一种菊花中多酚氧化酶快速高效提取测定方法与流程

技术特征：

1.一种菊花中多酚氧化酶快速高效提取测定方法，其特征在于，步骤如下：

(1)多酚氧化酶粗酶液的提取：取菊花，加入石英砂、聚乙烯吡咯烷酮以及柠檬酸-磷酸缓冲液，冰浴上混合均匀研磨成匀浆后，倒入离心管；然后用剩余的柠檬酸-磷酸缓冲液冲洗研钵，再次倒入离心管，混合均匀；然后放置3～5℃的冰箱中冷藏浸置22～26h；取出后，放入冷冻离心机中进行离心5～7min，冷冻离心机温度为3～5℃；静置3～5min；提取上清液至离心管中再次离心5～7min，再静置3～5min，取上清液，即为粗酶液；

(2)多酚氧化酶活力测定：将含反应底物邻苯二酚的缓冲液移入离心管中，与上述的粗酶液分别放入36～38℃的水浴锅保温5～7min；移取粗酶液，迅速加入邻苯二酚缓冲液中，摇匀后迅速倒入比色皿，同步开始记时；同时将粗酶液放入99～101℃的水中煮4～6min，将煮死的酶液作为对照；测ΔOD410nm波长处值的变化，每隔1min读数一次，以每min内A410值增加0.01表示一个酶活力单位，记时3min，按照如下公式计算多酚氧化酶的活力，

式中：A为反应时间内吸光度的变化值。

2.根据权利要求1所述的菊花中多酚氧化酶快速高效提取测定方法，其特征在于，所述步骤(1)中，菊花与聚乙烯吡咯烷酮的质量比为4.5～5.5∶1，柠檬酸-磷酸缓冲液重研磨用量与冲洗用量的体积比为0.7～1.5∶1。

3.根据权利要求1所述的菊花中多酚氧化酶快速高效提取测定方法，其特征在于，所述步骤(1)中，匀浆后冷藏浸置的时间22～26h。

4.根据权利要求1所述的菊花中多酚氧化酶快速高效提取测定方法，其特征在于，所述步骤(1)中的两次离心过程，第一次离心的转速为4800～5200r/min，第二次离心的转速为5800～6200r/min。