列疾病(包括肾疾病)的治疗。
医药化学杂志(J.Med.Chem.)2011，54，8616描述了作为MR拮抗剂的苯并噁嗪-3-酮衍生物的结构活性。
心血管药理学杂志(J.Cardiovasc.Pharmacol.)2012，59(5)，458描述了SM-368229作为一种具有抗高血压疗效的MR拮抗剂在大鼠中在血清钾水平上具有最小效果。
化学医药化学(ChemMedChem)2012，7(8)，1385报告了二氢吡啶对二氢萘基吡啶类似物的优化以及BAY 94-8862的鉴别。
分子和细胞内分泌学(Mol.Cell.Endocrinol.)2012，350，310综述了MR拮抗剂的药理学并且描述了BR-4628和PF-3882845的性能。
医药化学杂志(J.Med.Chem.)2012，55，7957是对非甾体MR拮抗剂领域的综述。
生物有机化学与医药化学(Bioorg.Med.Chem.Lett.)2013，23，4388报告了噁唑烷酮衍生物作为有效MR拮抗剂的探索。
生物有机化学与医药化学(Bioorg.Med.Chem.Lett.)2013，23，6239报告了芳基磺酰胺作为有效非甾体MR拮抗剂的探索。
药理学前沿(Frontiers in pharmacology)2013，4，115描述了在糖尿病肾病的动物模型中PF-03882845的效果并且声称降低了高钾血症的风险。
医药化学杂志(J.Med.Chem.)2014，57(10)，4273描述了对于改善PF-03882845的核激素受体选择性的努力。
尽管上述这些，仍存在着用于治疗以下疾病的替代性/进一步改进的试剂的需求：心血管、炎性、代谢和肾脏病症，包括心力衰竭、高血压、慢性肾脏疾病、糖尿病性肾病、内皮功能障碍、糖尿病、眼部脉管系统疾病，例如比先前描述的化合物具有以下优点：它们可以更有效、更小毒性更小、更具选择性、是更有效力、产生更少的副作用、更容易吸收、和/或具有更好的药物代谢动力学特性(例如，更高的口服生物利用度和/或更低的清除率)。
技术实现要素：
在此的目的是提供充当盐皮质激素(MR)受体调节剂的化合物，它们用作潜在药物的用途，包含它们的药物组合物以及生产它们的合成路线。
根据第一方面，提供了一种具有化学式(I)的化合物
其中
R1选自CONH2或CONHCH3，并且
R2选自H、F、Cl或Br，
或其药学上可接受的盐。
这些具有化学式(I)的化合物是盐皮质激素(MR)受体调节剂。因此，这些具有化学式(I)的化合物可以用作药物，具体地是针对响应于MR的调节的障碍、疾病或病症，并且更确切地是心血管、炎症、代谢和肾脏病症，包括心力衰竭、高血压、慢性肾脏疾病、糖尿病性肾病、内皮功能障碍、糖尿病、眼部脉管系统疾病，其中MR的调节发挥了作用。
在另一方面，提供了一种药物配制品，该药物配制品包含治疗有效量的一种具有化学式(I)的化合物或具有化学式(I)的化合物的药学上可接受的盐以及药学上可接受的稀释剂、赋形剂和/或惰性载体。
在另一个实施例中，提供了一种用于在调节盐皮质激素受体将是有益的病症的治疗中使用的、包括具有化学式(I)的化合物或具有化学式(I)的化合物的药学上可接受的盐的药物配制品。
根据另一个方面，提供了一种用于在疗法尤其是在哺乳动物(特别是人)的慢性肾脏疾病的预防或治疗中使用的、具有化学式(I)的化合物或具有化学式(I)的化合物的一种药学上可接受的盐。
根据另一个方面，提供了一种用于在疗法尤其是在哺乳动物(特别是人)的心血管和代谢疾病的预防或治疗中使用的、具有化学式(I)的化合物或具有化学式(I)的化合物的一种药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，提供了一种用于在疗法尤其是在哺乳动物(特别是人)的糖尿病性肾病的预防或治疗中使用的、具有化学式(I)的化合物或具有化学式(I)的化合物的一种药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，提供了一种用于在疗法尤其是在哺乳动物(特别是人)的代谢疾病(例如糖尿病)的预防或治疗中使用的、具有化学式(I)的化合物或具有化学式(I)的化合物的一种药学上可接受的盐。
在再一个另外的实施例中，提供了一种用于在疗法、尤其是在哺乳动物(特别是人)的心力衰竭的预防或治疗中使用的具有化学式(I)的化合物或具有化学式(I)的化合物的一种药学上可接受的盐。
在再一个另外的实施例中，提供了一种用于在疗法、尤其是在哺乳动物(特别是人)的高血压的预防或治疗中使用的具有化学式(I)的化合物或具有化学式(I)的化合物的一种药学上可接受的盐。
在再一个另外的实施例中，提供了一种用于在疗法、尤其是在哺乳动物(特别是人)的内皮功能障碍的预防或治疗中使用的具有化学式(I)的化合物或具有化学式(I)的化合物的一种药学上可接受的盐。
在再一个另外的实施例中，提供了一种用于在疗法、尤其是在哺乳动物(特别是人)的炎性疾病的预防或治疗中使用的具有化学式(I)的化合物或具有化学式(I)的化合物的一种药学上可接受的盐。
根据另一方面，提供了一种用于制备具有化学式(I)的化合物或具有化学式(I)的化合物的药学上可接受的盐的方法，以及在其制备中使用的中间体。
在此例示的具有化学式(I)的化合物当在一个MR结合测定中进行测试(例如以下描述的测试A)时，在低于50μM的浓度下竞争醛固酮结合，优选地具有小于50μM的IC50。这些具有化学式(I)的化合物还通过体内分离所希望的作用和不希望的作用而展示有希望的药理学分布。
这些和其他实施例在此在下文中更详细地描述，其中通过阅读本说明书，另外的方面将是对于本领域的技术人员显而易见的。
附图简要说明
图1显示根据实例4a，方法B制备的实例4a的X-射线粉末衍射图：2-{(3S)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺。
详细说明
在本说明书中，术语“调节剂”用于描述一种化合物，该化合物表现出不同的受体激动作用和/或拮抗作用，或者完全激动作用和/或拮抗作用、或部分激动作用和/或拮抗作用。
为避免疑义，应了解，如果在本说明书中某一基团经“上文所定义(defined above)”限定，那么所述基团涵盖首次出现且最广泛的定义以及对该基团的每一和所有其他定义。
在一方面，提供了具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1和R2是如在化学式(I)中所定义的。
在一个实施例中，R1是CONH2，并且
R2选自H、F、Cl或Br。
在另一个实施例中，R1是CONH2，并且
R2是H。
仍在另一个实施例中，R1是CONH2，并且
R2是F。
仍在另一个实施例中，R1是CONHCH3，并且
R2选自H、F、Cl或Br。
仍在另一个实施例中，R1是CONHCH3，并且
R2是H。
仍在另一个实施例中，R1是CONHCH3，并且
R2是F。
在一个实施例中，这些具有化学式(I)的化合物是具有构形(S)的单一对映异构体。
在另一个实施例中，这些具有化学式(I)的化合物是具有构形(R)的单一对映异构体。
在又另一个实施例中，这些具有化学式(I)的化合物是外消旋体或外消旋混合物。
可以组合一个或多个以上实施例，来提供进一步的具体实施例。
在一个实施例中，具有化学式(I)的化合物选自：
2-{4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺，
N-甲基-2-{4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺，
N-甲基-2-{(3S)-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺，
N-甲基-2-{(3R)-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺，
2-{7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺，
2-{(3S)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺，
2-{(3R)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺，
2-{7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺，
2-{(3S)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺，
2-{(3R)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺，
2-{7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺，
2-{(3S)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺，
2-{(3R)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺，
2-{7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺，
2-{(3S)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺，
2-{(3R)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺，
2-{7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺，
2-{(3S)-7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺，
2-{(3R)-7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺，
2-{7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺，
2-{(3S)-7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺，
2-{(3R)-7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺；以及
其药学上可接受的盐。
应注意，这些具体化合物中的任一种可以从任何在此提及的实施例中被放弃。
另一个实施例是一种可通过在此披露的任何方法或实例获得的产物。
药理学特性
这些具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐被认为可用于预防或治疗哺乳动物中的(特别是人类)心血管、炎症、代谢和肾脏病症，包括但不局限于心力衰竭、高血压、慢性肾脏疾病、糖尿病性肾病、内皮功能障碍、糖尿病、眼部脉管系统疾病。
为了避免疑问，如此处使用的，术语“治疗”包括治疗性和/或预防性治疗。
当在此描述的一种化合物或盐作为用于治疗一种病症的疗法给予时，“治疗有效量”是足以减少或完全减轻该病症的症状或其他有害作用、治愈该病症、逆转、完全阻止或减缓该病症的进展或降低该病症变恶化的风险的一个量。
在此所述的化合物因此适用于这些病症的治疗性和/或预防性治疗两者。
在此所述的化合物与现有技术中已知的化合物相比具有以下优点：这些化合物可以是更有效的、毒性更低的、选择性更高的、更有效力的，产生更少副作用，更容易被吸收和/或具有更好的药物代谢动力学特征(例如更高口服生物利用度和/或更低清除率)。
组合疗法
具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐也可以与用于治疗以上病症的其他化合物结合给予。
在另一个实施例中，提供了一种组合疗法，其中具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和第二活性成分同时、依序或混合给予，以用于治疗以上列举的一种或多种病症。这种组合可以与一种或多种另外的活性成分组合使用。
在此描述的化合物可以与以下药剂组合用于治疗心血管、代谢以及肾脏疾病
●心脏治疗药、
●抗高血压药、
●利尿药、
●外周血管扩张药、
●调脂药、
●抗糖尿病药、
●抗炎药、
●或抗凝血剂。
以上的实例包括但不限于，洋地黄糖苷、抗心律失常剂、钙通道拮抗剂、ACE抑制剂、血管紧张素受体阻断剂、内皮素受体阻断剂、β-阻断剂、噻嗪类利尿剂、髓袢利尿剂、胆固醇合成抑制剂如他汀类(例如瑞舒伐他汀(Rosuvastatin))、胆固醇吸收抑制剂、胆固醇酯转移蛋白(CETP)抑制剂、抗糖尿病药物如胰岛素和类似物、GLP-1类似物、磺胺类药物、二肽基肽酶4抑制剂、噻唑烷二酮类、SGLT-2抑制剂和抗炎药物如NSAID和CCR2拮抗剂、抗凝血剂如肝素、凝血酶抑制剂和Xa因子抑制剂、血小板聚集抑制剂以及P2X7拮抗剂。
当用于组合疗法时，在此考虑到，可以按单一组合物、完全分开的组合物、或它们的组合来给予具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和其他活性成分。在此还考虑到，可以同时地、同步地、依序地、或分开地给予这些活性成分。组合疗法的一种或多种具体组合物和一个或多个给药频率将取决于多种多样的因素，包括例如给药途径，正治疗的病症，患者的物种，当组合为单一组合物时活性成分之间的任何潜在相互作用，当它们被给予至动物患者时活性成分之间的任何相互作用，以及医师(在人患者的背景下)、兽医(在非人患者的背景下)、以及本领域其他技术人员已知的不同其他因素。
药物组合物
提供了一种治疗其中需要调节MR的一种病症的方法，该方法包括向患有或易患这种病症的人给予治疗有效量的具有化学式(I)的化合物。
具有化学式(I)的化合物将通常经由口服、局部、肠胃外、静脉内、肌肉内、皮下或以其他可注射方式、颊、直肠、阴道、经皮和/或鼻途径和/或经由吸入、以包含活性成分或其一种药学上可接受的盐的药用制剂形式、以一种药学上可接受的剂型给予。取决于待治疗的病症和患者以及给药途径，可以按变化剂量给予这些组合物。用于选择和制备适合的药物配制品的常规程序描述于例如制药学—剂型设计科学(Pharmaceuticals-The Science of Dosage Form Designs)，M.E.奥尔顿(M.E.Aulton)，丘吉尔利文斯顿出版社(Churchill Livingstone)，第2版2002中。
在人的治疗性治疗中具有化学式(I)的化合物的适合每日剂量是约0.0001-100mg/kg体重，优选0.01-10mg/kg体重。
口服配制品是优选的，特别地是片剂或胶囊，它们可以通过本领域技术人员已知的方法来配制以便提供在0.007mg至700mg范围内的活性化合物剂量，例如1mg、3mg、5mg、10mg、25mg、50mg、100mg、以及250mg。
给予的最佳剂量和频率将取决于正治疗的具体病症和它的严重程度；患者的物种；具体患者的年龄、性别、体型和体重、饮食以及总体身体状况；脑/体重量比；患者可能正在服用的其他药物；给药途径；配方；以及医师和本领域其他技术人员已知的不同其他因素。
根据另一个方面，因此提供了一种药物配制品，该药物配制品包含一种具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的衍生物与一种药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体的混合物。
具有化学式(I)的化合物可以按总配制品的重量计以从0.1％至99.5％(如从0.5％至95％)的浓度存在于药物配制品中。
化合物的制备
具有化学式(I)的化合物和它们的盐可以根据以下方案和实例的任何一个或多个过程、或任何已知的适用于化学上相关的化合物的制备的方法进行制备。本领域技术人员将容易理解地，以下制备程序的条件和方法的已知变体可以用来制备这些化合物。
具有化学式(I)的化合物可以通过以下方法进行制备。
方案1
具有化学式(I)的化合物(其中R1和R2是如以上所定义的)可以通过根据方案1的酰胺偶联进行制备。本领域普通技术人员理解到，存在许多用于这种反应类型的适合方法。该反应例如可以通过T3P或PCl3促进。它可以在碱(例如TEA或DIPEA)的存在下进行，并且在升高的温度下在有机溶剂中(例如EtOAc、BuOAc、甲苯或DMA)中进行。保护基团可以用于敏感的官能团(例如TBDPS)用于羟基基团或MPM用于磺酰胺。
本领域普通技术人员理解到，存在许多用于化学式(I)的R1和R2转换的适合的方法。这些方法中的一些在下面给出。
方案2
具有化学式(Ib)的化合物可以通过水解具有化学式(Ia)的酯进行制备(其中R1是如对化学式(I)所定义的，并且R3是烷基基团)。该反应可以使用碱(例如LiOH或NaOH)、在溶剂(像THF、MeOH和H2O或这些溶剂的混合物)中、在环境温度或升高的温度下进行。
通过使用适当的偶联剂将它们和适合的胺或胺盐反应，具有化学式(Ib)的羧酸可以转化为具有化学式(Ic)的酰胺(其中R4是H或C1-4烷基)。本领域普通技术人员理解到，使用偶联剂存在多个用于这种类型转化的适合的方法。该反应可以被例如PyBOP、T3P、TBTU、酰卤形成或酸酐形成试剂促进。该反应可以在适合的碱(例如TEA或NMM)存在下进行，并且可以在环境温度中、在有机溶剂(例如EtOAc、THF、DMF或DCM或这些溶剂的混合物)中方便地进行。可替代地，在溶剂(例如MeOH、EtOH或这些溶剂的混合物)中，具有化学式(Ic)的酰胺可以通过使具有化学式(Ia)的酯和适当的胺反应进行制备。
具有化学式(II)的化合物可以通过以下描述的方法进行制备。
方案3
具有化学式(II)的化合物可以通过将具有化学式(VI)的化合物(其中R1和R2是如在化学式(I)中所定义的)还原和环化进行制备。本领域普通技术人员理解到，存在许多用于这种反应类型的适合的方法。使用催化剂(例如钯碳)在溶剂(例如THF、MeOH或EtOH或这些溶剂的混合物)中，硝基基团的还原可以在1-10巴下通过氢化完成。可以使用酸(例如AcOH)。
具有化学式(VII)的化合物的环化反应可以例如通过使用还原剂(例如NaBH(OAc)3)的还原氨化来促进。这可以在环境温度下在溶剂(例如1,2-二氯乙烷和AcOH)中完成。
本领域普通技术人员理解到，存在许多用于制备具有化学式(VI)化合物的适合方法。例如可以通过具有化学式(IV)的化合物和具有化学式(V)的化合物(其中LG是适合的离去基团(例如Br或Cl))的烷基化反应进行制备。在环境温度或升高的温度下，可以使用多种碱(例如K2CO3)在溶剂(例如DMF或NMP)中完成烷基化反应。
如在方案4中显示，具有化学式(II)的化合物可以通过使具有化学式(X)的化合物(其中R1和R2是如对化学式(I)所定义的)和具有化学式(XI)的有机金属化合物(其中R1是如对化学式(I)所定义的)反应，随后通过还原中间体半缩醛胺来形成。
方案4
该有机金属化合物可以是一种格氏试剂，并且该反应可在低至升高的温度下，在溶剂(例如THF)中完成。可以使用一种适合的还原剂(例如NaBH4)还原中间体半缩醛胺。
可替代地，具有化学式(II)的化合物可以通过如显示在方案4中的霍纳尔-沃兹沃思-埃蒙斯(Horner-Wadsworth-Emmons)类型的反应，使用具有化学式(XII)的半缩醛胺(其中PG是适合的保护基团(例如Boc))和具有化学式(XIII)的化合物(其中R2是如在化学式(I)中所定义的并且R1选自CON(PG)2、CON(PG)C1-4烷基、或C(O)2C1-4烷基，其中PG是适合的保护基团(例如MPM))制得。可以使用碱(例如LiHMDS)，并且该反应可在低至环境温度下、在溶剂(例如THF)中进行。使用适合的方法去除该保护基团或这些保护基团，以得到具有化学式(II)的化合物。
具有化学式(XII)的化合物可以通过保护和还原具有化学式(X)的化合物制得。可以使用在文献中已知的方法附接适合的保护基团(例如Boc)。以下还原反应可以在溶剂(里如THF)中在低温度下，通过还原剂(例如LiEt3BH)进行。
具有化学式(X)的化合物可以通过具有化学式(IX)的化合物的还原以及环化反应形成。本领域普通技术人员理解到，存在许多用于这种反应类型的适合的方法。该还原反应可以例如在溶剂(例如AcOH)中，在升高的温度下用还原剂(例如铁)进行。
本领域技术人员理解，存在许多用于制备具有化学式(IX)化合物的适合方法。如显示在方案4中，例如可以通过将具有化学式(IV)的化合物和具有化学式(VIII)的化合物(其中LG是适合的离去基团(例如Br或Cl))的烷基化反应进行制备。该烷基化反应可以在溶剂(例如DMF或NMP)中，在环境温度或升高的温度下，使用碱(例如K2CO3)完成。
如显示在方案5，具有化学式(IIb)的化合物可以通过将具有化学式(XV)的化合物(其中R1和R2是如在化学式(I)中所定义的，并且R3是如在化学式(Ia)所定义的)还原和环化进行制备。
方案5
本领域普通技术人员理解到，存在许多用于这种反应类型的适合方法。该还原反应可以例如在溶剂(例如AcOH)中，在升高的温度下用还原剂(例如铁)进行。
本领域普通技术人员理解到，存在许多用于制备具有化学式(XV)化合物的适合方法。例如可以通过具有化学式(IV)的化合物和具有化学式(XIV)的化合物(其中R3是如对化学式(Ia)所定义的，并且LG是适合的离去基团(例如Br或Cl))的烷基化反应进行制备。该烷基化反应可以在溶剂(例如THF、DMF或NMP)中，在环境温度或升高的温度下，使用有机或无机碱(例如i-PrEt2N、TEA、DBU或K2CO3)完成。
方案6
具有化学式(IIc)的化合物可以通过不对称还原具有化学式(XVIII)的化合物(其中R1和R2是如在化学式(I)中所定义的，并且R3是如在化学式(Ia)中所定义的，并且Y＝NH或O)来形成。该还原反应可以在5-50巴下在升高的温度下，使用钌、铑或铱手性催化剂(例如但不限于，[(R)-BinapRuCl(p-cym)]Cl、(S,S)[Ph-PERhCOD]BF4、[Ir(COD)Cl]2/(R)-Taniaphos(Ph)、[Ir(COD)Cl]2/(R)-PPhos、[Ir(COD)Cl]2/(R)-XyPPhos、Rh(COD)2BF4/(1R、1'R、2S、2'S)Duanphos)，在添加剂(路易斯或布朗斯台德酸、或有机碱、或碘)(如通过手性催化剂((S,S)[Ph-PERhCOD]BF4和Zn(OTf)2所示例的)的存在下、在溶剂(如EtOH)中通过氢化作用实现。
具有化学式(XVIII)的化合物可以通过具有化学式(XVI)的化合物和具有化学式(XVII)的化合物(其中LG是离去基团(例如氯))的烷基化和环化反应进行制备。这可以在溶剂(例如NMP)中在升高的温度下，使用碱(例如K2CO3)完成，或在溶剂(例如THF或EtOH)在升高的温度下，使用碱(例如DIPEA、DBU或TEA)完成。
具有化学式的化合物(XVI)可以通过具有化学式(IV)的化合物的还原反应进行制备。本领域普通技术人员理解到，存在许多于这种类型的反应的适合的方法，例如通过使用在水中的Na2S2O4和碱(例如K2CO3)。
官能团的保护和脱保护描述于有机合成中的保护基团(Protective Groups in Organic Synthesis)，第4版，T.W.格林(T.W.Greene)和P.G.M.伍兹(P.G.M.Wuts)，威利-仪器出版社(Wiley-Interscience)(2006)和保护基团(Protecting Groups)，第3版，P.J.科辛斯基(P.J.Kocienski)，乔治蒂姆出版社(Georg Thieme Verlag)(2005)中。
另一个实施例涵盖具有化学式(I)的化合物的药学上可接受的盐。
一种具有化学式(I)的化合物的盐可以是有利的，这是由于一个或多个它的化学的或物理的特性，如在不同温度和湿度下的稳定性，或在H2O、油、或其他溶剂中的所希望的溶解度。在一些实例中，盐可以用于帮助分离或纯化该化合物。在一些实施例中(特别是在该盐旨在用于给予至动物，例如人，或是用于制造旨在用于给予至动物的化合物或盐的试剂的情况下)，该盐是药学上可接受的。
术语“药学上可接受的”用于表征如根据合理的医学判断，适合使用的一个部分(例如，盐、剂型、或赋形剂)。一般来说，药学上可接受的部分具有超过该部分可能具有的任何有害作用的一个或多个益处。有害作用可以包括例如过度毒性、刺激、过敏反应、以及其他问题和并发症。
在化合物是足够酸性的情况下，药学上可接受的盐包括但不限于：碱金属盐，例如，Na或K，碱土金属盐，例如Ca或Mg，或有机胺盐。在该化合物具有足够碱性的情况下，药学上可接受的盐包括但不限于无机或有机酸加成盐。
可能存在不止一个阳离子或阴离子，这取决于带电官能团数和阳离子或阴离子的化合价。
关于适合的盐的综述，参见伯杰(Berge)等人，药物科学杂志(J.Pharm.Sci.)，1977，66，1-19或药用盐手册：特性、选择和使用(Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,selection and use)，P.H.斯特尔(P.H.Stahl)、P.G.维穆斯(P.G.Vermuth)，IUPAC，威利-VCH出版社(Wiley-VCH)，2002。
在一种酸或碱共形成剂在室温下为固体并且在具有化学式(I)的化合物与这种酸或碱共形成剂之间不存在质子转移或仅存在部分质子转移的情况下，可以产生该共形成剂与具有化学式(I)的化合物的一种共晶体而不是一种盐。在此涵盖具有化学式(I)的化合物的所有这类共晶体形式。
还应了解，具有化学式(I)的某些化合物可以以溶剂化形式(例如水合物)存在，包括具有化学式(I)的化合物的药学上可接受的盐的溶剂化物。
在另一个实施例中，具有化学式(I)的某些化合物可以作为外消旋体和外消旋混合物、单一对映异构体、单独非对映异构体和非对映异构体混合物存在。具有化学式(I)的某些化合物还可以包含键联(例如，碳-碳键、碳-氢键如酰胺键)，其中键旋转围绕该具体键联受限制，例如由一个环键或双键的存在而产生的限制。可以使用常规技术，例如色谱法或分步结晶来分离立体异构体，或者这些立体异构体可以通过立体选择合成来制备。
在另一个实施例中，具有化学式(I)的化合物涵盖具有化学式(I)的化合物的任何同位素标记的(或“放射性标记的”)衍生物。这样一种衍生物是一种具有化学式(I)的化合物的衍生物，其中一个或多个原子被具有不同于在自然中典型发现的原子质量或质量数的原子质量或质量数的原子取代。可以被并入的放射性核素的实例包括2H(对于氘还被书写为“D”)。
在另一个实施例中，具有化学式(I)的化合物可以按一种前药形式给予，该前药在人或动物体内分解以便得到一种具有化学式(I)的化合物。前药的实例包括具有化学式(I)的化合物的体内可水解的酯。
包含羧基或羟基基团的具有化学式(I)的化合物的体内可水解的(或可裂解的)酯是例如在人体或动物体内水解产生母体酸或醇的药学上可接受的酯。针对酯前药衍生物的实例，参见：药物代谢研究最新进展(Curr.Drug.Metab.)2003，4，461。
各种其他形式的前药是在本领域已知的。针对前药衍生物的实例，参见：药物发现自然评论(Nature Reviews Drug Discovery)2008，7，255以及其中引用的参考文献。
实例
以下实例是非限制性实例。以下命名的中间体和实例是使用ACD/实验室(ACD/Labs)2012进行命名的。在这些实例中，HRMS光谱数据通过使用在XEVO、LCTp系统上的TOF-MS获得，来自沃特斯(Waters)，安捷伦(Agilent)q-TOF6530或布鲁克(Bruker)micrOTOF-Q。
使用LC-安捷伦1100，acquity hss或acquity beh LC系统将质谱记录在LC-MS系统(由水zq、w3100或sqd电喷射组成)。
1H NMR测量在Jeol EX270Eclipse，Bruker 400、500和600光谱仪上进行，除非另有说明在环境温度下，在270、400、500和600MHz的1H频率下分别进行操作。用溶剂作为内标，以ppm给出化学位移。使用Biotage硅胶KP-Sil Snap筒或Merck硅胶60(0.063-0.200mm)进行快速色谱法分离。使用标准玻璃柱或塑料-柱或在Biotage SP1或SP4系统上进行快速色谱法。
在微波反应器中进行的反应在Biotage引发剂中进行。在中进行的反应使用填充的催化剂筒在来自ThalesNano的连续流速加氢反应器中进行。用于实验的相分离器是可从Biotage获得的ISOLUTE相分离柱。
HPLC分离在用具有梯度Trilution LC v.1.4软件和UV/VIS检测器155的Gilson HPLC系统中进行，使用XBridge C18柱(10μm 250x 19ID mm或10μm 250x 50ID mm)和ACN在H2O/ACN/NH395/5/0.2缓冲液中的梯度或Kromasil C8柱(10μm 250x 20ID mm或10μm 250x 50ID mm)和ACN在H2O/ACN/FA 95/5/0.2缓冲液中的梯度之一。用于较小柱的流量是19mL/min以及用于较大的柱的流量是100mL/min。可替代地，使用具有MS引发部分收集的沃特斯级分Lynx净化系统(Waters Fraction Lynx Purification System)，使用Sunfire Prep C18柱(5μm OBD，19x 150mm)和ACN在0.1mM FA(pH＝3)的梯度或Xbridge C18柱(5μm OBD，19x 150mm)和ACN在0.2％NH3(pH＝10)的梯度。在沃特斯(Waters)ZQ单四极或沃特斯(Waters)3100单四极之一上记录质谱，两者都配备气动辅助电喷雾接口。可替代地，使用具有MS引发部分收集的沃特斯(Waters)100SFC MS指导净化系统，使用Phenomenex Luna Hilic柱(5μm 250x 30ID mm)或沃特斯(Waters)Viridis 2-EP柱(5μm 250x 30ID mm)之一，或等度或使用在120巴下在40℃下MeOH/DEA 100/0.5在CO2中的梯度。在沃特斯(Waters)ZQ单四极或沃特斯(Waters)3100单四极之一上记录质谱，两者都配备气动辅助电喷雾接口。
根据标准方法进行X-射线衍射分析，这些方法可以见于例如A.I.基泰戈罗茨基(A.I.Kitaigorodsky)，(1973)，分子晶体和分子(Molecular Crystals and Molecules)，学术出版社(Academic Press)，纽约；C.W.邦恩(C.W.Bunn)，(1948)，化学结晶学(Chemical Crystallography)，克拉伦登出版社(Clarendon Press)，伦敦；或H.P.克卢格(H.P.Klug)和L.E.亚历山大(L.E.Alexander)(1974)，X-射线衍射程序(X-ray Diffraction Procedures)，约翰威利父子出版公司(John Wiley and Sons),纽约。用作为一种内部参考的Corundum测量X-射线粉末衍射数据。通过将一种样品安装在一个零背景容器硅单晶上并且将该样品铺展成一个薄层来测定X-射线粉末衍射(在此被称为XRPD)图。用一个θ-θPANalytical X’Pert PRO(X-射线镍过滤的Cu辐射波长，电压45kV，灯丝发射40mA)来记录粉末X-射线衍射。使用自动可变发散和抗散射狭缝并且使这些样品在测量期间旋转。使用0.013°步长和44.37秒计数时间连同一个PIXCEL检测器(有效长度3.35°2θ)从2-50°2θ扫描样品。以布拉格-布伦塔诺(Bragg-Brentano)几何学获得X-射线粉末衍射(XRPD)图。已知可以获得取决于测量条件(如，所使用的设备或机器)而具有一个或多个测量误差的X射线粉末衍射图(詹金斯，R(Jenkins,R)和斯耐德，R.L.(Snyder,R.L.)“X-射线粉末衍射学介绍(Introduction to X-Ray Powder Diffractometry)”约翰威利父子出版公司1996；邦恩，C.W.(1948)，化学结晶学，克拉伦登出版社，伦敦；克卢格，H.P.和亚历山大，L.E.(1974)，X-射线衍射程序)。X射线粉末衍射领域的技术人员将意识到峰值的相对强度可以被例如大小超过30微米并且非统一长宽比的颗粒影响，这可能影响样品的分析。此外，应了解强度可能取决于实验条件和样品制备(例如优选取向)而波动。以下定义用于相对强度(％)：25％-100％，vs(非常强)；10％-25％，s(强)；3％-10％，m(中等)；1％-3％，w(弱)。技术人员还将意识到反射位置可以被该样品位于衍射计中的精确高度以及该衍射计的零校准影响。样品的表面平面度也可能具有小的影响。因此，所呈现的衍射图数据不应视为绝对值。总体而言，X射线粉末衍射图中衍射角的测量误差可以为约±0.2°2-θ，并且当考虑X射线粉末衍射数据时，应将该测量误差度考虑在内。
使用铂金埃尔默(Perkin Elmer)341确定旋光度。比旋光度报告为(溶剂，c＝1)，其中c＝1意指10mg/mL并且意指使用Na线在20℃下确定该旋光度。
用于在小的有机化合物中手性中心的绝对构型测定的若干种方法是普遍使用的，这些方法包括单晶X-射线衍射、NMR与手性衍生化结合、基于合成转移，旋光度和ECD的构造性证明。一种最近的方法是VCD，其可以以适当的尺寸以及柔性施用于大多数药物。它依赖于实验的和一个计算的光谱的比较，其中后者根据玻尔兹曼分布的分子的所有低能构象异构体的单个色谱的平均值。该方法可以非常快速的，因为在溶液中获取光谱。在单个晶体的获得是困难和耗时的情况下，它是尤其有价值的。已经公布了很多实例，也可以施用于类药性化合物(光谱应用(Appl.Spectrosc.)2011，65，699，有机生物化学(Org.Biomol.Chem.)，2012，10，4208，生物有机化学与医药化学快报(Bioorg.Med.Chem.Lett.)，2013，14，4019，药物化学杂志(J.Med.Chem.)2014，57，477)。
缩写
使用了以下缩写
ACN 乙腈
AcOH 乙酸
aq. aq.
Boc 叔丁氧羰基
br 宽峰
BuOAc 乙酸丁酯
BuLi 正-丁基锂
C 摄氏
Calcd 计算的
CV 柱体积
d 二重峰
dd 双二重峰
dba 1,5-二苯基戊-1,4-二烯-3-酮
DBU 2,3,4,6,7,8,9,10-八氢嘧啶并[1,2-a]氮杂卓
DCM 二氯甲烷
DIBAL-H 二异丁基氢化铝
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
DIPHOS 双(二苯基膦基)乙烷
DMA N,N-二甲基乙酰胺
DMAP 4-(二甲氨基)吡啶
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMHA HCl N,O-二甲基羟胺盐酸盐
ECD 电子圆二色光谱
ee 对映异构体过量
Et2O 乙醚
DMSO 二甲基亚砜
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
FA 甲酸
Fe(acac)3 三((Z)-4-氧代戊-2-烯-2-基氧基)铁
g 克
H 小时
HPLC 高效液相色谱法
HRMS 高分辨质谱
Hz 赫兹
J 偶联常数
LC 液相色谱法
LBD 配体结合域
LiHMDS 双(三甲基硅烷基)胺基锂
M 多重峰
MCPBA 3-氯过氧苯甲酸
MeOH 甲醇
MEA 甲酸
Mg 毫克
Mhz 兆赫兹
Min 分钟
mL 毫升
Mmol 毫摩尔
MS 质谱
MPM 4-甲氧苄基
MTBE 甲基叔丁醚
NMM N-甲基吗啉
NMP N-甲基吡咯烷酮
NMR 核磁共振
OAc 乙酸盐
PE 石油醚
Pd2(dba)3 三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)
PyBOP (1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基氧基)三吡咯烷-1-六氟磷酸鏻(V)
q 四重峰
rt 室温
S 单峰
sat. 饱和的
T3P 1-丙基膦酸环酐
T 三重峰
TBAF 四-正-丁基氟化铵
TBDPS 叔丁基二苯基甲硅烷基
TBPTA 叔丁基苯基二硫代次膦酸
TBTU O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸
t-BuOH 叔丁醇
TFA 三氟乙酸
Tf 三氟甲磺酸盐
THF 四氢呋喃
UV 紫外线
VCD 振动圆二色光谱
Xant Phos 9,9-二甲基-4,5-双(二苯基膦基)呫吨
中间体的制备
中间体1
(2E)-4-(2-硝基苯氧基)丁-2-烯酸甲酯
在室温下，将甲基-(2E)-4-溴丁-2-烯酸酯(28.2g，0.158mol)逐滴添加到在N,N-二甲基甲酰胺(240mL)中的2-硝基苯酚(20g、0.144mol)和K2CO3(29.8g，21.6mol)中。将所得混合物在室温下搅拌2h。将该混合物用EtOAc(2.0L)稀释并用水(1.0L)、饱和水性Na2CO3(1.0L)和盐水(1.0L)洗涤。将有机相分离，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，以得到呈固体的所希望的产物(27.4g，80％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ3.69(3H,s),5.00(2H,dd),6.16(1H,td),7.04(1H,td),7.16(1H,t),7.36(1H,d),7.67(1H,ddd),7.93(1H,dd)。
MS m/z 238(M+H)+。
中间体2
3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基乙酸甲酯
在室温下，将铁粉尘(28.7g，0.51mol)加入到在乙酸(304mL)和水(30.4mL)中的中间体1(20.3g，0.086mol)中。将所得悬浮溶液在80℃下搅拌2.5h。在真空中，将这些溶剂通过蒸发去除并且添加500mL的EtOAc。将固体滤出并且用EtOAc洗涤。将所得溶液用水(500mL)洗涤。将该水相用EtOAc(2x 500mL)反萃取。将合并的有机层用饱和水性NaHCO3(500mL)和盐水(500mL)洗涤。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并且通过在真空下旋转蒸发进行浓缩，以得到呈黄色油的标题化合物(17.0g，96％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.47-2.59(2H,m),3.65(3H,s),3.69-3.74(1H,m),3.87(1H,dd),4.12(1H,dd),5.80(1H,s),6.49(1H,ddd),6.62(1H,dd),6.67-6.70(2H,m)。
MS m/z 208(M+H)+。
中间体3
{4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸甲酯
在室温下，将T3P(50％溶液在EtOAc中，61.5g，96.6mmol)添加至在EtOAc(125mL)中的3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-羧酸(10.3g，53.1mmol)、3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基乙酸甲酯(中间体2，10.0g，48.3mmol)和TEA(26.8mL，193.2mmol)。将所得混合物在75℃搅拌16h。将所得溶液用350mL的EtOAc稀释并且用饱和水性NaHCO3溶液(160mL)、0.5M HCl溶液(160mL)和盐水(160mL)洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发以得到粗产物。将该粗产物通过从MeOH中重结晶而纯化，以得到呈白色固体的标题化合物(10.1g，55％)。
MS m/z 383(M+H)+。
中间体4
{4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯
在室温下，将T3P(50％溶液在EtOAc中，132.4g，0.208mol)添加至在EtOAc(139mL)中的3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-羧酸(22.1g，0.114mol)、乙基-2-(3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基)乙酸酯(23.0g，0.104mol)和TEA(57.9mL，0.416mol)。将所得混合物在75℃搅拌16h。将所得溶液用800mL的EtOAc稀释并且用饱和水性NaHCO3溶液(300mL)、0.5M HCl溶液(300mL)和盐水(300mL)洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发以得到粗产物。将该粗产物通过从MeOH中重结晶而纯化，以得到呈白色固体的标题化合物(14.5g，35％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ1.17(3H,t),2.54(2H,d),4.01-4.12(2H,m),4.35(2H,d),4.65(2H,s),4.87(1H,t),6.71(1H,dt),6.92(2H,d),7.01(2H,dt),7.09(1H,d),10.81(1H,brs)。
MS m/z 397(M+H)+。
中间体5
{4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸
将NaOH(2M，0.39mL，0.78mmol)添加至{4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯(中间体4，154mg，0.39mmol)在THF(2mL)/水(2mL)/EtOH(4mL)混合物中的浆液中，以给出澄清溶液。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并且然后加入1M HCl(10mL)并用EtOAc(3x 10mL)萃取该混合物。将合并的有机层穿过相分离筒干燥并且在真空中浓缩至干燥，以给出呈白色固体的标题化合物(146mg，102％)(含有按重量计3％EtOAc)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.41-2.48(m,2H),4.23-4.4(m,2H),4.64(s,2H),4.73-4.84(m,1H),6.72(t,1H),6.89-6.96(m,3H),6.96-7.07(m,2H),7.08(d,1H),10.85(s,1H),12.45(br s,1H)。
HRMS m/z计算为[C19H16N2O6+H+]：369.1086，发现369.1083。
中间体6
叔丁基7-氟-3-氧代-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸酯
将7-氟-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮(7.0g，41.9mmol)和二碳酸二叔丁酯(10.6mL，46.1mmol)溶解于THF(130mL)中。添加DMAP(0.512g，4.19mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。添加EtOAc(200mL)并且将该混合物用HCl(0.5M，50mL)、饱和水性NaHCO3(100mL)和盐水洗涤。将混合物经过相分离器干燥并且蒸发，以给出呈粗制油的标题化合物(11.6g，104％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.62(s,9H),4.57(s,2H),6.73-6.82(m,2H),7.19-7.26(m,1H)。
中间体7
叔丁基7-氟-3-羟基-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸酯
将叔丁基7-氟-3-氧代-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸酯(中间体6，2.22g，8.31mmol)溶解于THF(20mL)中，并且冷却至-78℃。以将反应温度保持在低于-70℃的速率添加DIBAL-H(1M在甲苯中，10.8mL，10.8mmol)，并且此后，将该反应在-78℃下搅拌50min。除去冷却并且将该反应用NH4Cl(饱和水性10mL)淬灭。将混合物达到室温。将该反应混合物用DCM和Rochelle’s盐(30％水性的，100mL)稀释并且用DCM(2x 100mL)萃取。将有机物合并，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，经过相分离器过滤并且浓缩，以给出呈白色固体的标题化合物(2.23g，100％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.58(s,10H),4.09(dd,1H),4.29(dd,1H),5.87-5.99(m,1H),6.62-6.75(m,2H),7.91(s,1H)。
中间体8
叔丁基3-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-氟-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸酯
步骤1.在-78℃下，将三乙基硼氢化锂(1M在THF中，52.1mL，52.1mmol)逐滴加入叔丁基-7-氟-3-氧代-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸酯(中间体6，11.6g，43.4mmol)在THF(180mL)中的冷却(干冰/丙酮)溶液中。在-78℃下将该反应混合物搅拌持续1.5h。添加饱和的水性Na2CO3(55mL)并且将混合物加热至大约-20℃。逐滴添加H2O2(30％在水中，55mL)同时保持低温。在-10℃下，将该反应混合物搅拌30min。将该混合物通过硅藻土过滤，用THF洗涤插头。在旋转蒸发器上浓缩到约150mL。添加EtOAc(200mL)。将该混合物用盐水洗涤，通过相分离器干燥并在真空中蒸发。获得呈黄色固体的粗半缩醛胺(中间体7)并且未经纯化使用。
步骤2.在0℃下，将LiHMDS(1M在THF中，87mL，87mmol)缓慢加入(温度<5℃)至在THF(60mL)中的2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(17.4mL，87mmol)中。将该反应混合物搅拌15min。将来自上文的粗半缩醛胺(中间体7)溶解于THF(90mL)中，并且滴加至该冷却的溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌1h。去除冰浴并且将该反应在室温下搅拌5h。添加另外的LiHMDS(1M在THF中，21.7mL，21.7mmol)并且将该反应在室温下搅拌过夜。另外的霍纳尔-沃兹沃思-埃蒙斯-试剂通过混合在THF(20mL)中的2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(4.34mL，21.7mmol)和LiHMDS(1M在THF中，21.7mL，21.7mmol)同时在冰上冷却进行制备。在冰上搅拌30min。将该溶液小心的添加至该反应混合物中，并且在室温下连续搅拌4h。添加EtOAc(300mL)，用饱和水性Na2CO3(250mL)、饱和水性NaHCO3(100mL)、HCl(0.5M，100mL)和盐水洗涤。将有机层分离并且经Na2SO4干燥并在过滤后干燥。将残余物在KP-SIL 340g柱上通过自动快速色谱法纯化。使用于庚烷中的梯度从5％至25％的EtOAc经过5CV作为流动相。收集标题化合物(6.69g，产率45.4％)，使用波长250/285nm用于检测。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.26(t,3H),1.54(s,9H),2.47(dd,1H),2.57(dd,1H),4.08-4.21(m,3H),4.37(d,1H),5.01(s,1H),6.56-6.69(m,2H),7.79(s,1H)。
MS m/z 340.2(M+H)+。
中间体9
(2E)-4-(5-氟-2-硝基苯氧基)丁-2-烯酸乙酯
在氮气氛下，将3-氟-6-硝基苯酚(200g，1.27mol)、无水K2CO3(202g，1.46mol)和NMP(1.2L)的混合物在25℃下搅拌30min。在2-3min期间添加4-溴巴豆酸乙酯(80％工业级，252mL，1464mmol)将会获得红色悬浮液并且将所得混合物在环境温度下搅拌过夜。然后在搅拌下将淡黄色悬浮液倾倒进入冰-水(8.0L)中。在搅拌1h后过滤掉固体，用水(5x1.0L)、庚烷(4x 0.50L)洗涤，并且然后在50℃在真空中干燥过夜，以得到标题化合物(332g，1.20mmol，98％w/w，95％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.31(t,3H),4.23(q,2H),4.82(dd,2H),6.31(dt,1H),6.71-6.82(m,2H),7.04(dt,1H),8.00(dd,1H)。
中间体10
(7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基)乙酸乙酯
在60℃下在氮气氛下，在1h期间，将溶解于AcOH(1.4L)中的(2E)-4-(5-氟-2-硝苯基氧基)丁-2-烯酸乙酯(中间体9，310g，1.09mol)逐滴添加至铁粉末(325筛，305g，5.47mol)在AcOH(0.90L)中的浆液中。在添加期间将温度保持在60℃-75℃。当完成添加后，在它冷却至室温前将所得混合物在70℃搅拌30min。将固体滤出并用AcOH(2.5L)洗涤。将滤液浓缩至干燥并且将残余物溶解于EtOAc(2.0L)中。将该溶液用柠檬酸(水性的，10％w/w，2x 1.0L)、Na2CO3(10％w/w，500mL)和水(1.5L)洗涤。然后将该溶液浓缩至干燥并且将所获得的残余物溶解于i-PrOAc(500mL)中。再次浓缩至干燥产生残余物，将该残余物通过在硅胶上的柱层析使用庚烷/EtOAc(4:1)作为洗脱液进行纯化。获得呈油的标题化合物(236g，0.986mol，98％w/w，88％产率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.29(t,3H),2.52(d,2H),3.80(qd,1H),3.94(dd,1H),4.20(dt,3H),4.33(s,1H),6.47-6.59(m,3H)。
中间体10a和10b，方法A
[(3S或3R)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
(7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基)乙酸乙酯(433g，1.76mol)的两种对映异构体在装配有ChiralPak AD柱(250x 110mm，20μm粒度)并将EtOH/TEA 100/0.1作为洗脱液的NovaSep SFC上分离。
中间体10a，方法A
[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
收集第一洗脱的化合物并且蒸发，以产生标题化合物[(201g，0.848mol，99.6％ee通过手性HPLC(Chiralpak AD 250x 110mm 20μm，用在室温下的EtOH/TEA 100/0.1洗脱，在270nm检测)并且>99.5％ee通过具有手性位移试剂的F NMR((R)-TBPPTA)，48.3％产率，(c 1.0，ACN)]的同分异构体1。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.29(t,3H),2.52(d,2H),3.81(qd,1H),3.95(dd,1H),4.13-4.25(m,3H),4.33(s,1H),6.46-6.59(m,3H)。
中间体10b，方法A
[(3R)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
收集第二洗脱的化合物并且蒸发，以产生标题化合物[(192g，0.802mol，96.6％ee通过手性HPLC(Chiralpak AD 250x 110mm 20μm，用在室温下的EtOH/TEA 100/0.1洗脱，在270nm检测)并且>96.3％ee通过具有手性位移试剂的F NMR((R)-TBPPTA)，45.7％产率，(c 1.0，ACN)]的同分异构体2。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.29(t,3H),2.52(d,2H),3.81(qd,1H),3.95(dd,1H),4.14-4.25(m,3H),4.33(s,1H),6.46-6.59(m,3H)。
中间体10a，方法B
[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
(S,S)[Ph-BPE Rh COD]BF4(0.10mol％，1.7g)填装至氢化器中随后添加Zn(OTf)2(4.0mol％，30.6g)和乙醇(70mL)。然后将该氢化器用氮气吹扫(3次)。在45℃下，将(2Z)-(7-氟-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸乙酯(中间体11，500g)溶解于乙醇(3930mL)中。使用脱气的乙醇(1000mL)作为管线漂洗，将所得溶液进行脱气(3x真空随后氮气)并且填装至氢化器(N2转移)。将该氢化器用5巴氮气吹扫(3次)然后10巴氢吹扫(3次)。在HPLC指示该反应完成之后，然后在50℃/10巴氢下将反应加热18h(搅拌器1000rpm)。在冷却至室温后，在真空中将溶剂去除并且将残余物和来自三个先前的500g规模反应中的粗产品进行合并。将合并的残余物溶解于EtOAc(400mL)中。添加庚烷(1600mL)并将溶液装载于二氧化硅(2Kg)的衬垫上并且用10％-30％EtOAc洗脱。将产物级分剥离以给出所希望的呈棕色油的产物(2052g，定量的)。1H NMR证实了产物的统一性并且手性HPLC指示99.03％的ee。
1H NMR(270MHz,CDCl3)δ1.26(t,3H),2.49(d,2H),3.78(qd,1H),3.91(dd,1H),4.11-4.22(m,3H),4.32(br s,1H),6.43-6.56(m,3H)。
催化剂筛选(2Z)-(7-氟-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸乙酯(中间体11)转化为[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体10a)。
(a)铑催化剂：
在48孔板中的一般性程序：
配体(0.00044mmol)在DCM(100μL)中的溶液填装至2mL孔中，随后添加到在DCM(100μL)中的金属源(0.0004mmol)中。将该混合物搅拌10min然后蒸发。然后，将(2Z)-(7-氟-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸乙酯(中间体11，0.02mmol)和三氟甲磺酸锌(0.0008mmol)在乙醇(667μL)中的溶液添加至该孔中，并且在155psi压力和50℃下，将所得混合物氢化处理16h，然后对转换为[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体10a)以及产物的对映异构体纯度通过hplc分析。
*e.e.的负值表明产物的(R)-对映异构体是主要组分
(R,R)-BenzP*＝(R,R)-(+)-1,2-双(叔丁基甲基膦基)苯CAS 919778-41-9
R,R-QuinoxP*＝(R,R)-2,3-双(叔丁基甲基膦基)喹喔啉CAS 866081-62-1
S-BINAPINE＝(3S,3’S,4S,4’S,11bS,11’bS)-(+)-4,4'-二-叔丁基-4,4',5,5'-四氢-3,3'-二-3H-联萘酚[2,1-c:1',2'-e]磷杂环庚烯CAS 528854-26-4
(b)钌催化剂
使用单独的金属源和配体在48孔板中的一般性程序：
将配体(0.00044mmol)在DMF(100μL)中的溶液填装至2mL孔中，随后添加在DMF(100μL)中的金属源(0.0002mmol)。在100℃下，将该混合物搅拌30min然后蒸发。然后，将(2Z)-(7-氟-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸乙酯(中间体11，0.02mmol)和85％w/w磷酸水溶液(0.02mmol)在乙醇(667μL)中的溶液添加至该孔中，并且在95-99psi压力和80℃-85℃下，将所得混合物氢化处理16h，然后对转换为[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体10a)以及产物的对映异构体纯度通过hplc进行分析。
使用预成形催化剂和不同量的添加剂在48孔板中的一般性程序：
将在DMF(200μL)中的预成形催化剂(0.00044mmol)填装至2mL孔板中。将该混合物搅拌至溶解然后蒸发。然后，将(2Z)-(7-氟-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸乙酯(中间体11，0.02mmol)和85％w/w磷酸水溶液(不同量)在乙醇(667μL)中的溶液添加至该孔中，并且在95-99psi压力和80℃-85℃下，将所得混合物氢化处理16h，然后对转换为[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体10a)以及产物的对映异构体纯度通过hplc进行分析。
(c)铱催化剂：
在48孔板中的一般性程序：
将配体(0.00044mmol)在DCM(100μL)中的溶液填装至2mL孔中，随后添加在DCM(100μL)中的金属源(0.0004mmol对于[Ir(COD)2]BF4；0.0002mmol对于[Ir(COD)Cl]2)。将该混合物搅拌10min然后蒸发。然后，将(2Z)-(7-氟-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸乙酯(中间体11，0.02mmol)和碘(0.01mmol)在甲苯(667μL)中的溶液添加至该孔中，并且在10巴压力和30℃下，将所得混合物氢化处理16h，然后对转换为[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体10a)以及产物的对映异构体纯度通过hplc进行分析。
中间体10c
[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯，2-萘磺酸盐
(2Z)-(7-氟-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸乙酯(中间体11，20.0g，84mmol)填装至250mL玻璃高压灭菌锅中。用氮气将该高压灭菌锅加压5次至3.5巴并且然后经注射器添加160mL无水乙醇(通过10分钟氮气鼓泡进行脱氧)没有氮气的流动。将Tj设为45℃并且将该搅拌速率设为800rpm并且将该反应器用氮气加压3次至3.5巴。
Rh(S)-Ph-PE(cod)BF4(64mg，0.0796mmol，0.0009当量)和Zn(OTf)2(1.25g，3.4mmol，0.040当量)在20mL的脱气乙醇中的溶液经注射器加入防止氮气流动。用氮气将该高压灭菌锅加压3次至3.5巴然后在用氢加压至9.5巴之前用氢加压两次至3巴。将Tj设为50℃。在气体提取5h之后并且在样品拿出14h后指示100％转换并且99.5％ee。将这种反应的溶液转移到烧瓶中并且称重(141.5g)。
取出20.56g的反应混合物(对应于2.92g，12.2mmol产物)并且添加2-萘磺酸(一水合物)(2.85g，12.6mmol)。形成紧密的沉淀物并且将该混合物加热至80℃以给出澄清的深棕色溶液。冷却至20℃、过滤并且用5mL乙醇漂洗，在40℃下，在真空中干燥后给出呈白色固体的2-[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯，2-萘磺酸盐(4.21g，77％产率-测定校正)。
1H NMR(在DMSO-d6中记录光谱，在Bruker Avance光谱仪上在500Mhz下操作)δ(ppm):8.70(bs,2H),8.16(bs,1H),8.00-7.95(m,1H),7.93-7.88(m,1H),7.87(d,1H,J＝8.6Hz),7.72(dd,1H,J＝8.6Hz J＝1.7Hz),7.55-7.50(m,2H),6.69(dd,1H,J＝8.7Hz J＝5.9Hz),6.64-6.55(m,2H),4.18(dd,1H,J＝10.8HzJ＝2.9Hz),4.1(q,2H,J＝7.1Hz),3.90(dd,1H,J＝10.8Hz J＝6.4Hz),3.71(ddd,1H,J＝6.7Hz J＝6.7Hz J＝2.8Hz),2.56(dd,1H,J＝16.2Hz J＝6.4Hz),2.49(dd,1H,J＝16.2Hz J＝6.9Hz),1.19(t,3H,J＝7.1Hz)。
中间体11，方法A
(2Z)-(7-氟-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸乙酯
将4-氯乙酰乙酸乙酯(1当量，521.6mL)添加至2-氨基-5-氟-苯酚(488.2g)在THF(4883mL)中的溶液中。将反应加热至50℃并且在50℃-60℃下经1h逐滴添加DIPEA(1当量，664.6mL)。将所得反应混合物在50℃下加热6h。1H NMR分析确认该反应完成。将反应冷却至室温并且用MTBE(4883mL)/水(4883mL)分配。将各相分离并且将水相用MTBE(2x 1220mL)萃取。将合并的有机物用20wt％盐水(3x 1220mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并剥离以产生呈深棕色固体的粗制产物。将该粗材料与来自两个另外的反应(都是488.3g规模)的粗产物合并并且经硅胶板纯化；该材料吸收在DCM(600mL)和MTBE(2810mL)中。添加二氧化硅(3kg)随后加入EtOAc(141mL)和庚烷(2669mL)。将得到的悬浮液倾倒在硅胶板(9kg)上并且用在庚烷(11x 10L馏分)中的5％EtOAc洗脱。将产物部分剥离以给出橙色固体(2291g)。将该产物与来自另一个反应的粗产物(120g投入)合并并且经硅胶板再纯化，溶解于DCM(2.2L)中并且加载至硅胶上(12kg)。用在庚烷(17x 10L)中的5％EtOAc洗脱。将产物部分剥离以给出黄色固体(2290g)。将该固体吸收在庚烷(6870mL)中并且加热至溶解(60℃)。将该溶液冷却至40℃并且用来自中等规模反应的纯产物播种，然后冷却至-5℃并且搅拌1h。将所得固体过滤，用冷的庚烷(2x 1L)洗涤并且在在真空中去除溶剂。在真空烘箱中在40℃下进一步干燥产生了所希望的呈膏状-黄色固体的标题化合物(2140g，从该合并的2-氨基-5-氟-苯酚的输入计算72％产率)。
1H NMR(Jeol EX270Eclipse,270MHz,CDCl3)δppm 1.27(t,3H),4.15(q,2H),4.54(s,2H),4.64(s,1H),6.58-6.67(m,2H),6.70-6.78(m,1H),10.10(br.s,1H)。
中间体11，方法B
(2Z)-(7-氟-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸乙酯
将5-氟-2-硝基苯酚(250g，1.591mol)填装至5L不锈钢高压灭菌锅中。填装7.5g的10％Pd/C(Escat 1931)，随后添加1.50L甲醇。将温度设定为20℃并且用氮气将该反应器加压4次至2巴，并且然后施加2巴的氢气压力并且将搅拌器速率设为600rpm。让反应持续15小时(在200分钟后气体吸收停止)随后释放氢气压力并且将用氮气吹扫高压灭菌锅。将反应混合物通过K200过滤器进行过滤并且收集过滤器上的催化剂用甲醇(250mL)漂洗。
将该反应混合物转移至反应器中并且添加乙基-4-氯乙酰乙酸酯(385g，2.368mol，1.5当量)随后添加甲醇(250mL)来漂洗该管线并且将Tj设为40℃。在Ti是35℃的点下将该混合物搅拌30分钟。经45min加入DIPEA(205.6g，1.594mol，1.002当量)。将反应搅拌另外的10分钟在19F NMR处分析显示90％产物。将Tj设为30℃并且在10min后Ti是32℃。添加(2Z)-(7-氟-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸乙酯晶种(20mg，根据实例11，方法A制备)并且将混合物搅拌另外的45min。经1h加入水(500mL)并且然后将水浴温度设为20℃。在另外的1.5小时之后将混合物过滤。将滤饼用75％甲醇水溶液(750mL)洗涤并且在真空中在40℃下干燥，以给出标题产物(261g；68％试验校正的产率)。
中间体12
(2Z)-2-(7-氟-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)-N-甲基乙酰胺
(2Z)-(7-氟-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸乙酯(中间体11，2.0g；8.4mmol)、MeOH(6.0mL)和甲胺(7.3mL的40wt％水性溶液，84.3mmol)的混合物在金属热板上加热至35℃(框温度)并且搅拌16h。获得黑褐色浑浊的溶液。LCMS分析指示起始物质的消耗和产物的形成。将混合物在DCM(80mL)和水(80mL)之间分配。将有机相分离，然后在真空中浓缩并且将残余物通过在40g silicycle二氧化硅柱体上的柱色谱纯化洗脱用0-10％EtOAc：DCM洗脱以获得呈橙色透明固体的标题化合物(1.10g，58.9％)(放置变黑)。
1H NMR(Bruker Avance III 500,500MHz,DMSO-d6)δppm 2.62(d,3H)4.58(s,2H)4.67(s,1H)6.71-6.75(m,1H)6.77-6.80(dd,1H)7.04-7.06(dd,1H),7.61-7.62(m,1H)。
MS m/z 223(M+H)+。
中间体13，方法A
2-[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]-N-甲基-乙酰胺
在20℃下，在500mL夹套式容器中将[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体10a，50.0g，204.2mmol)溶解于MeOH(150mL)中。一次性添加甲胺(在EtOH中的127mL的33％w/w溶液，96g，1.02mol)并且将该混合物在20℃下搅拌过夜。将该溶液进行取样并且通过HPLC分析发现没有达到完成。将反应继续搅拌另外的2h然后添加在EtOH的另外的甲胺(在EtOH中的25.0mL的33％w/w溶液；18.9g；200.8mmol)，并且将溶液在20℃下搅拌过夜。在真空中将该溶液蒸发至呈橙色油，然后添加MeOH(300mL)并且将混合物再蒸发以给出浅褐色固体，将其使用研钵和研杵研磨，然后在真空烘箱中在40℃干燥3h，以产生标题化合物(46.3g，99.2％产率NMR测定98.1％w/w，99.7％当量，通过手性HPLC％)。
1H NMR(Bruker Avance III 400,400MHz,DMSO-d6)δppm 2.26(d,2H)2.59(d,3H)3.55-3.71(m,1H)3.81(dd,1H)4.12(dq,1H)5.59(s,1H),6.41-6.57(m,2H),6.57-6.68(m,1H),7.87(d,1H)。
HRMS(Bruker micrOTOF-Q)计算为[C11H13FN2O2+Na+]：247.085875；发现为：247.084779。
中间体13，方法B
2-[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]-N-甲基-乙酰胺
向2mL反应瓶中添加100μL的1,2-双[(2S,5S)-2,5-二苯基二氧基膦]乙烷(1,5-环辛二烯)铑(I)四氢硼酸酯(0.004M在DCM中，0.0004mmol)的溶液并且将该溶液通过应用真空去除。向其中添加670μL的(2Z或2E)-2-(7-氟-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)-N-甲基乙酰胺(中间体12，0.03M，0.02mmol)的储备液(含有4mol％Zn(OTf)2在MeOH中)。将该容器用氢加压，并且反应在331psi氢在50℃下运行16h以给出完整的转化为理想的(S)-对映异构体>99％ee。
HRMS m/z计算为[C11H13FN2O2+H]+:225.1034；发现225.1045。
中间体14
{7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯
将(7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基)乙酸乙酯(中间体10，1.91g，8.0mmol)、3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-羧酸(1.70g，8.80mmol)和TEA(3.33mL，24.0mmol)溶解于EtOAc(10mL)中。添加T3P(50wt.％在EtOAc中，9.52mL，16.0mmol)，并且将该混合物在回流下加热过夜。将反应混合物用EtOAc(150mL)稀释并且用饱和水性NaHCO3(2x100mL)、0.5M HCl(100mL)和盐水(100mL)洗涤。将有机层通过相分离器干燥并且浓缩，以给出呈灰白色固体的标题化合物(2.68g，产率81％)，将其未经进一步纯化而使用。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.26(t,3H),2.61(qd,2H),4.15-4.22(m,2H),4.30(dd,1H),4.51(d,1H),4.66(s,2H),5.02-5.25(m,1H),6.38-6.48(m,1H),6.65(dd,1H),6.73(br s,1H),6.90(d,1H),7-7.06(m,1H),7.06-7.11(m,1H),8.30(s,1H)。
MS m/z415.2(M+H)+。
中间体14a
{(3S)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯
将3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-羧酸(151g，0.779mol)、N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(370mL，2.12mol)和[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体10a，169g，0.708mol)在乙酸丁酯(800mL)中的混合物在环境中搅拌10min。在10min过程中加入T3P(50wt.％在EtOAc中，844mL，1.42mol)。当完成添加后，在85min(1℃/min)过程中在将温度升高至105℃之前，将所得混合物环境温度下搅拌15min。在105℃下在搅拌40h之后，将反应混合物冷却至5℃并且小心的添加水(800mL)。在环境温度下搅拌1h之后，用NaOH(水性的，2.5M，约1.5L)将pH调节至约10。当pH不再改变时分离各相。将水(1.2L)加入有机相中并且在搅拌下加入HCl(水性的2M，约0.6L)直至水相的pH约为4。将该水相被丢弃同时将有机相用水洗涤(2x 2L)，通过硅藻土(Celite)过滤(蔡茨滤菌器(Seitz filter)，K200)并且浓缩至干燥。将所获得的残余物溶解于EtOAc(400mL)中并且将该溶液浓缩至干燥，以产生呈种褐色泡沫的粗标题化合物(278g，0.671mol，88％w/w，83％产率)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.17(t,3H),2.53(dd,2H),4.06(qdd,2H),4.36(d,2H),4.65(s,2H),4.86(t,1H),6.62(td,1H),6.84(dd,1H),6.94(d,2H),7.03(dd,1H),7.07(d,1H),10.82(s,1H)。
MS m/z415.5(M+H)+。
中间体15
{7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸
将溶解于水(7.50mL)中的LiOH(0.208g，8.69mmol)添加至{7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯(中间体14，1.2g，2.90mmol)在THF(15mL)中的溶液中。将该混合物在室温下搅拌1.5h。添加EtOAc(40mL)随后添加氯化氢(1M，11.6mL，11.6mmol)和水(20mL)。将各相分离，并且将有机层用盐水(30mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下蒸发。获得呈固体的标题化合物(1.19g，106％)并且将其未经进一步纯化使用。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ2.44(dd,1H),2.51-2.53(m,1H),4.26-4.4(m,2H),4.64(s,2H),4.76(s,1H),6.64(td,1H),6.83(dd,1H),6.95(d,1H),6.98-7.16(m,3H),10.84(s,1H)。没有检测到酸CO2H质子。
HRMS(ESI+)m/z计算为[C19H15FN2O6+H+]:387.0992，发现387.0995。
中间体16
叔丁基7-氯-3-氧代-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸酯
将DMAP(0.158g，1.30mmol)添加至7-氯-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮(2.38g，13.0mmol)和二-叔丁基碳酸氢钠(3.58mL，15.6mmol)在THF(70mL)中的混合物中。将混合物在室温下搅拌2.5h。添加EtOAc(100mL)。将该混合物用HCl(0.25M，50mL)、饱和水性NaHCO3(50mL)和盐水洗涤，穿过相分离器干燥并且蒸发。获得呈粗制的油的标题化合物(3.89g，106％)并且将其未经进一步纯化而使用。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.83(s,9H),4.78(s,2H),7.24(dd,1H),7.27(d,1H),7.39(d,1H)。
中间体17
叔丁基7-氯-3-羟基-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸酯
在-78℃下，在N2(g)下，将三乙基硼氢化锂(13.75mL，13.75mmol)在THF中的1M溶液逐滴添加至叔丁基7-氯-3-氧代-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸酯(中间体16，3.25g，11.5mmol)在无水THF(60mL)中的溶液中。在-78℃下搅拌45min之后，将该混合物用Na2CO3(饱和水性，25mL)进行处理；然后在-15℃下缓慢地添加H2O2(35％以水性，25mL)。将该混合物在室温下搅拌过夜，然后过滤。将滤液在真空中浓缩并且将残余物用EtOAc萃取(2x 100mL)。将有机相用盐水进行洗涤(100mL)，通过穿过相分离器干燥，并且在减压下进行浓缩，给出呈灰白色固体的标题化合物(3.29g，101％)，将其未经进一步纯化而使用。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.57(s,9H),3.31(br s,1H),4.06(dd,1H),4.27(dd,1H),5.91(t,1H),6.91(dd,1H),6.95(d,1H),7.88(d,1H)。
中间体18
叔丁基7-氯-3-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸酯
在0℃下，在氮气下，将LiHMDS(23.0mL，23.0mmol)在THF中的1M溶液逐滴添加至2-(二乙氧基膦酰基)乙酸乙酯(4.57mL，23.0mmol)在THF(30mL)中的溶液中，并且将所得混合物搅拌10min，其中在叔丁基7-氯-3-羟基-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸酯(中间体17，3.29g，11.5mmol)溶解于THF(30mL)中之后，在0℃下逐滴添加。在氮气下，将反应混合物在室温下搅拌1h，其中然后在加入水(100mL)之后并且将该混合物用EtOAc萃取(3x 75mL)。将合并的有机层用盐水进行洗涤(100mL)，通过穿过相分离器干燥，并且浓缩以给出呈棕色油的粗标题化合物(4.36g，106％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.24(t,3H),1.52(s,9H),2.46(dd,1H),2.57(dd,1H),4.03-4.2(m,3H),4.34(dd,1H),4.98(t,1H),6.78-6.93(m,2H),7.80(br s,1H)。
MS m/z 356(M+H)+。
中间体19
(2E或2Z)-(7-氯-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸乙酯
在20℃下，将4-氯-3-氧代丁酸乙酯(60.1g，0.36mol)添加至5-氯-2-氨基酚(43.4g，0.30mol)在THF(434mL)中的充分搅拌的溶液中。将所得混合物搅拌30min，然后在50℃下，逐滴添加TEA(36.8g，0.36mol)。将所得溶液在这个温度下搅拌16h。在真空中将有机溶液去除。将该粗产物用EtOAc在PE中从0％至1.6％通过硅胶柱色谱法纯化。在环己烷中将该产物通过重结晶进一步纯化。这导致呈淡黄色固体的标题化合物(53.8g，70％)。
1H NMR(400MHz,D M S O-d6)δ1.20(3H,t),4.11(2H、q)、4.68(2H,s),4.78(1H,s)、6.97(1H、dd),7.00(1H,d),7.31(1H,d)、10.18(1H,s)。
MS m/z 254(M+H)+。
中间体20
(7-氯-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基)乙酸乙酯
在室温下，将叔丁基7-氯-3-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸酯(中间体18，1.98g，5.56mmol)在DCM(10mL)/TFA(5mL，67.3mmol)中的溶液搅拌2.5h。将该混合物浓缩，溶解于DCM(50mL)中，并且用饱和水性NaHCO3(2x 50mL)洗涤，然后通过穿过相分离器干燥，并且浓缩，以给出1.52g的油。将该化合物通过制备型HPLC(XBridge C18柱(10μm 250x 50ID mm),使用15％-55％ACN在H2O/ACN/NH395/5/0.2缓冲液中的梯度，用100mL/min的流速经20min，在240nm处UV检测)纯化。去除溶剂以给出呈油的标题化合物(0.67g，47％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.29(t,3H),2.53(d,2H),3.83(qd,1H),3.94(dd,1H),4.15-4.23(m,3H),6.52(d,1H),6.74(dd,1H),6.79(d,1H)。该谱图还在δ1.61和4.40处显示两个宽单峰，分别指定为H2O和NH。
MS m/z 256(M+H)+。
中间体20a和20b，方法A
[(3R和3S)-7-氯-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
将(7-氯-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基)乙酸乙酯(中间体20，13.7g，53.7mmol)的对映异构体通过手性分离(在20℃，使用ChiralPak AD柱(20μm，250x 50mm)用EtOH/TEA 100/0.1的流动相，用120mL/min的流速并且在270nm处检测)进行分离。
中间体20a，方法A
[(3S)-7-氯-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
收集第一洗脱的化合物并且蒸发，以产生标题化合物(6.64g，48.4％，99.2％ee)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.29(t,3H),2.53(d,2H),3.78-3.87(m,1H),3.94(dd,1H),4.16-4.24(m,3H),4.46(s,1H),6.52(d,1H),6.74(dd,1H),6.79(d,1H)。
旋光度(ACN，c＝1)。
中间体20b，方法A
[(3R)-7-氯-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
收集第二洗脱的化合物并且蒸发，产生标题化合物(6.47g，47.1％，98.9％ee)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.29(t,3H),2.53(d,2H),3.78-3.88(m,1H),3.94(dd,1H),4.15-4.25(m,3H),4.46(s,1H),6.52(d,1H),6.74(dd,1H),6.79(d,1H)。
旋光度(ACN，c＝1)。
绝对构型使用VCD通过对于每个样品使15mg的固体材料第一次溶解于140-150μl CDCl3中来确定。然后将溶液转移至0.100mm BaF2细胞中，并且VCD光谱用六小时各自在装备有双源和双光弹性调节剂的BioToolsChiralIR仪器中获得。分辨率为4cm-1。用于低能量几何形状的蒙特卡罗(Monte Carlo)分子力学搜索被指导用于两种对映异构体(R和S)的轻微略截短结构(使用甲酯代替乙基酯)。宏观模型(MacroModel)在Maestro图形界面(Inc.)被用来产生用于构象异构体的起始坐标。所有构象异构体在最低能量构象异构体的5kcal/摩尔内被用作用于密度泛函理论(DFT)的起始点在Gaussian09之内最小化。优化的结构、谐波振动频率/强度、VCD旋转强度、以及在STP下游离的能量(包括零点能量)从每个构象异构体的来确定。在这些计算中，使用功能性B3LYP和基础组6-31G*。使用内部构建程序产生对于每个构象的红外和VCD光谱的模拟以使洛伦兹函数(conformation)线形状(12cm-1线宽度)适合计算的光谱，从而允许模拟和实验光谱之间的直接比较。
将获得自CDCl3的中间体20a和中间体20b的实验VCD光谱与这两种对映异构体的模拟光谱比较。该对照展示中间体20a是S对映异构体并且中间体20b具有R构形。最主要条带证实了该解释。
中间体20a，方法B
[(3S)-7-氯-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
在20℃，将三氟甲磺酸盐锌(2.87g，7.91mmol)添加至(2E或Z)-(7-氯-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸酯(中间体19，20g，79.1mmol)在EtOH(150mL，HPLC级)中的充分搅拌溶液中。将所得混合物抽真空并且用N2吹扫若干次，然后在20℃下添加(+)-1,2-双(2s,5s)-2,5-二苯基磷鎓基乙烷(1,5-环辛二烯)铑(I)四氢硼酸盐(0.51g，0.63mmol)。将所得溶液抽真空并且再用N2吹扫若干次。然后在60℃在H2(15巴压力)下，将反应搅拌16h。将混合物浓缩。将该粗产物用EtOAc在PE中从0至20％通过硅胶柱色谱法进行纯化。将纯的产物部分进行浓缩。这导致了呈橙色油的标题化合物(18.9g，93.6％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.28(3H,t),2.52(2H,d),3.78-3.85(1H,m),3.93(1H,dd),4.15-4.22(3H,m),4.44(1H,brs),6.50(1H,d),6.73(1H,dd),6.78(1H,d)。
MS m/z 256(M+H)+。
(c＝0.1g/100mL，CH3CN，T＝17℃)。
中间体21
{7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯
将(7-氯-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基)乙酸乙酯(中间体20，0.67g，2.62mmol)、3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-羧酸(0.607g，3.14mmol)和TEA(1.090mL，7.86mmol)溶解于EtOAc(15mL)中。然后，添加T3P(50wt.％在EtOAc中，3.12mL，5.24mmol)并且在160℃下将该混合物在微波反应器中下加热2h。添加EtOAc(100mL)并且将该混合物用饱和水性的NaHCO3(100mL)、1M HCl(100mL)和盐水(100mL)洗涤。将混合物通过穿过相分离器干燥。在减压下的浓缩给出了1.14g的油，该油通过快速色谱法在硅胶上使用EtOAc在庚烷中从12％至100％的梯度作为洗脱液进行纯化。浓缩至干燥以给出标题化合物(0.530g，46.9％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.26(t,3H),2.61(qd,2H),4.13-4.2(m,2H),4.30(dd,1H),4.48-4.55(m,1H),4.66(s,2H),4.95-5.24(m,1H),6.62-6.71(m,2H),6.89(d,1H),6.92-6.95(m,1H),7.03(dd,1H),7.11(d,1H),8.58(s,1H)。
MS m/z431(M+H)+。
中间体21a
{(3S)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯
将DIPEA(12.38mL，71.08mmol)和T3P(50％在乙酸丁酯中，30.2g，47.4mmol)添加至[(3S)-7-氯-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体20a，6.06g，23.7mmol)和3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-羧酸(5.418g，28.05mmol)在乙酸丁酯(60mL)中的悬浮液中。将该反应混合物在氧化铝砖中在117℃下加热16h。允许该反应混合物冷却至室温。将该混合物用EtOAc(150mL)稀释并且用饱和水性Na2CO3(100+30mL)、柠檬酸(1M、50mL)、HCl(1M，50mL)和盐水(100mL)洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到成红色泡沫油的粗产物。将残余物在KP-SIL 340g柱上通过自动快速色谱法纯化。使用于庚烷中的梯度从30％至75％的EtOAc经过7CV作为流动相。收集该产物(使用在波长254/280nm处的检测)。获得呈泡沫状固体的标题化合物(7.62g，74.6％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.15-1.18(m,3H),2.51-2.55(m,2H),4.03-4.1(m,2H),4.34-4.41(m,2H),4.65(s,2H),4.86(t,1H),6.80(dd,1H),6.87(d,1H),6.94(d,1H),7.01-7.07(m,2H),7.08(d,1H),10.82(s,1H)。
MS m/z431.1(M+H)+。
中间体21a，方法B
{(3S)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯
在20℃下，将T3P(50％溶液在EtOAc中，146g，230mmol)添加至[(3S)-7-氯-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体20a，29.4g，115mmol)在n-BuOAc(100mL)、3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-羧酸(22.7g，118mmol)和DIPEA(44.5g，345mmol)中的溶液中。将所得混合物在140℃下搅拌24小时。将该反应混合物冷却并且用EtOAc(500mL)稀释。将所得混合物用200mL的饱和碳酸氢钠、200mL的1M柠檬酸和200mL的1M HCl洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。将残余物施加到硅胶柱上并且用EtOAc/PE(1/10至1/1)洗脱。将纯的级分在真空中浓缩以得到呈黄色油的标题化合物(41g，83％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ1.17(3H,t),2.50-2.58(2H,m),3.99-4.12(2H,m),4.38(2H,s),4.65(2H,s),4.87(1H,t),6.78-6.99(3H,m),7.00-7.09(3H,m),10.81(1H,s)。
MS m/z 431(M+H)+。
中间体21b
{(3R)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯
将3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-6-羧酸(1.68g，8.6mmol)、DIPEA(4.1mL，23.5mmol)和[(3R)-7-氯-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体20b，2.0g，7.8mmol)在乙酸丁酯(9mL)中的混合物在环境中搅拌15min。在2min期间添加T3P(50％w/w在BuOAc中，9.3mL，15.6mmol)。当完成添加后，在50min(2℃/min)期间在将温度升高至120℃之前，将所得混合物在环境温度下搅拌10min。在120℃下在搅拌40h之后，将反应混合物冷却至20℃并且小心的添加水(20mL)，随后添加EtOAc(20mL)。在环境温度下搅拌30min之后，用6％Na2CO3(水性的，约20mL)将pH调节至约10。当pH不再改变时分离各相。将有机相用柠檬酸(10％水溶液，2x 20mL)、NaHCO3(8％水溶液，20mL)、和盐水(20mL)洗涤。将有机相经MgSO4干燥，通过硅石栓过滤并且将该溶液浓缩至干燥以产生呈褐色泡沫的粗制标题化合物(3.25g，0.622mmol，95％w/w，80％产率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.27(t,3H),2.54-2.71(m,2H),4.17(qd,2H),4.31(dd,1H),4.53(dd,1H),4.66(s,2H),5.12(t,1H),6.66(dd,2H),6.90(d,1H),6.95(d,1H),7.04(dd,1H),7.12(d,1H),8.59(s,1H)。
MS m/z431.3(M+H)+。
中间体22
{7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸
将7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯(中间体21，42mg，0.10mmol)和LiOH(1M，0.146mL，0.15mmol)在THF(2mL)中的混合物在室温下搅拌2h。添加另外的LiOH(1M，0.070mL，0.07mmol)并且将该混合物搅拌2h。添加HCl(1M，5mL)并且将水相用DCM萃取(3x 5mL)。将合并的有机层穿过相分离筒干燥并且在真空中浓缩，以提供呈白色固体的标题化合物(38.0mg，97％)。
MS m/z403.1(M+H)+。
中间体22a
{(3S)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸
将LiOH(1.40g，58.3mmol)溶解于水(50mL)中并且添加至在THF(50mL)中的(S)-乙基{7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸酯(中间体21a，5.71g，11.7mmol)中。将反应混合物在室温下搅拌75min。添加EtOAc(150mL)。用HCl(1M，100+50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥并且在过滤后将溶剂在真空中蒸发，以产生粗制标题化合物(82mg，107％)，该化合物进一步在实例5a的合成中使用。
1H NMR在纯的材料(回收自实例5a的合成)上获得：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.4-2.48(m,1H),2.51-2.56(m,1H),4.29-4.4(m,2H),4.65(s,2H),4.71-4.87(m,1H),6.81(dd,1H),6.93-7.03(m,2H),7.03-7.1(m,3H),10.84(s,1H),12.53(s,1H)。
MS m/z403.1(M+H)+。
中间体23
叔丁基7-溴-3-氧代-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸酯
二-叔丁基碳酸氢钠(919mg，4.21mmol)和DMAP(42.9mg，0.35mmol)添加至7-溴-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮(800mg，3.51mmol)在THF(20mL)中的溶液中。在室温下搅拌2.5h。添加EtOAc(100mL)并且将该混合物用HCl(30mL，0.25M)、饱和水性Na2CO3(30mL)和盐水(30mL)洗涤，通过相分离器干燥并且将溶剂蒸发，以给出粗制标题化合物(其可以直接用于中间体24的合成)(1.16g，100％)。
中间体24
叔丁基7-溴-3-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸酯
步骤1.在-78℃下，将三乙基硼氢化锂(1M在THF中，4.23mL、4.23mmol)逐滴添加至叔丁基7-溴-3-氧代-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸甲酯(中间体23，1.16g，3.52mmol)在THF(20mL)中的溶液中。将该混合物在-78℃下搅拌1h，此时添加Na2CO3(饱和水性，4mL)并且将该混合物回温至约-20℃。逐滴加入H2O2(30％，4mL)同时保持低温。该混合物在约-10℃搅拌20min。将混合物通过硅藻土过滤，并且将填料用THF洗涤。添加EtOAc(50mL)并且将该混合物并用盐水进行洗涤(20mL)，穿过相分离器干燥并且在减压下蒸发。获得呈黄色油的粗半缩醛并且未经纯化使用。
步骤2.在另一个烧瓶中将LiHMDS(7.75mL，7.75mmol)缓慢加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(1.55mL，7.75mmol)在THF(8mL)中的溶液中，使温度保持小于5℃。将混合物在室温下搅拌30min，并且然后冷却至0℃。将来自上文步骤1的粗缩醛胺溶解于THF(10mL)中，并且在0℃下逐滴添加。除去冰浴且在室温下搅拌反应2h。添加EtOAc(70mL)并且将该混合物用饱和水性Na2CO3(2x 30mL)、HCl(0.25M，20mL)和盐水洗涤，穿过相分离器干燥并且在减压下蒸发。将残余物在KP-SIL 50g柱上通过自动快速色谱法纯化。使用于庚烷中的梯度从5％至25％的EtOAc经过6CV作为流动相。收集该产物(使用在波长250/285nm处的检测)。在去除溶剂后获得呈油状的标题化合物(0.556g，39.4％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.26(t,3H),1.54(s,9H),2.48(dd,1H),2.58(dd,1H),4.08-4.20(m,3H),4.35(dd,1H),4.99(s,1H),7.02(dd,1H),7.05(d,1H),7.75(s,1H)。
中间体25
(2E或2Z)-(7-溴-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸乙酯
在室温下，将4-氯-3-氧代丁酸乙酯(45mL，333mmol)添加至2-氨基-5-溴苯酚(55.7g，296mmol)在THF(400mL)中的溶液中。将混合物加热至50℃，并且将TEA(57mL，326mmol)经30min缓慢加入。将所得混合物在该温度下搅拌16h。将该混合物用水(500mL)稀释并且用EOAc萃取(500mL x 3)。将合并的有机相用用盐水洗涤(500mL x 2)，经无水Na2SO4干燥，过滤并通过蒸发进行浓缩。该残余物通过硅胶层析(使用EtOAc在PE中从1.25％至2％的溶剂梯度)纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以得到呈淡黄色固体的标题化合物(47g，56％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.29(3H,t),4.18(2H,q),4.56(2H,s),4.70(1H,s),6.70(1H,d),7.02-7.06(2H,m),10.14(1H,brs)。
MS m/z 298(M+H)+。
中间体26
(2E)-4-(5-溴-2-硝苯基氧基)丁-2-烯酸乙酯
在室温下，将5-溴-2-硝基苯酚(10g，45.9mmol)和K2CO3(8.24g，59.6mmol)悬浮在NMP(81mL)中(亮红色悬浮液)，并且逐滴添加4-溴巴豆酸乙酯(10.26mL，59.63mmol)。将该反应在室温下搅拌过夜(20h)。将该混合物倒入冰/水(500mL)中并且搅拌30min。将沉淀物通过过滤收集并且用水洗涤(2x 200mL)，空气干燥10min并且然后用庚烷洗涤(200mL)。将庚烷(200mL)加入该固体中并且搅拌1h。将固体滤出，用庚烷洗涤(2x 50mL)并在真空中干燥以得到米色固体。获得标题化合物(15.0g，99％)并且将其未经进一步纯化而使用。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.32(t,3H),4.24(q,2H),4.84(dd,2H),6.31(dt,1H),7.04(dt,1H),7.18-7.26(m,2H),7.80(d,1H)。
M S m/z 298(M-H)-。
中间体27，方法A
(7-溴-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基)乙酸乙酯
将叔丁基7-溴-3-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-2,3-二氢-4H-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸酯(中间体24，556mg，1.39mmol)溶解于在二噁烷(5.0mL，162.8mmol)中的氯化氢中，并且将混合物在室温下搅拌2h。将溶剂蒸发并且将残余物溶解于EtOAc(50mL)中，用饱和水性Na2CO3(30mL)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并且在过滤之后蒸发，以给出呈油的标题化合物(399mg，96％)。
MS m/z 300(M+H)+。
中间体27，方法B
(7-溴-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基)乙酸乙酯
在60℃(内部温度，70℃干浴)下，在氮气氛下，将(2E)-4-(5-氟-2-硝苯基氧基)丁-2-烯酸乙酯(中间体26，15.0g，45.4mmol)在乙酸(125mL)中的溶液逐滴添加至铁粉末(10.13g，181.5mmol)和乙酸(50mL，873.6mmol)的浆液中，并且在添加期间将内部温度维持在70℃以下。将该残留反应物用乙酸(25mL)洗涤下去。在60℃下加热该反应混合物持续1.5h。该温度增加至70℃(内部，80℃干浴)并且搅拌另外的1.5h。允许反应混合物冷却至室温过夜。将该混合物用EtOAc(150mL)稀释，通过硅藻土过滤，用EtOAc(2x 100mL)洗涤并且在真空中浓缩。将粗制品溶解于EtOAc(200mL)中并用1M水性的柠檬酸溶液(2x 100mL)洗涤。将有机层用饱和水性Na2CO3(2x 50mL)洗涤。将该有机层进一步用水性柠檬酸(50mL，0.5M)、饱和水性Na2CO3(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机层穿过相分离器过滤并且用二氧化硅(10g)处理10min。将混合物过滤，并且将二氧化硅用EtOAc(2x 50mL)洗涤。将有机层蒸发从以给出一种深棕色油(11g)。将残余物通过自动快速色谱法在一个KP-SIL 340g柱上进行纯化。使用于庚烷中的梯度从5％至40％的EtOAc经过5CV作为流动相。使用波长254/280nm收集该产物。获得呈淡黄色油的标题化合物(10.4g，76％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.29(t,3H),2.53(d,2H),3.78-3.87(m,1H),3.94(dd,1H),4.16-4.23(m,3H),4.47(s,1H),6.47(d,1H),6.88(dd,1H),6.93(d,1H)。
MS m/z 300(M+H)+。
中间体27a和27b
[(3R和3S)-7-溴-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
将2-(7-溴-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-3-基)乙酸乙酯(中间体27，13.73g，45.75mmol)的对映异构体通过手性拆分(在20℃，使用ChiralPakAD柱(20μm，250x 50mm)用EtOH/TEA 100/0.1的流动相，用120mL/min的流速并且在280nm处检测)进行分离。
中间体27a，方法A
[(3S)-7-溴-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
收集第一洗脱的化合物并且蒸发，以产生标题化合物(4.2g，30.6％，99.9％ee)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.29(t,3H),2.53(d,2H),3.78-3.86(m,1H),3.94(dd,1H),4.14-4.24(m,3H),4.47(s,1H),6.47(d,1H),6.87(dd,1H),6.93(d,1H)。
旋光度(ACN，c＝1)。
中间体27b，方法A
[(3R)-7-溴-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
收集第二洗脱的化合物并且蒸发，以产生标题化合物(6.6g，33.5％，99.4％ee)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.29(t,3H),2.53(d,2H),3.78-3.86(m,1H),3.94(dd,1H),4.14-4.24(m,3H),4.47(s,1H),6.47(d,1H),6.87(dd,1H),6.93(d,1H)。
旋光度(ACN，c＝1)。
中间体27a和27b的绝对构型通过记录和比较VCD对于两个对映异构体与那些相应于甲酯计算的来确定(以减少计算构形的数量)。将中间体27a(16.9mg)溶解于170μL CDCl3中。将中间体27b(14.9mg)溶解于150μLCDCl3中。将溶液转移至0.100mm BaF2细胞中，并且VCD采集光谱用六小时各自在装备有双源和双光弹性调节剂的BioTools ChiralIR仪器中获得。分辨率为4cm-1。
用于低能量几何形状的蒙特卡罗(Monte Carlo)分子力学搜索被指导用于两种对映异构体(R和S)的轻微略截短结构(使用甲酯代替乙基酯)。用于模拟中的结构显示在图3中。宏观模型(MacroModel)在Maestro图形界面(Inc.)被用来产生用于构象异构体的起始坐标。所有构象异构体在最低能量构象异构体的5kcal/摩尔内被用作用于密度泛函理论(DFT)的起始点在Gaussian09之内最小化。优化的结构、谐波振动频率/强度、VCD旋转强度、以及在STP下游离的能量(包括零点能量)从每个构象异构体的来确定。在这些计算中，使用功能性B3LYP和基础组6-31G*。使用内部构建程序产生对于每个构象的红外和VCD光谱的模拟以使洛伦兹函数(conformation)线形状(12cm-1线宽度)适合计算的光谱，从而允许模拟和实验光谱之间的直接比较。两个样品的实验光谱与两个甲基酯对映异构体的模拟光谱比较。试验光谱和模拟光谱之间的一致性很高并且中间体27a可以明确地被指定为S对映异构体并且中间体27b指定为R同分异构体。
中间体27a，方法A
[(3S)-7-溴-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
实例27的对映异构体(1.6g，5.3mmol)通过手性拆分进行分离，使用Chiralpak AD-H(5μm，250x 20mm)用40％MeOH在CO2中的流动相，在85巴在35℃下，用47mL/min(40g/mL)的流速并且在254nm处检测。
收集第二洗脱的化合物并且蒸发，以产生标题化合物(277mg，17.3％，99.3％ee)的同分异构体2。
1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.27(3H,t),2.47-2.61(2H,m),3.73-3.80(1H,m),3.93(1H,dd),4.14-4.21(3H,m),6.53(1H,d),6.79-6.83(2H,m)。
MS m/z 300(M+H)+。
中间体27a，方法B
[(3S)-7-溴-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
在室温在N2-气氛下，将Zn(OTf)2(2.4g，6.63mmol)添加至在EtOH(HPLC级，500mL)中的(2E或2Z)-(7-溴-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-亚基)乙酸乙酯(中间体25，47.5g，160mmol)中。在添加(S,S)[Ph-BPE Rh COD]BF4(900mg，0.112mmol)之前，将该混合物抽成真空并用氮气回填若干次。将所得混合物抽真空并且用氢回填若干次。在氢下(15巴)将该混合物在60℃下搅拌16h。在冷却至环境温度之后，将压力释放。通过蒸发除去有机溶剂。将该粗产物通过快速层析法进行纯化(C18材料)并且用洗脱液MeCN在水(含有0.1％NH4HCO3)中梯度从10％至60％。将纯的级分合并并且蒸发至干燥，以提供呈固体的标题化合物(44g，92％产率，ee 100％(SFC分析使用Chiralpak IC-3(0.46x 10cm，3μm)；洗脱液，MeOH(0.15DEA)/CO240/60))。
1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.27(3H,t),2.47-2.61(2H,m),3.73-3.80(1H,m),3.93(1H,dd),4.14-4.21(3H,m),6.53(1H,d),6.79-6.83(2H,m)。
MS m/z 300(M+H)+。
中间体28
{7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯
将TEA(0.737mL，5.32mmol)和T3P(50wt.％在EtOAc中，2.372mL，3.99mmol)添加至(7-溴-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基)乙酸乙酯(中间体27，399mg，1.33mmol)和3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-羧酸(308mg，1.60mmol)在EtOAc(7mL)中溶液中。将该反应混合物在微波反应器中在150℃下加热2h。添加另外的T3P(50％在EtOAc中，1.2mL，2.02mmol)和TEA(0.3mL，2.16mmol)并且将该混合物在微波反应器中在150℃下加热另外的2h。添加EtOAc(50mL)并且将该混合物用饱和水性Na2CO3(3x 30mL)、HCl(30mL，0,5M)和盐水进行洗涤，穿过相分离器干燥并且蒸发。将该化合物通过制备型HPLC(Kromasil C8柱(10μm 250x 50ID mm)，使用35％-75％ACN在H2O/ACN/FA 95/5/0.2缓冲液中的梯度，用100mL/min的流速经20min，在254/280nm处UV检测)纯化。在真空中去除溶剂之后获得标题化合物(366mg，58％)。
MS m/z 475(M+H)+。
中间体28a，方法A
2-[(3S)-7-溴-4-(3-氧代-4H-1,4-苯并噁嗪-6-羰基)-2,3-二氢-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
在250mL三颈烧瓶中，[(3S)-7-溴-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体27a，4.2g，14.0mmol)和3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-6-羧酸(2.73g，14.1mmol)悬浮在乙酸丁酯(40mL)中。添加DIPEA(7.31mL，42.0mmol)，随后添加T3P(50％在BuOAc中)(17.8g，28.0mmol)。在117℃(内部反应温度，加热器设为135℃)下，将反应在氧化铝砖中加热7h。允许反应冷却至室温过夜。将粗反应用EtOAc(150ml)稀释并用饱和水性NaHCO3(100+30mL)、1M柠檬酸水溶液(50mL)、1M HCl(50mL)和盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到呈红色和泡沫状油的粗产物。将残余物通过自动快速色谱法在一个KP-SIL 340g柱上进行纯化。使用于庚烷中的梯度从30％至75％的EtOAc经过5CV作为流动相。使用波长254/280nm收集该产物。获得呈泡沫状固体的标题化合物(4.23g，63.6％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.27(t,3H),2.54-2.7(m,2H),4.14-4.22(m,2H),4.31(dd,1H),4.53(dd,1H),4.66(s,2H),5.12(s,1H),6.62(d,1H),6.80(dd,1H),6.90(d,1H),7.04(dd,1H),7.08-7.14(m,2H),8.51(s,1H)。
MS m/z475(M+H)+。
中间体28a，方法B
2-[(3S)-7-溴-4-(3-氧代-4H-1,4-苯并噁嗪-6-羰基)-2,3-二氢-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯
在室温下，将DIPEA(46.4g，360mmol)添加至在乙酸丁酯(100mL)中的[(3S)-7-溴-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体27a，36g，120mmol)、3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-6-羧酸(28g，144mmol)和2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(50％溶液在EtOAc中)(152.6g，240mmol)中。将所得到的悬浮液在140℃下搅拌持续2小时。将反应混合物用EtOAc(700mL)稀释并且用饱和的NaHCO3(500mL)、1M HCl(500mL)和盐水(500mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发以提供粗产物。该残余物通过硅胶层析(EtOAc在PE中从5％至20％的洗脱液梯度)纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以得到呈灰白色固体的标题化合物(33g，58％)。
1H NMR(300MHz,CDC13)δ1.26(3H,t),2.56-2.64(2H,m),4.16(2H,q),4.30(1H,dd),4.52(1H,d),4.66(2H,s),5.11(1H,t),6.61(1H,d),6.79(1H,dd),6.89(1H,d),7.03(1H,dd),7.11(2H,dd),8.90(1H,brs)。
MS m/z475(M+H)+。
中间体29
{7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸
将LiOH(55.3mg，2.31mmol)溶解于水(3mL)中添加至{7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯(中间体28，366mg，0.77mmol)在THF(6.0mL)中的溶液中。将该混合物在室温下搅拌1.5h。添加EtOAc(40mL)随后添加1M HCl(3.1mL，3.1mmol)和水(20mL)。将各相分离并且将有机层用盐水进行洗涤(30mL)，经Na2SO4干燥，然后蒸发以给出呈种固体的粗标题化合物(372mg，108％)。
MS m/z447(M+H)+。
中间体29a
{(3S)-7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸
将2-[(3S)-7-溴-4-(3-氧代-4H-1,4-苯并噁嗪-6-羰基)-2,3-二氢-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体28a，173mg，0.37mmol)溶解于THF(1.5mL)中。添加溶解于水(1.50mL)中的氢氧化锂(52.5mg，2.19mmol)。在EtOAc(50mL)的加入之前，将该反应在室温下搅拌2h。将有机层用HCl(1M，30mL)和盐水(30mL)洗涤。穿过相分离器干燥并且在减压下蒸发。获得粗制标题化合物(160mg，98％)并且将其未经进一步纯化而使用。
MS m/z447.0(M+H)+。
实例
实例1
2-{4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺
在室温下，将氯甲酸乙酯(0.038mL，0.39mmol)添加至{4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸(中间体5，132mg，0.36mmol)和TEA(0.150mL，1.08mmol)在干的THF(8mL)中的溶液中。在几秒之后，形成浑浊沉淀物。在30min之后，添加氢氧化铵溶液(1mL，26％NH3)并继续搅拌1h。将该混合物在减压下进行浓缩，并且将残余物溶于DCM(15mL)中并用饱和水性NaHCO3(10mL)洗涤(使用相分离器)。当各相分离时，将产物从有机相中沉淀。将有机相浓缩给出呈白色固体的标题化合物(112mg，85％)。进一步通过制备型HPLC纯化产物的一小部分(30mg)(Sunfire C18柱(5μm 150x 19IDmm)使用5％至95％ACN在0.1M FA中的梯度，在pH 3下)以给出标题化合物(16mg，53.3％基于该30mg抽出的样品)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ2.34-2.47(m,2H),4.2-4.36(m,2H),4.66(s,2H),4.71-4.84(m,1H),6.72-6.78(m,1H),6.92-7.14(m,7H),7.42(s,1H),10.83(s,1H)。
HRMS计算为[C19H17N3O5+H+]:368.1246；发现：368.12438(M+H)+。
实例2，方法A
N-甲基-2-{4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺
在室温下，将{4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸(中间体5，50mg，0.14mmol)、甲胺(0.339mL，0.68mmol，2M溶液在THF中)和TEA(0.056mL，0.41mmol)在DMF(1mL)中的溶液用T3P(50wt％在EtOAc中，0.161mL，0.27mmol)处理。将该反应混合物在室温下搅拌过夜并且浓缩。将该粗制材料通过制备型HPLC(XBridge C18柱(5μm 150x 19ID mm)，5％-95％ACN在H2O/ACN/NH395/5/0.2缓冲液的梯度)，以给出标题化合物(40.0mg，77％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ2.36-2.39(m,2H),2.55(d,3H),4.12-4.31(m,2H),4.64(s,2H),4.68-4.87(m,1H),6.73(t,1H),6.89-6.95(m,2H),6.97-7.02(m,2H),7.02-7.06(m,1H),7.07-7.1(m,1H),7.79-7.94(m,1H),10.81(s,1H)。
HRMS计算为[C20H19N3O5+H+]：382.1403；发现：382.1413。
实例2，方法B
N-甲基-2-{4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺
在室温下，将甲胺(375mL)缓慢添加至甲基-2-[4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸酯(中间体3，12.5g，32.7mmol)在MeOH(750mL)中的溶液中。将所得混合物在室温下搅拌16h。在减压下通过蒸发将溶剂去除。将该粗产物通过从MeOH中重结晶而纯化，以得到呈白色固体的标题化合物(12.0g，96％)。这种材料用如上所述的三个批次合并从5.28g，10.68g和12.5g的中间体3以产生5.0g，10.3g和12.0g的标题化合物。将合并批物料悬浮在40mL的MeOH中并且搅拌30min。将悬浮液过滤并且将固体在真空下干燥，以产生35.7g的标题化合物。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.39(2H,d),2.56(3H,d),4.25(2H,s),4.65(2H,s),4.77(1H,t),6.75(1H,ddd),6.91-7.10(6H,m),7.89(1H,q),10.78(1H,s)。
MS m/z 382(M+H)+。
实例2，方法C
N-甲基-2-{4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺
在室温下，将甲胺(370mL)缓慢添加至{4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯(中间体4，10.7g，26.9mmol)在MeOH(640mL)中的溶液中。将所得混合物在室温下搅拌16h。在减压下通过蒸发将溶剂去除。将该粗产物通过从MeOH中重结晶而纯化，以得到呈白色粉末的标题化合物(10.3g，100％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.39(2H,d),2.56(3H,d),4.25(2H,s),4.66(2H,s),4.77(1H,t),6.75(1H,ddd),6.91-7.10(6H,m),7.89(1H,q),10.83(1H,s)。
M S m/z 382(M+H)+。
实例2a和2b，方法D
N-甲基-2-{3S和3R)-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺
实例2的对映异构体(23mg，0.06mmol)通过手性拆分进行分离，使用ReproSil柱(8μm，250x 30mm)用30％EtOH在CO2中的流动相，在150巴在40℃下，用80mL/min的流速并且在250nm处检测。
实例2a，方法D
N-甲基-2-{(3S或3R)-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺
收集第一洗脱的化合物并且蒸发，产生标题化合物(11mg，43.5％，99.4％ee)的同分异构体1。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ2.35-2.59(m,2H),2.70(s,3H),4.31(dd,1H),4.39(d,1H),4.62(s,2H),5.03(t,1H),6.68(t,1H),6.82(d,1H),6.87-6.96(m,2H),6.97-7.03(m,1H),7.03-7.08(m,1H),7.11(dd,1H)。
HRMS计算为[C20H19N3O5+H+]：382.1403；发现：382.1406。
实例2b，方法D
N-甲基-2-{(3S或3R)-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺
收集第二洗脱的化合物并且蒸发，产生标题化合物(10mg，47.8％，99.7％ee)的同分异构体2。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ2.42-2.59(m,2H),2.70(s,3H),4.31(dd,1H),4.39(dd,1H),4.62(s,2H),5.03(t,1H),6.63-6.71(m,1H),6.82(d,1H),6.88-6.97(m,2H),6.97-7.03(m,1H),7.06(d,1H),7.11(dd,1H)。
HRMS计算为[C20H19N3O5+H+]：382.1403；发现：382.1387。
实例3
2-{7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺
将{7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸(中间体15，293mg，0.76mmol)悬浮在DCM(10mL)中。添加TEA(0.631mL，4.55mmol)和PyBOP(520mg，1.00mmol)。添加盐酸氨(0.162mL，4.55mmol)并且将该反应搅拌过夜。将该悬浮液用DCM、水和3.8M HCl(水性)稀释。将该有机层分离并且将水层用DCM萃取一次。将合并非的有机层用饱和水性NaHCO3和盐水洗涤一次，穿过相分离器过滤并且浓缩。将该剩余油通过制备型HPLC(Kromasil C8柱(10μm 250x 50ID mm)，使用10％-50％ACN在H2O/ACN/FA 95/5/0.2缓冲液中的梯度，用100mL/min的流速经20min，在227/254nm处UV检测)纯化。合并包含产物的级分，在真空中浓缩并且最终冷冻干燥，以给出呈白色固体的标题化合物(165mg，56.5％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.37-2.41(m,2H),4.24-4.31(m,2H),4.65(s,2H),4.72-4.78(m,1H),6.65(td,1H),6.84(dd,1H),6.93-6.99(m,2H),7.05-7.14(m,3H),7.40(s,1H),10.83(s,1H)。
MS m/z 386.5(M+H)+。
实例3a和3b
2-{(3S和3R)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺
实例3的对映异构体(165mg，0.43mmol)通过手性拆分进行分离，使用ChiralPak OJ柱(5μm，250x 30mm)用30％EtOH在CO2中的流动相，在175巴在40℃下，用80mL/min的流速并且在290nm处检测。
实例3a
2-{(3S或3R)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺
收集第一洗脱的化合物并且蒸发，产生标题化合物(74mg，44.8％，99.9％ee)的同分异构体1。
旋光度(ACN，c＝1)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ2.57(d,2H),4.23-4.32(m,1H),4.45(d,1H),4.58(s,2H),5.08(s,1H),6.38-6.54(m,2H),6.61-6.89(m,4H),6.96(dd,1H),7.19(d,1H),9.73(s,1H)。
HRMS计算为[C19H16FN3O5+H+]：386.1152；发现：386.1158(M+H)+。
实例3b
2-{(3S或3R)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺
收集第二洗脱的化合物并且蒸发，产生标题化合物(71mg，43.0％，99.7％ee)的同分异构体2。
旋光度(ACN，c＝1)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ2.57(d,2H),4.25-4.32(m,1H),4.45(d,1H),4.59(s,2H),5.04-5.13(m,1H),6.37-6.49(m,2H),6.61-6.88(m,4H),6.97(d,1H),7.19(s,1H),9.68(s,1H)。
HRMS计算为[C19H16FN3O5+H+]：386.1152；发现：386.1157。
实例4
2-{7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
在室温下，将甲胺(2M溶液在THF中，259μL，0.52mmol)添加至{7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸(中间体15，40mg，0.10mmol)和TEA(43μL，0.31mmol)在EtOAc(2mL)中的搅拌悬浮液中。形成厚白色沉淀物。将T3P(50wt.％在EtOAc中，123μL，0.21mmol)添加到混合物导致澄清的淡黄色反应溶液。将该混合物在室温下搅拌过夜。添加EtOAc(10mL)并且将该混合物用饱和水性Na2CO3(5mL)、HCl(1M，5mL)和盐水(5mL)洗涤，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(使用5％MeOH在DCM中作为洗脱液)，溶解于ACN/水(大约5mL，1:4)中和并且冷冻干燥以给出呈白色固体的标题化合物(19mg，46％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.38(d,2H),2.56(d,3H),4.26(s,2H),4.65(s,2H),4.76(br t,1H),6.65(td,1H),6.83(dd,1H),6.96(d,1H),7.03-7.16(m,3H),7.87(q,1H),10.82(s,1H)。
HRMS计算为[C20H18FN3O5+H+]：400.1309；发现：400.1331。
实例4a和4b，方法A
2-{(3S和3R)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
实例4的对映异构体(103mg，0.26mmol)通过手性拆分进行分离，使用ReproSil柱(5μm，250x 30mm)用30％EtOH/DEA 100/0.5在CO2中的流动相，在175巴在40℃下，用80g/min的流速并且在260nm处检测。
实例4a，方法A
2-{(3S)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
收集第一洗脱的化合物并且蒸发，产生标题化合物(33mg，32％，99.9％ee)的同分异构体1。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.38(d,2H),2.56(d,3H),4.26(s,2H),4.65(s,2H),4.71-4.79(m,1H),6.62-6.68(m,1H),6.84(dd,1H),6.96(d,1H),7.03-7.09(m,2H),7.11(br m,1H),7.87(q,1H),10.81(s,1H)。
HRMS计算为[C20H18FN3O5+H+]：400.1309；发现：400.1312。
实例4b，方法A
2-{(3R)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
收集第二洗脱的化合物并且蒸发，产生标题化合物(26mg，25％，99.9％ee)的同分异构体2。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.38(d,2H),2.56(d,3H),4.26(s,2H),4.65(s,2H),4.71-4.8(m,1H),6.65(td,1H),6.84(dd,1H),6.96(d,1H),7.07(d,2H),7.11(s,1H),7.87(q,1H),10.82(br s,1H)。
HRMS计算为[C20H18FN3O5+H+]：400.1309；发现：400.1297。
实例4a，方法B
2-{(3S)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
将{(3S)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯(中间体14a，1648g)吸收在甲醇(10L)中。在<30℃时，添加在乙醇中的甲胺(33wt％，20当量，7490mL)。将所得溶液在室温下搅拌18h。LCMS分析指示该反应不完全。在HPLC指示<1％中间体14a并且其对应的甲酯保留(组合)之后，在室温下将该反应搅拌另外的4h。在真空中将溶剂去除以给出呈茶色固体的粗产物(1719.2g)。这与来自另一批的376g粗产品合并并且将该合并的粗产物(2095g)吸收在IPA(20950mL)中，并且加热至回流。没有获得溶液。自该悬浮液取样，并将样品冷却和过滤用于XRPD分析。这指示该产物为所希望的形式(类型2)。该过滤材料的HPLC分析指示99.2％的纯度，证实纯化已成功。将悬浮液冷却至室温过夜。将固体过滤，用IPA(3x 2L)洗涤且压干。在60℃在真空烘箱中进一步干燥得到呈灰白色固体的标题产物(1632.5g)。1H NMR指示>95％的纯度(0.18％残余物IPA)。将这种材料与来自另一个较小规模的产物合并重结晶(输入250g粗产物)，以给出共1820.7g的标题化合物。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.31-2.42(m,2H),2.55(d,3H),4.25(d,2H),4.64(s,2H),4.68-4.8(m,1H),6.64(td,1H),6.82(dd,1H),6.95(d,1H),7.04-7.07(m,2H),7.09(br s,1H),7.77-7.97(m,1H),10.80(s,1H)。
HRMS计算为[C20H18FN3O5+H+]：400.1309；发现：400.1294。
通过XRPD固体残余物被发现是结晶的并且典型衍射图展示在图1中。特征峰位置在以下列出。
XRPD图2-θ(°)5.6(s),7.4(vs),9.3(vs),13.5(vs),14.8(vs),15.8(vs),16.9(s),18.6(vs),22.3(vs),22.6(vs)。
实例4a，方法C
2-{(3S)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
将3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-羧酸(9.58g，48.0mmol)在搅拌下悬浮于正乙酸丁酯(48mL)中。添加在乙酸乙酯(52.5mL，87.5mmol，50.0％w/w)中的T3P，随后添加DIPEA(3.82mL，21.9mmol)。将所得悬浮液在80℃下加热过夜。经大约90min，将2-[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]-N-甲基乙酰胺(中间体13，10.0g，43.7mmol)分部分的加入并且然后维持在80℃下过夜。添加水(100mL)并该混合物在40℃下搅拌。在40℃下，收集有机相并且用碳酸氢钠水溶液(100mL，5.25％w/w)洗涤。将有机相冷却至10℃并且搅拌过夜。添加异丙醇(100mL)并且通过过滤进行收集固体并且在真空下在40℃干燥。得到呈灰白色固体的标题化合物(9.29g，22.3mmol，95.7％w/w，ee 98.4％，50.9％产率)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.40(d,2H)2.57(d,3H)4.27(s,2H)4.66(s,2H)4.71-4.83(m,1H)6.66(dt,1H)6.84(dd,1H)6.96(d,1H)7.04-7.19(m,3H)7.90(d,1H)10.86(s,1H)。
LCMS(Agilent LC/MSD SL)计算为[C20H18FN3O5+H+]：400.130；发现：400.200。
实例4a，方法D
2-{(3S)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
将3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-羧酸(2.219kg，11.44mol；99.6质量％)填装至100L搪玻璃容器中，随后添加甲苯(9L)。加入[(3S)-7-氟-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体10a，2.970kg，10.39mol，83.7质量％)，并且将混合物在20℃下搅拌。然后在5分钟之内将T3P在2-MeTHF(11.6L，20.8mol，55.7质量％)中的溶液填装至容器中。加入甲苯(3.1L)、吡啶(2.5L)和甲苯(3L)并且将所得混合物在80℃下加热20h，然后冷却至20℃并保持3天。将该混合物加热至50℃并且用水(15L)洗涤。保留该有机相并且将分离的水相用甲苯(14.8L)萃取。在39℃-50℃下，将合并的有机层用碳酸氢钠水溶液(14.8L，11.3mol，6.00质量％)洗涤，然后用水(15L)洗涤。将有机相冷却至21℃，过滤以去除颗粒物，并且将少量收集的固体用甲苯(3L)洗涤。然后通过减压蒸馏将滤液浓缩至4相对体积以产生{(3S)-7-氟-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯在甲苯中的溶液。将有机相再次过滤，添加甲胺(33％w/w)在乙醇(13L，104mol，33.3质量％)中的溶液并且将该混合物并在20℃下搅拌3天。在减压下将该混合物蒸发至干燥，然后用2-丙醇(5L)处理并且再蒸发。再次重复用2-丙醇处理；使用10Lt漂洗至100Lt容器中，并且在旋转蒸发仪中添加这个以收集产物，并且将混合物蒸发至干燥。在真空烘箱中在减压条件下(10兆巴)将收集的固体进一步干燥。该干燥的固体(3.985Kg)填装至干净的干燥的容器中，随后添加2-丙醇(24.5L)，搅拌该混合物并且加热到80℃，在80℃下持续2h，然后冷却至10℃并且在10℃-11℃下持续4天，然后过滤。将产物滤饼用2-丙醇(5L)洗涤，然后在45℃在真空烘箱中干燥，以提供标题产物(3.636Kg；99.4％w/w测定，87.1％产率)。
实例5a
2-{(3S)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺
将PyBOP(127mg，0.24mmol)和TEA(0.141mL，1.02mmol)添加至{(3S)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸(中间体22a，82mg，0.20mmol)在DCM(2mL)中的溶液中。在此之后，添加NH4Cl(43.6mg，0.81mmol)，并且该混合物在室温下搅拌1.5h。添加EtOAc(30mL)并且将该混合物用饱和水性Na2CO3(30mL)、HCl(0.5M，20mL)和盐水(20mL)洗涤。纯化该产物通过制备型HPLC(Phenomenex Luna Hilic柱(5μm 250x 30ID mm)使用10％至45％MeOH/DE 100/0.5的梯度在CO2中，120巴下，经6min，在40℃下)以给出标题化合物(42.0mg，51.3％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ2.35-2.41(m,2H),4.29(d,2H),4.65(s,2H),4.76(s,1H),6.83(dd,1H),6.93-7.01(m,2H),7.01-7.12(m,4H),7.39(s,1H),10.83(s,1H)。
HRMS计算为[C19H16ClN3O5+H+]：402.0857；发现：402.0840。
实例5b
2-{(3R)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺
将{(3R)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯(中间体21b，2.00g，4.64mmol)溶解于氨(7M在MeOH中)(49.7mL，348.2mmol)中密封并且在室温下搅拌45h。将溶剂蒸发并且将残余物(616mg粗棕色油)溶解于DMSO和MeOH中。将该化合物通过制备型HPLC在Kromasil C8柱(10μm 250x 50ID mm)上使用梯度为在H2O/ACN/FA 95/5/0.2缓冲液中的10％-50％ACN，经20min以100mL/min的流速进行纯化。将这些化合物通过UV在253/280nm处检测。将纯的级分合并，并且大部分的ACN被蒸发。将残余物在EtOAc和水之间分配。将合并的有机相在真空中浓缩。添加DMSO/ACN和水观察到沉淀。在真空中将溶剂去除并且将水添加至该残余物并且在室温下搅拌过夜并且过滤以给出根据LCMS的纯标题化合物。分离511mg的灰白色固体，产率27.4％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.35-2.42(m,2H),4.29(s,2H),4.65(s,2H),4.77(d,1H),6.82(dd,1H),6.96(t,2H),7.02-7.12(m,4H),7.39(s,1H),10.83(s,1H)。
HRMS(ESI+)m/z计算为[C19H16ClN3O5+H+]：402.0857，发现402.0864。
实例6，方法A
2-{7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
将{7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯(中间体21，0.39g，0.91mmol)在MeOH(5mL)和33％甲胺(15mL，0.91mmol)在EtOH中的溶液的混合物的浆液在室温下搅拌过夜，给出干净的转化为酰胺。将反应混合物在减压下浓缩，以给出呈白色固体的标题化合物(0.370g，98％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.28-2.41(m,2H),2.56(d,3H),4.21-4.3(m,2H),4.64(s,2H),4.76(t,1H),6.82(dd,1H),6.95(d,1H),7-7.1(m,4H),7.66-7.93(m,1H),10.82(s,1H)。
MS m/z416(M+H)+。
实例6，方法B
2-{7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
在室温下，将2-(7-氯-4-(3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-6-羰基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-3-基)乙酸(中间体22，38mg，0.09mmol)、甲胺(0.236mL，0.47mmol)(2M溶液在THF中)、和TEA(0.039mL，0.28mmol)在EtOAc(2mL)中的混合物用T3P(50wt.％在EtOAc中，0.112mL，0.19mmol)处理。将该反应混合物在室温下搅拌过夜并且浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(Kromasil C8柱(10μm 250x 20ID mm),使用梯度为在H2O/ACN/FA 95/5/0.2缓冲液中的20％-60％ACN，经20min用19mL/min的流速，在240nm处UV检测)纯化。冷冻干燥给出了呈白色粉末的标题化合物(24mg，61％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.34-2.4(m,2H),2.54(d,3H),4.21-4.32(m,2H),4.64(s,2H),4.76(t,1H),6.82(dd,1H),6.95(d,1H),7.01-7.1(m,4H),7.78-7.97(m,1H),10.82(s,1H)。
HRMS计算为[C20H18ClN3O5+H+]：416.1013；发现：416.1007。
实例6a和6b，方法A
2-{(3S和3R)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
实例6的对映异构体(0.45g，1.08mmol)通过手性拆分进行分离，使用ChiralPak AD柱(5μm，250x 30mm)用30％iPrOH在CO2中的流动相，在120巴在40℃下，用120mL/min的流速并且在254nm处检测。
实例6a，方法A
2-{(3S)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
收集第一洗脱的化合物并且蒸发，以产生标题化合物(215mg，48％，99.9％ee)的同分异构体1。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ2.42-2.52(m,2H),2.70(s,3H),4.31(dd,1H),4.39(dd,1H),4.62(s,2H),5.01(t,1H),6.65-6.76dd,1H),6.81-6.92(m,1H),6.92-6.98(m,2H),7.06(d,1H),7.11(dd,1H)。
HRMS计算为[C20H18ClN3O5+H+]：416.1013；发现：416.1026。
实例6b，方法A
2-{(3R)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
收集第二洗脱的化合物并且蒸发，产生标题化合物(198mg，44％，97.3％ee)的同分异构体2。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ2.30-2.57(m,2H),2.71(s,3H),4.32(dd,1H),4.40(dd,1H),4.64(s,2H),5.02(t,1H),6.72(dd,1H),6.83-6.93(m,1H),6.95-7.00(m,2H),7.07(d,1H),7.13(dd,1H)。
HRMS计算为[C20H18ClN3O5+H+]：416.1013；发现：416.1024。
实例6a，方法B
2-{(3S)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
将MEA(30％溶液在EtOH中，175g，1.86mol)添加至{(3S)-7-氯-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸乙酯(中间体21a，40g，92.8mmol)在MeOH(100mL)中的溶液中。将所得溶液在室温下搅拌24h。将所得的混合物通过蒸发浓缩。将该粗产物通过从ACN(300mL)中重结晶而纯化，以得到呈白色固体状的标题化合物(32.7g，85％产率，ee 100％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.38(2H,d),2.56(3H,d),4.23-4.31(2H,m),4.65(2H,s),4.77(1H,t),6.82(1H,dd),6.95(1H,d),7.03-7.09(4H,m),7.86(1H,q),10.71(1H,s)。
HRMS m/z计算为[C20H18ClN3O5+H+]:416.1013，发现416.0991。
实例7
2-{(3S)-7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酰胺
将{(3S)-7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸(中间体29a，160mg，0.36mmol)溶解于DCM(3mL)中。添加PyBOP(223mg，0.43mmol)和TEA(0.248mL，1.79mmol)，随后添加NH4Cl(77mg，1.43mmol)。将该混合物在室温下搅拌过周末。添加EtOAc(40mL)。用饱和水性Na2CO3(2x 30mL)、HCl(0.5M，20mL)和盐水(20mL)洗涤。穿过相分离器干燥并且在减压下蒸发。将残余物使用SFC2-MS系统纯化并且用MeOH在Waters Viridis 2-EP柱(5μ30x 250mm)洗脱。合并同类的组分并且在真空中去除溶剂给出标题化合物(46.1mg，28.9％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ2.31-2.45(m,2H),4.29(d,2H),4.65(s,2H),4.76(s,1H),6.9-7.04(m,4H),7.08(d,2H),7.17(d,1H),7.40(s,1H),10.83(s,1H)。
HRMS(ESI+)m/z计算为[C19H16N3O5+H+]：446.0352，发现446.0346。
实例8
2-{7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
将TEA(0.461mL，3.33mmol)和T3P(50wt.％在EtOAc中，0.989mL，1.66mmol)添加至{7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}乙酸(中间体29，372mg，0.83mmol)在EtOAc(5mL)中的溶液中。将该混合物搅拌5min。添加在THF中的甲胺(1.248mL，2.50mmol)并且将混合物在室温下搅拌2h。添加EtOAc(50mL)并且将该混合物用Na2CO3(40mL)、HCl(1M，30mL)和盐水(30mL)洗涤，穿过相分离器干燥并且蒸发。该化合物通过制备型HPLC(Kromasil C8柱(10μm 250x 50ID mm)(使用梯度为在H2O/ACN/FA95/5/0.2缓冲液中的15％-55％ACN，经20min，用100mL/min的流速，在254/280nm处UV检测)纯化以给出呈白色固体的标题化合物(215mg，56％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.35-2.42(m,2H),2.56(d,3H),4.21-4.32(m,2H),4.65(s,2H),4.78(t,1H),6.89-7.04(m,3H),7.04-7.14(m,2H),7.16(d,1H),7.87(d,1H),10.83(s,1H)。
HRMS计算为[C20H18BrN3O5+H+]:460.0508；发现：460.0506。
实例8a和8b，方法A
2-{(3S和3R)-7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
实例8的对映异构体(132mg，0.29mmol)通过手性拆分进行分离，使用ChiralPak OJ柱(5μm，250x 30mm)用在CO2中的15％MeOH的流动相，在150巴在40℃下，用80mL/min的流速并且在254nm处检测。该产品自t-BuOH冻干。
实例8a，方法A
2-{(3R)-7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
收集第一洗脱的化合物并且蒸发，以产生标题化合物的同分异构体1(53.7mg，40.7％，97.2％ee)。
旋光度(ACN，c＝1)。
HRMS计算为[C20H18BrN3O5+H+]：460.0508；发现：460.0522。
实例8b，方法A
2-{(3S)-7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
收集第二洗脱的化合物并且蒸发，以产生标题化合物(53.1mg，40.2％，98.9％ee)的同分异构体2。
旋光度(ACN，c＝1)。
HRMS计算为[C20H18BrN3O5+H+]：460.0508；发现：460.0535。
实例8b，方法B
2-{(3S)-7-溴-4-[(3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)羰基]-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-3-基}-N-甲基乙酰胺
在室温下，将MEA(33％溶液在EtOH中)(53.6g，570mmol)添加至在MeOH(94mL)中的2-[(3S)-7-溴-4-(3-氧代-4H-1,4-苯并噁嗪-6-羰基)-2,3-二氢-1,4-苯并噁嗪-3-基]乙酸乙酯(中间体28a，18.8g，39.6mmol)中。将所得溶液在25℃下搅拌15h。在真空中将溶剂去除。将该粗产物通过MeCN/MeOH(20:1)重结晶而纯化，以得到呈白色固体状的标题化合物(12.5g，69％产率，ee 100％)。将这种材料与如上所述的三个批次制备的(从5.0g，16.6g和17.0g的起始材料各自产生4.2g，17g和11.5g)的标题化合物合并。将合并的标题化合物自ACN/MeOH重结晶，以得到35.09g标题化合物。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.38(2H,d),2.56(3H,d),4.27(2H,s),4.66(2H,s),4.77(1H,t),6.92-7.02(3H,m),7.06-7.09(2H,m),7.16(1H,d),7.87(1H,q),10.83(1H,s)。
HRMS(ESI+)m/z计算为[C20H18BrN3O5+H+]：460.0508，发现460.0500。
药理学活性
可使用以下测试程序
盐皮质激素结合，测试A
为了鉴别与人类MR LBD的结合，使得闪烁亲近测定法(SPA)适合于384-孔形式。该MR-LBD(氨基酸T729-K985)表示为N-末端与麦芽糖结合蛋白在Hi5昆虫细胞中融合(通过用重组MBP-MR LBD和P23杆状病毒共感染)并且在该测定中使用粗蛋白裂解物。氚标记的醛固酮被作为配体使用以产生闪烁信号，当通过结合至MR LBD引入测定法(SPA)珠的附近时，并且测试化合物亲和力(在IC50值)被定义为将氚标记的醛固酮与MR LBD的结合减少50％的浓度。
简要地，在测试A1中，该测定在室温下在384孔形式中在10mM Tris-HCl，pH 7.5，0.5mM EDTA，20mM NaMoO4，0.1mM DTT和10％甘油中运行。化合物在7(测试A1)或10(测试A2)浓度响应曲线中测试，范围从10nM至10μM(测试A1)或1nM至37μM(测试A2)。在测定中，化合物被点在384-孔PE Opti-板的孔的底部以产生为2％的最终DMSO浓度。预制的MBP-MR/P23溶解产物：将3H-醛固酮混合物(最终试验浓度7μg/mLMBP-MR LBD/P23溶解产物；5nM醛固酮)添加到斑点的化合物的顶部上并且在室温下预孵化1h。在1h之后，将等体积抗兔SPA珠粒(测试A1)或成像珠粒(测试A2)与兔抗-MBP偶联，添加至该测定混合物中，并且在室温下孵育3小时(测试A1)或>8h(测试A2)。闪烁信号的抑制(通过用测试化合物将结合的3H-醛固酮的置换)是通过闪烁计数法进行测量的，使用Microbeta Trilux(Walla)(测试A1)或CCD相机检测使用LEADseeker(珀金埃尔默公司(PerkinElmer))(测试A2)。
盐皮质激素细胞报告基因测定，测试B
为了测试化合物的效能和功效，使用Multidrop将来自冷冻保存的UAS-MR-bla HEK293细胞(英杰公司(Invitrogen)，K1696)新融化批次的25000个细胞加入到384孔平板每个孔中。细胞在没有苯酚红(英杰公司21063-029)的30μl DMEM(含有2％木炭剥离胎牛血清(英杰公司12676-029)、青霉素/链霉素、非必需氨基酸和丙酮酸钠)中生长(根据英杰公司科学实验报告包括的用这些细胞)。在接种时，在37℃下，用5％CO2，将该板孵化4h以允许细胞粘附。来自板中，该板含有在DMSO中的化合物稀释系列，典型跨越10个浓度(10μM至0.5nM最终浓度),使用Beckman FX移液管向每孔加入0.6μL化合物。在添加醛固酮至最终浓度为0.25nM(测试B1)或1nM(测试B2)之前将这些板孵育30min。随后孵化16-20h，通过添加8μL的CCF4(含有根据英杰公司科学实验报告包括的用这些细胞制备底物缓冲)测定β-内酰胺酶活性。在测量荧光之前，将板在黑暗中放置2h，在PherastarFS中用底部读取并且将过滤器设定为在409nm激发和在460和530nm发射收集。在背景扣除之后，计算每个测定点的460/530比率并且将来自三个平行测定板进行平均。通过仅含有醛固酮的孔定义为0％抑制，通过含有120nM螺内酯的孔定义为100％抑制。
这种浓度和测试化合物的百分比活性使用S型剂量-响应模型(其中EC50被确定为测试化合物在剂量-响应曲线中点处的浓度)拟合。方程式：拟合＝(A+((B-A)/(1+((C/x)^D))))，其中，A＝曲线底部，B＝曲线顶部，C＝EC50，D＝斜率(希尔系数)以及x＝测试化合物的浓度。
结果
实例的化合物在如上所述的测试A1和A2以及B1和B2中进行测试。下表显示了这些实例的结果：