一种棕色棉纤维原花青素转运相关的GST蛋白基因及其应用的制作方法

文档序号:12412026阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种棕色棉纤维原花青素转运相关的GST蛋白基因,其特征在于,所述基因具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

2.一种如权利要求1所述的棕色棉纤维原花青素转运相关的GST蛋白基因在培育棕色棉品种中的应用。

3.一种棕色棉纤维原花青素转运相关的GST蛋白,其特征在于,所述蛋白具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

4.一种植物表达载体,其特征在于,所述植物表达载体含有如权利要求1所述的棕色棉纤维原花青素转运相关的GST蛋白基因。

5.根据权利要求4所述的植物表达载体,其特征在于,所述植物表达载体为含有上述基因的pCambia1301a载体。

6.一种遗传工程化的宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞含有如权利要求4、5所述的植物表达载体,或其基因组中整合有外源的如权利要求1所述的棕色棉纤维原花青素转运相关的GST蛋白基因。

7.根据权利要求5所述的宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞为含有如权利要求4、5所述的植物表达载体或整合有外源的如权利要求1所述基因的农杆菌细胞。

8.一种制备转基因植物的方法,所述植物为拟南芥,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

(1)制备侵染液:将如权利要求6、7所述的宿主细胞活化后,用缓冲液重悬,获得侵染液,所述缓冲液为含有质量比为5%的蔗糖和0.02%的Silwet L-77的1/2MS液体培养基,所述侵染液的OD600值为0.8;

(2)将预转化的拟南芥苗的果荚和已开放的花朵全部剪掉,只留花蕾,将全部花蕾倒置浸在步骤(1)的侵染液中45s,再置于黑暗处培养一天,然后置于光照培养箱中继续培养,并控制光照时间为16h/天;

(3)每隔1周重复步骤(2)一次,直至种子成熟,获得T0代种子;

(4)将T0代种子消毒后接种指含有50mg/L潮霉素的MS固体筛选培养基中,置于光照培养箱中培养,并控制光照时间为16h/天,至幼苗长出4-6片莲座后,移入营养土中继续培养并收获T1代种子;

(5)重复步骤(4)获得稳定遗传的转基因植株及其后代。

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