一种酪蛋白磷酸肽的标签肽及其应用的制作方法

文档序号:12399336阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种酪蛋白磷酸肽的标签肽,其特征在于,氨基酸序列为LSQSKVLPVPQK。

2.一种酪蛋白磷酸肽的内标肽,其特征在于,氨基酸序列为LSQSKVL*PV*PQK,其中L*和V*为碳氮全同位素标记的氨基酸残基。

3.如权利要求1所述的标签肽在奶制品中酪蛋白磷酸肽含量检测中的应用。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述奶制品为婴幼儿配方奶粉。

5.一种检测奶制品中酪蛋白磷酸肽含量的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)如果待测样品为固体,先用水溶解,如果待测样品为液体则直接使用,然后加入内标肽;

(2)使用高效液相色谱-质谱联用对样品进行检测;

(3)计算待测样品中,如权利要求1所述的标签肽与对应的内标肽的峰面积比;

(4)将待测样品中所述的标签肽的峰面积比数据代入标准曲线中,计算出所述标签肽的浓度,然后根据相应的转换公式计算出待测样品中酪蛋白磷酸肽的含量。

6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述的内标肽的氨基酸序列为LSQSKVL*PV*PQK,其中L*和V*为碳氮全同位素标记的氨基酸残基。

7.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述待测样品经过前处理,所述前处理方法为:使用pH为4.6的乙酸铵溶液进行蛋白沉淀。

8.如权利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述标准曲线由以下方法获得:

将所述的标签肽稀释不同浓度梯度作为标准品,然后加入内标肽,再经高效液相色谱-质谱联用检测,由标签肽的含量与标签肽、内标肽检测峰面积比值获得标准曲线,其中,样品检测与标准曲线制备时高效液相色谱和质谱的检测条件相同。

9.如权利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述高效液相色谱使用BEH300 C18色谱柱,柱温为35℃,流动相为0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水溶液,流速为0.3mL/min。

10.如权利要求6所述的方法,其特征在于,所述质谱使用的毛细管电压为3.5kV,脱溶剂温度375℃,脱溶剂气流量11.5L/min,所述的标签肽的母离子为442.1m/z,子离子372.4m/z对应的碰撞能量为10eV,子离子568.5m/z对应的碰撞能量为10eV;内标物特征母离子为446.3m/z,子离子372.2m/z,对应的碰撞能量为15eV,子离子574.5m/z,对应的碰撞能量为10eV。

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