本发明涉及一种具抗癌活性Co(mtyp)2的合成及应用。
背景技术：
：近年来研究发现希夫碱类配合物具有良好的抑菌、消炎、抗肿瘤等生物活性，希夫碱类配合物的合成及生物活性的研究已成为药物化学、生物学者研究的重要课题，为社会发展和技术进步发挥着日益重要的作用。特别是高效新药紧缺的现在，开发具良好抗癌活性的药物是解决高效新药紧缺问题方法之一。Co(mtyp)2具有独特的生物活性，可以用作设计合成具有应用前景的低毒有效的抑菌、抗肿瘤等药物，具有潜在用途。技术实现要素：本发明的目的就是为设计合成具抗癌活性的希夫碱配合物Co(mtyp)2，利用微反应瓶密封加热的方法合成单核配合物Co(mtyp)2。本发明涉及的配合物Co(mtyp)2的分子式为：C20H22CoN8O6，分子量为：529.39，其中Hmtyp为3-甲氧基水杨醛缩3-氨基-1,2,4-三氮唑希夫碱，晶体结构数据见表一，键长键角数据见表二。对本实验选用人肝癌细胞株(BEL-7404)，人肝癌细胞(HepG2)，肺癌细胞(NCI-H460)，胃癌细胞(MGC80-3)，正常人肝细胞株(HL-7702)等肿瘤细胞生长的抑制率见表三，对多种人肿瘤细胞株及人正常肝细胞株的IC50值见表四。表一:Co(mtyp)2的晶体学参数aR1＝Σ||Fo|–|Fc||/Σ|Fo|.bwR2＝[Σw(|Fo2|–|Fc2|)2/Σw(|Fo2|)2]1/2表二:Co(mtyp)2的键长和键角°C1—C61.416(3)C10—N21.349(3)C1—C21.424(3)C9—N31.298(3)C1—C71.435(3)C9—N21.365(3)C6—C51.359(3)N1—N21.416(2)C5—C41.404(4)N1—Co12.0923(18)C4—C31.367(3)N4—N31.390(3)C3—O21.371(3)O1—Co11.9714(14)C3—C21.433(3)O3—Co12.1924(19)C2—O11.289(3)Co1—O1i1.9714(14)C8—O21.418(3)Co1—N1i2.0923(18)C7—N11.288(3)Co1—O3i2.1924(19)C10—N41.302(3)C6—C1—C2120.2(2)C9—N2—N1128.0(2)C6—C1—C7117.0(2)C10—N4—N3106.4(2)C2—C1—C7122.6(2)C9—N3—N4108.14(19)C5—C6—C1121.3(2)C3—O2—C8117.9(2)C6—C5—C4119.8(2)C2—O1—Co1127.02(13)C3—C4—C5120.3(2)O1i—Co1—O1180.0C4—C3—O2125.3(2)O1i—Co1—N192.71(6)C4—C3—C2122.2(2)O1—Co1—N187.29(6)O2—C3—C2112.5(2)O1i—Co1—N1i87.29(6)O1—C2—C1125.27(19)O1—Co1—N1i92.71(6)O1—C2—C3118.5(2)N1—Co1—N1i180.0C1—C2—C3116.2(2)O1i—Co1—O3i90.41(7)N1—C7—C1125.1(2)O1—Co1—O3i89.59(7)N4—C10—N2110.6(2)N1—Co1—O3i85.60(8)N3—C9—N2109.1(2)N1i—Co1—O3i94.40(8)C7—N1—N2114.68(18)O1i—Co1—O389.59(7)C7—N1—Co1124.51(15)O1—Co1—O390.41(7)N2—N1—Co1120.28(13)N1—Co1—O394.40(8)C10—N2—C9105.7(2)N1i—Co1—O385.60(8)C10—N2—N1125.44(19)O3i—Co1—O3180.0Symmetrycodes:(i)-x+1,-y+1,-z+2.表三:Co(mtyp)2对不同细胞株的抑制率表四:Co(mtyp)2对不同细胞株的半数抑制浓度(IC50，μM)BEL-7404HepG2NCI-H460MGC80-3HL-770219.01±1.7215.06±1.13101.44±0.9825.09±0.85102.28±0.83所述配合物Co(mtyp)2的合成方法具体步骤为：(1)将1.522g分析纯的3-甲氧基水杨醛置于三口烧瓶中，加入15mL的无水乙醇加热搅拌待其完全溶解，然后加入0.084g分析纯的3-氨基-1,2,4-三氮唑，再加入10mL的无水乙醇，水浴加热，设定温度为80℃，回流搅拌120分钟，得到大量米白色固体，过滤，用10mL40～60℃的无水乙醇洗涤3次，置于50℃烘箱充分干燥后得到纯净的配体Hmtyp。(2)称取0.044g步骤(1)得到的Hmtyp溶于5mL分析纯N,N’-二甲基甲酰胺溶液中，再称取0.050g分析纯乙酸钴溶于5mL蒸馏水中，混合搅拌20分钟，最后移入20mL的微反应瓶中，拧紧瓶盖，静置在90℃烘箱中3天，得到红色的块状晶体即配合物Co(mtyp)2，通过单晶衍射仪测定Co(mtyp)2的结构。所述Co(mtyp)2能作为制备抗肝癌、肺癌和胃癌药物应用。本发明具有工艺简单、成本低廉、化学组分易于控制、重复性好并产量高等优点。附图说明图1为本发明希夫碱Hmtyp的实施图。图2为本发明配合物Co(mtyp)2的结构图。图3为本发明配合物Co(mtyp)2的三维结构堆积图。具体实施方式实施例：本发明涉及的配合物Co(mtyp)2的分子式为：C20H22CoN8O6，分子量为：529.39，晶体结构数据见表一，键长键角数据见表二。配合物Co(mtyp)2的合成方法具体步骤为：(1)将1.522g分析纯的3-甲氧基水杨醛置于三口烧瓶中，加入15mL的无水乙醇加热搅拌待其完全溶解，然后加入0.084g分析纯的3-氨基-1,2,4-三氮唑，再加入10mL的无水乙醇，水浴加热，设定温度为80℃，回流搅拌120分钟，得到大量米白色固体，过滤，用10mL50℃的无水乙醇洗涤3次，置于50℃烘箱充分干燥后得到纯净的配体Hmtyp。(2)称取0.044g步骤(1)得到的Hmtyp溶于5mL分析纯N,N’-二甲基甲酰胺溶液中，再称取0.050g分析纯乙酸钴溶于5mL蒸馏水，混合搅拌20分钟，最后移入20mL的微反应瓶中，拧紧瓶盖，静置在90℃烘箱中3天，得到红色的块状晶体即配合物Co(mtyp)2。通过单晶衍射仪测定Co(mtyp)2的结构。具抗癌活性的配合物Co(mtyp)2对多种人肿瘤细胞株的增殖抑制活性实验：(1)细胞株与细胞培养本实验选用人肝癌细胞株(BEL-7404)，人肝癌细胞(HepG2)，肺癌细胞(NCI-H460)，胃癌细胞(MGC80-3)，正常人肝细胞株(HL-7702)等5种人细胞株。所有细胞株均培养在含10wt％小牛血清、100U/mL青霉素、100U/mL链霉素的RPMI-1640培养液内，置37℃含体积浓度5％CO2孵箱中培养。(2)待测配合物的配制所用的Co(mtyp)2晶体经过手工挑选的纯度≥98％，将其DMSO储液用生理缓冲液稀释后配制成20μmol/L的终溶液，其中助溶剂DMSO的终浓度≤1％，测试该浓度下化合物对各种肿瘤细胞生长的抑制程度。(3)细胞生长抑制实验(MTT法)1)取对数生长期的肿瘤细胞，经胰蛋白酶消化后，用含10％小牛血清的培养液配制成浓度为5000个/ml的细胞悬液，以每孔190μl接种于96孔培养板中，使待测细胞密度至1000～10000孔(边缘孔用无菌PBS填充)；2)5％CO2，37℃孵育24小时，至细胞单层铺满孔底，每孔加入一定浓度梯度的药物10μL，每个浓度梯度设4个复孔；3)5％CO2，37℃孵育48小时，倒置显微镜下观察；4)每孔加入10μL的MTT溶液(5mg/mLPBS，即0.5％MTT)，继续培养4小时；5)终止培养，小心吸去孔内培养液，每孔加入150μL的DMSO充分溶解甲瓒沉淀，振荡器混匀后，在酶标仪用波长为570nm，参比波长为450nm测定各孔的光密度值；6)同时设置调零孔(培养基、MTT、DMSO)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、DMSO)。7)根据测得的光密度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强。利用公式：计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率，再以Bliss法分别计算各受试化合物对多种人肿瘤细胞株及人正常肝细胞株的IC50值。当前第1页1 2 3