一种核苷磷酸化酶、编码基因及其高产菌株和应用的制作方法

技术特征：

1.一种核苷磷酸化酶高产菌株，其分类命名为米氏硫胺素芽孢杆菌(Aneurinibacillus migulanus)AM007，保藏编号为CCTCC NO：M2016404。

2.一种由权利要求1所述菌株生产的核苷磷酸化酶，其氨基酸序列表如SEQ ID No：2所示。

3.编码权利要求2所述的核苷磷酸化酶的基因。

4.根据权利要求3所述基因，其特征在于，所述核苷磷酸化酶酶基因的序列如SEQ ID NO：1所示。

5.含有权利要求3或4所述基因的重组表达载体或重组菌。

6.权利要求2所述核苷磷酸化酶在合成核苷类似物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，采用含有核苷磷酸化酶基因的重组菌或所述重组菌的培养物催化合成核苷类似物；或采用所述核苷磷酸化酶催化合成核苷类似物。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，合成核苷类似物反应中，核糖供体为2'-脱氧尿苷或尿苷；核糖受体具有如下所示的结构式：

其中X取代基为Cl、NH₂、H、SH或Br；Y取代基为Cl、NH₂、H或F。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，核糖供体为2'-脱氧尿苷，反应体系中含有10～100mM 2'-脱氧尿苷，含有受体10～100mM，0.5～20U/mL核苷磷酸化酶，溶剂为pH5.0～9.0的磷酸缓冲溶液，反应温度为30～70℃，反应时间为1～8h；供体与受体的摩尔比为1：1～1：5；优选反应体系含有供体：受体比为1：1，1U/mL核苷磷酸化酶，pH8.0的磷酸缓冲，反应温度为60℃。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，核糖供体为尿苷，反应体系含有10～100mM尿苷，含有受体10～100mM，0.5～20U/mL核苷磷酸化酶，溶剂为pH5.0～9.0的磷酸缓冲溶液，反应温度为30～70℃，反应时间为1～8h，供体与受体的摩尔比为1：1～1：5；

优选反应体系含有供体：受体比为1：1，1U/mL核苷磷酸化酶，pH8.0的磷酸缓冲，反应温度为60℃。