一种自体脂肪源干细胞用于美容抗衰的制备方法与流程

文档序号:11936643阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种自体脂肪源干细胞用于美容抗衰的制备方法,其特征在于,该制备方法包括下述步骤:

1)获取腹部皮下正常脂肪组织,用PBS冲洗后,再将脂肪组织剪碎,然后用I型胶原酶消化一点时间;

2)消化后,加入PBS混匀过滤,加入含人自体血清的DMEM培养液,放置在培养箱中培养,间隔一定时间用新鲜培养液进行换液一次,细胞从组织块中生长,为原代自体脂肪源干细胞;

3)当原代细胞达到一定融合度时,再用PBS冲洗,然后加入胰酶和EDTA消化液,待细胞悬浮后,加入人自体血清终止消化,再加入生理盐水;

4)将上述细胞悬液移至离心管中离心,收集脂肪干细胞,调整细胞密度,再次加入含人自体血清的DMEM培养液培养,为二代自体脂肪源干细胞;

5)待二代自体脂肪源干细胞达到一定融合度以上时,再次按原代自体脂肪源干细胞步骤消化传代;

6)取琼脂糖加入生理盐水后加热溶解,待降至一定温度时,加入从自体外周血中得到的富含血小板的血浆,混匀后加入二代自体脂肪源干细胞,用于美容抗衰。

2.根据权利要求1所述的一种自体脂肪源干细胞用于美容抗衰的制备方法,其特征在于,步骤1)中,所述的脂肪组织为650-850mg,用PBS冲洗5次,去除吸脂手术中所用药物、油及血细胞,用眼科剪剪破脂肪组织中肉眼可见的细小血管,PBS充分冲洗血液后,将脂肪组织剪碎至1-3mm大小,用质量体积比0.1%I型胶原酶37℃消化60分钟。

3.根据权利要求1所述的一种自体脂肪源干细胞用于美容抗衰的制备方法,其特征在于,步骤2)中,所述的消化后1000转离心10分钟;用200目细胞筛过滤;加入含体积分数15%人自体血清的α-MEM培养液培养,在37℃、5%体积浓度的CO2培养箱中孵育,间隔48小时用新鲜培养液进行换液一次。

4.根据权利要求1所述的一种自体脂肪源干细胞用于美容抗衰的制备方法,其特征在于,步骤3)中,所述的原代细胞达到60-65%融合度时,去除培养液,用PBS冲洗2-3次,加入0.25%质量浓度的胰酶和0.04%质量浓度的EDTA消化液,待细胞悬浮后,消化后加入200μl人自体血清终止消化,再加入5ml的生理盐水,将单细胞悬液移至离心管中,1000rpm离心5min,弃上清收集脂肪干细胞,调整细胞密度为1-5×105/ml,加入含体积分数15%人自体血清的α-MEM培养液培养。

5.根据权利要求1所述的一种自体脂肪源干细胞用于美容抗衰的制备方法,其特征在于,步骤4)中,所述的二代自体脂肪源干细胞达到65-70%以上融合时,再次按原代细胞步骤消化传代。

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