一种山葡萄愈伤组织培养基及其应用的制作方法

文档序号:15366875发布日期:2018-09-07 22:08阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种耐盐高白芦藜醇山葡萄愈伤组织的诱导培养方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

1)将山葡萄的展叶新梢剪成小段,清洗并消毒;

2)将所述小段的叶片剪裁至适合培养的大小后作为外植体接种至诱导培养基上;

3)25-30天后,将诱导出的愈伤组织转移到继代培养基上进行培养;

4)25-30天后,取继代愈伤组织,切割成小块后接种至耐盐继代培养基上;

5)18-23天后,取新生长出的愈伤组织,切割成小块后接种至新的耐盐继代培养基上继续培养;

6)重复步骤5)3-4次后,得到耐盐愈伤组织,将所述耐盐愈伤组织接种至扩增培养基上培养;

其中,所述诱导培养基、所述继代培养基和所述扩增培养基均为山葡萄愈伤组织培养基,所述山葡萄愈伤组织培养基以MS培养基为基础,添加蔗糖、琼脂、6-苄氨基腺嘌呤和生长素类似物;其中,所述生长素类似物选自萘乙酸、吲哚丁酸和2,4-二氯苯氧乙酸中的任意一种,所述培养基中各添加物的加入量如下:

蔗糖25-35g/L;

琼脂4-8g/L;

6-苄氨基腺嘌呤1.5-2.5mg/L;

生长素类似物0.05-0.2g/L;

所述耐盐继代培养基为所述山葡萄愈伤组织培养基中添加了按质量百分比计1-1.5%的无机盐。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述生长素类似物是2,4-二氯苯氧乙酸。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述山葡萄愈伤组织培养基的pH=5.5-6.5。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法,其特征在于,所述消毒使用0.1%的升汞作为消毒剂,消毒时间为30-240s,消毒完成后使用无菌水冲洗。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述消毒时间为50-70s。

6.根据权利要求1-3任一项所述的方法,其特征在于,所述步骤2)中将叶片剪裁成0.5-2cm见方的小块。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,将叶片剪裁成0.9-1.1cm见方的小块。

8.根据权利要求1-3任一项所述的方法,其特征在于,所述步骤4)和5)中,将愈伤组织切割成0.4-0.6cm见方的小块。

9.根据权利要求1-3任一项所述的方法,其特征在于,所述无机盐是NaCl和/或KCl。

10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述无机盐是NaCl。

11.根据权利要求1-3任一项所述的方法,其特征在于,所述诱导培养基、所述继代培养基和所述扩增培养基的组分及配比完全相同;所述耐盐继代培养基除含有无机盐外,其余组分与配比与所述诱导培养基、所述继代培养基和所述扩增培养基完全相同。

12.根据权利要求1-3任一项所述的方法,其特征在于,所述山葡萄的品种为“左优红”、“北冰红”和“双红”中的一种。

13.根据权利要求12所述的方法,其特征在于,所述山葡萄品种是“双红”。

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