香菇C91‑3菌株的Latcripin‑8基因片段、编码蛋白、制备方法及用途与流程

文档序号:12097424阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种香菇C91-3菌株的Latcripin-8基因片段,其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO:1 所示。

2.一种如权利要求1所述香菇C91-3菌株的Latcripin-8基因片段编码蛋白,其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.一种如权利要求1所述香菇C91-3菌株的Latcripin-8基因片段的制备方法,其特征在于依次按如下步骤进行:

提取香菇C91-3菌株的菌丝体总RNA;

将菌丝体总RNA反转录合成cDNA;

c. PCR扩增目标基因:

以所得到的cDNA为模板、以具有BamHⅠ和NotⅠ两个酶切位点的PCR反应引物进行PCR反应;所述PCR反应引物序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示;

d.回收纯化DNA片段:

将所得到的PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,纯化762bpMarker附近的明

显条带,切胶回收DNA片段。

4.根据权利要求3所述香菇C91-3菌株的Latcripin-8基因片段的制备方法,其特征在于所述a步骤是取培养18天的香菇C91-3菌株的菌丝体,于研钵中加入液氮充分研磨,加入Trizol后室温静置30min,样品融化后继续研磨至裂解液透明状,室温静置5min后,12000r/min离心5min,将上清转移至另一离心管中,然后加入1/5体积氯仿,温和振荡后,4˚C, 12000 r/min离心,15 min;吸取上层水相溶液并转移至另一离心管中,加入等体积异丙醇,混匀后室温静置15 min,再次4˚C,12000 r/min离心,10 min,弃上清,然后加入75%乙醇洗涤并干燥,最后用DEPC处理水溶解,得到香菇C91-3菌株的菌丝体总RNA。

5.根据权利要求4所述香菇C91-3菌株的Latcripin-8基因片段的制备方法,其特征在于所述c步骤的PCR反应体系50 µl: cDNA模板1 µl,上游引物0.5 µl,下游引物0.5 µl,dNTP Mixture 4 µl、5×PrimeSTAR Buffer 10 µl、2.5 U/µl 的PrimeSTAR HS DNA Polymerase0.5 µl、灭菌蒸馏水33.5 µl;反应条件:98℃变性10 s,55℃复性10 s,72℃延伸1 min,30个循环;72℃延伸5 min;4℃冷却10 min。

6.一种如权利要求2所述香菇C91-3菌株的Latcripin-8基因片段编码蛋白在制备抗肿瘤、抗氧化或抗衰老药物中的应用。

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