一种酶菌联合降解羽毛的方法与流程

文档序号:12743878阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种酶菌联合降解羽毛的方法,其特征在于,所述方法步骤如下:

S1. 配置发酵缓冲液,将羽毛加入到发酵缓冲液,得到含羽毛的发酵缓冲液;

S2. 将菌种活化培养,得到活化后的菌液;

S3.将S2中活化后的菌液加入到S1中含羽毛的发酵缓冲液中进行一次发酵;

S4.待S3中发酵反应16~48h后,加入角蛋白酶进行二次发酵培养24~56h;

S5.将S4中二次发酵后的液体离心后,取上清液得发酵液;

S1中,羽毛质量占发酵缓冲液质量的1~10%,所述发酵缓冲液的pH值为6~10;

S2中,菌种为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus )YSQ08,于2012 年09 月03 日保藏于中国典型培养物保藏中心,菌种保藏编号为CCTCC No. M2012322;

S3中,将S2中活化后的菌液按2~6%的加入量加入含羽毛的发酵缓冲液;

S4中,以S3中一次发酵后物质量计,角蛋白酶的添加量为1000~5000U/g;所述角蛋白酶的酶活为105~106U/g。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,S3中,将S2中活化后的菌液按3%加入含羽毛的发酵缓冲液;S4中,以S3中一次发酵后物质量计,角蛋白酶的添加量为2000U/g,S1中,羽毛质量占发酵缓冲液质量的2.5%。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,S4中,待S3中发酵反应24h后,加入角蛋白酶进行二次发酵培养48h。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述羽毛为鸡毛,发酵缓冲液的pH值为9。

5. 根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述发酵缓冲液组成为:0.1~1.0g/L氯化钠,0.01~1.0g/L氯化钙,0.1 ~1.0g /L氯化镁,1.0~5.0g/L磷酸氢二钾,0.1~2.0g/L磷酸二氢钾。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,S3和S4中发酵温度为36~42℃。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,S2中,菌种活化培养步骤如下:

S21.采用平板划线培养的方法,将蜡样芽孢杆菌YSQ08(Bacillus cereus)进行活化,挑取单菌落,置于LB肉汤培养基中,摇床37℃,200r/min培养24h;

S22.将S21中所得液体以2%的菌液加入量加入到S1中含羽毛的发酵缓冲液中,72h后,划线倒置培养14h,挑取单菌落进行液体培养,摇床37℃,200r/min培养14h;

S23. 将S22中诱导好的液体以2%的添加量加入到LB肉汤培养基中进行扩大培养3~5次。

8. 根据权利要求7所述的方法,其特征在于,LB肉汤培养基的制备为:将胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 5g混合,加蒸馏水定容至1000mL,pH为7.0,121℃高压灭菌20min。

9.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,S21中,所述蜡样芽孢杆菌YSQ08菌株的种龄为8~20h。

10.一种权利要求1至9所述的方法制备得到的发酵液。

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