MTHFR基因检测引物组、检测试剂盒及检测方法与流程

文档序号:14827927发布日期:2018-06-30 09:13阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种MTHFR基因检测引物组,其特征在于,包括rs1801133引物组和rs1801131引物组中的至少一种;

所述rs1801133引物组用于扩增含rs1801133位点的核酸片段,所述rs1801133引物组包括rs1801133上游引物和rs1801133下游引物,所述rs1801133上游引物具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的序列,所述rs1801133下游引物具有SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14的序列;

所述rs1801131引物组用于扩增含rs1801131位点的核酸片段,所述rs1801131引物组包括rs1801131上游引物和rs1801131下游引物,所述rs1801131上游引物具有SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:19的序列,所述rs1801131下游引物具有SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24的序列。

2.根据权利要求1所述的MTHFR基因检测引物组,其特征在于,所述rs1801133引物组包括第一rs1801133引物组和第二rs1801133引物组;所述rs1801131引物组包括第一rs1801131引物组和第二rs1801131引物组;所述第一rs1801133引物组用于扩增含rs1801133位点的MTHFR基因片段,所述第二rs1801133引物组用于扩增含rs1801133位点的核酸片段;所述第一rs1801131引物组用于扩增含rs1801131位点的MTHFR基因片段,所述第二rs1801131引物组用于扩增含rs1801131位点的核酸片段。

3.一种MTHFR基因检测试剂盒,其特征在于,所述MTHFR基因检测试剂盒包括权利要求1或2所述的MTHFR基因检测引物组。

4.根据权利要求3所述的MTHFR基因检测试剂盒,其特征在于,所述MTHFR基因检测试剂盒还包括接头,所述接头上含有标签序列,所述接头用于直接与含rs1801133位点和/或rs1801131位点的扩增产物连接。

5.根据权利要求3所述的MTHFR基因检测试剂盒,其特征在于,所述MTHFR基因检测试剂盒还包括rs1801133测序引物和/或rs1801131测序引物,所述rs1801133测序引物具有SEQ ID NO:27的序列;所述rs1801131测序引物具有SEQ ID NO:28的序列。

6.根据权利要求3所述的MTHFR基因检测试剂盒,其特征在于,所述MTHFR基因检测试剂盒还包括无荧光标记的寡聚核苷酸探针。

7.一种MTHFR基因检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

A、采用rs1801133引物组,对含rs1801133位点的核酸片段进行扩增,得rs1801133扩增产物;或利用rs1801131引物组,对含rs1801131位点的核酸片段进行扩增,得rs1801131扩增产物;

所述rs1801133引物组用于扩增含rs1801133位点的核酸片段,所述rs1801131引物组包括rs1801133上游引物和rs1801133下游引物,所述rs1801133上游引物具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的序列,所述rs1801133下游引物具有SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14的序列;

所述rs1801131引物组用于扩增含rs1801131位点的核酸片段,所述rs1801131引物组包括rs1801131上游引物和rs1801131下游引物,所述rs1801131上游引物具有SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:19的序列,所述rs1801131下游引物具有SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24的序列;

B、在所述rs1801133扩增产物和/或rs1801131扩增产物上连接接头,得到rs1801133文库分子和/或rs1801131文库分子;

C、采用第二代高通量基因测序技术对所述文库分子进行测序,确定rs1801133位点和/或rs1801131位点的基因型。

8.根据权利要求7所述的MTHFR基因检测方法,其特征在于,所述步骤A包括以下步骤:

A1、采用第一rs1801133引物组扩增含rs1801133位点的MTHFR基因片段,得第一rs1801133扩增产物,采用第一rs1801131引物组扩增含rs1801131位点的MTHFR基因片段,得第一rs1801131扩增产物;所述第一rs1801133引物组包括第一rs1801133上游引物和第一rs1801133下游引物,所述第一rs1801133上游引物具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的序列,所述第一rs1801133下游引物具有SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10的序列;所述第一rs1801131引物组包括第一rs1801131上游引物和第一rs1801131下游引物,所述第一rs1801131上游引物具有SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17的序列,所述第一rs1801131下游引物具有SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:22的序列;

A2、以第一rs1801133扩增产物为模板,采用第二rs1801133引物组进行扩增,得第二rs1801133扩增产物,以第一rs1801131扩增产物为模板,采用第二rs1801131引物组进行扩增,得第二rs1801131扩增产物;所述第二rs1801133引物组包括第二rs1801133上游引物和第二rs1801133下游引物,所述第二rs1801133上游引物具有SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的序列,所述第二rs1801133下游引物具有SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14的序列;所述第二rs1801131引物组包括第二rs1801131上游引物和第二rs1801131下游引物,所述第二rs1801131上游引物具有SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:19的序列,所述第二rs1801131下游引物具有SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24的序列。

9.根据权利要求8所述的MTHFR基因检测方法,其特征在于,所述步骤B包括以下步骤:

B1、在所述第二rs1801133扩增产物和/或第二rs1801131扩增产物上连接接头,得到rs1801133文库分子和/或rs1801131文库分子;

B2、通过接头上的生物素标记,将所述rs1801133文库分子和/或rs1801131文库分子固定在含亲和素的磁珠上;将磁珠可寻址的固定在固相载体上。

10.根据权利要求7所述的MTHFR基因检测方法,其特征在于,步骤C中采用rs1801133测序引物和/或rs1801131测序引物对含待测位点的文库分子进行测序,所述rs1801133测序引物具有SEQ ID NO:27的序列;所述rs1801131测序引物具有SEQ ID NO:28的序列。

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