本发明涉及原料药品制备领域，具体是一种莫诺苷的制备方法。
背景技术：
莫诺苷分子式：c17h26011。分子量：402.38。分子结构：
成分分类：环烯醚萜苷类。物理性质：可溶于乙醇、水等极性较大的溶剂，在一定条件下易水解。药理作用：研究表明山茱萸中的环烯醚萜总苷能改善糖尿病血管并发症，可用于治疗糖尿病药物的开发。莫诺苷具有保护细胞免于h202诱导的细胞毒性和细胞凋亡的作用，因此可作为一种神经保护类药物。莫诺苷还具有苦补健胃的功效。山茱萸为山茱萸科植物山茱萸的干燥成熟果肉。其性微温，味酸、涩，归肝、肾经，具有补益肝肾，收涩固脱的功效。用于眩晕耳鸣，腰膝酸痛，阳痿遗精，遗尿尿频，崩漏带下，大汗虚脱，内热消渴。现代研究表明环烯醚萜为山茱萸的主要有效部位。特别是其中的莫诺苷具有改善糖尿病血管并发症、抗氧化、抗凋亡、增加神经营养、促进神经生长等药理作用，对对脑卒中、脑缺血，再灌注损伤、痴呆、帕金森病等脑重大疾病具有显著的治疗和预防作用。莫诺苷还具有预防及治疗急慢性肝损伤和肝纤维化的作用。莫诺苷是一种小分子、大极性的环烯醚萜类化合物，化学性质不太稳定，提取分离难度大，目前提取分离莫诺苷都是在实验室小规模制备，工艺复杂、成本高。因此，开发低成本的工业化大生产价值的莫诺苷提取分离工艺具有现实意义。
申请号为201510438773.2的中国专利公开一种制备莫诺苷的方法，该发明，包括如下步骤：将山茱萸进行渗漉提取，得到山茱萸提取液；将得到的山茱萸提取液浓缩，得到山茱萸浸膏；得到所述山茱萸浸膏，与硅胶混匀、干燥、研细后，装填于色谱柱中；所述色谱柱中已装有柱层析用空白硅胶；用洗脱液对所述色谱柱进行洗脱并收集流分，再除去所述收集到的流分中的洗脱液，用甲醇溶解残留物，重结晶，得到所述莫诺苷。此种方法对山茱萸的提取效率比较低，得到莫诺苷含量偏低。
申请号为200510041480的中国专利公开一种山茱萸提取物及其制备工艺，该发明中山茱萸药材用乙醇进行提取，提取液浓缩后低温静置，上层固体用酸碱处理后的提取物a，下层清液用大孔树脂柱分离得到提取物b，将提取物a和b混合的山茱萸提取物，此种方法对山茱萸的提取效率同样很低，所的产品含量也比较低。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种莫诺苷的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种莫诺苷的制备方法，其特征在于包括以下几个步骤：
(1)原材料加乙醇采用微波、超声波协同提取法进行提取：将山茱萸原料粉碎加5-10倍量乙醇，通过微波、超声波协助提取40-60分钟，提取2-3次；
(2)采用大孔树脂吸附提取液：回收提取液中的乙醇，过滤后加入大孔树脂柱进行吸附，然后采用水-醇梯度洗脱，最后收集莫诺苷流分；
(3)莫诺苷流分通过过滤膜进行过滤操作：将莫诺苷流分加入超滤膜进行超滤，超滤完成后再加入纳滤膜进行过滤，然后收集浓缩液；
(4)对收集到的浓缩液进行萃取操和结晶操作：将上述浓缩液加水饱和正丁醇萃取2-4次，然后将萃取液合并，再进行减压浓缩，浓缩后可得到浓缩浸膏，将浓缩浸膏溶于乙酸乙酯来除去不溶物和水层，再加入无水硫酸钠回收乙酸乙酯，溶液经过过滤后加入二氯甲烷，随后可看到有白色沉淀析出，最后放置结晶，重复结晶3-4次，采取减压干燥后即可得到莫诺苷产品。
步骤①中乙醇浓度为20-60％。
步骤①中超声频率为20-80khz，功率为1000-3000w。
步骤①中微波频率为2500khz，功率10kw。
步骤②中大孔树脂可从hpd850、s-8、nak-ii、las-7、ads-17中选取。
步骤②中水-醇梯度洗脱为6-10bv水-4-6bv10-30％乙醇溶液-6-9bv50-80％乙醇溶液。
步骤③中过滤膜种类和过滤条件：超滤膜为截留分子量3000-7000的中空复合膜，纳滤膜为截留分子量150的中空复合膜。过滤压力0.2-0.7mpa。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用微波超声超声波协同提取法，微波是一种非电离的电磁辐射，被辐射物质的极性分子在微波电磁场中快速转向及定向排列，利用微波加热的特性对物料中目标成分进行选择性提取的方法，通过调节微波的参数，可有效加热目标成分，以利于目标成分的提取与分离，利用超声波产生的强烈振动和空化效应加速植物细胞内物质的释放、扩散并溶解进入溶剂中，同时可以保持被提取物质的结构和生物活性不发生变化，提取速度快，杂质溶出少，且能耗低，具有高效无工业污染等优点。大孔树脂和过滤膜结合使用，除杂效果好、能耗低，和单一使用过滤膜进行过滤分离相比，延长了过滤膜的使用寿命，简化工艺流程，更便于于操作，所得产品含量高，该方法适合放大生产，成本低，能耗小。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，对发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种莫诺苷的制备方法，其特征在于包括以下几个步骤：
(1)原材料加乙醇采用微波、超声波协同提取法进行提取：将山茱萸原料粉碎加5-10倍量乙醇，通过微波、超声波协助提取40-60分钟，提取2-3次；
(2)采用大孔树脂吸附提取液：回收提取液中的乙醇，过滤后加入大孔树脂柱进行吸附，然后采用水-醇梯度洗脱，最后收集莫诺苷流分；
(3)莫诺苷流分通过过滤膜进行过滤操作：将莫诺苷流分加入超滤膜进行超滤，超滤完成后再加入纳滤膜进行过滤，然后收集浓缩液；
(4)对收集到的浓缩液进行萃取操和结晶操作：将上述浓缩液加水饱和正丁醇萃取2-4次，然后将萃取液合并，再进行减压浓缩，浓缩后可得到浓缩浸膏，将浓缩浸膏溶于乙酸乙酯来除去不溶物和水层，再加入无水硫酸钠回收乙酸乙酯，溶液经过过滤后加入二氯甲烷，随后可看到有白色沉淀析出，最后放置结晶，重复结晶3-4次，采取减压干燥后即可得到莫诺苷产品。
步骤①中乙醇浓度为20-60％。
步骤①中超声频率为20-80khz，功率为1000-3000w。
步骤①中微波频率为2500khz，功率10kw。
步骤②中大孔树脂可从hpd850、s-8、nak-ii、las-7、ads-17中选取。
步骤②中水-醇梯度洗脱为6-10bv水-4-6bv10-30％乙醇溶液-6-9bv50-80％乙醇溶液。
步骤③中过滤膜种类和过滤条件：超滤膜为截留分子量3000-7000的中空复合膜，纳滤膜为截留分子量150的中空复合膜。过滤压力0.2-0.7mpa。
实施例1：使用破碎设备将山茱萸原料粉碎，取5kg粉碎后的山茱萸投入到微波、超声波协同提取罐内，加入15l40％乙醇，将超声波发射器的频率调至80khz，功率调至10kw，微波发射器的频率为2500khz，功率为10kw，然后进行微波、超声波协同提取，每次提取30分钟，提取2次，将所有提取液合并在一起，回收提取液中的乙醇，将提取液加入2lhpd850大孔树脂柱进行吸附，流速控制在3l/h，吸附结束后依次用20l水-15l10％乙醇溶液-18l60％乙醇溶液进行洗脱，收集60％乙醇洗脱液，加入截留分子量3000-7000的过滤膜进行超滤，将进口压力控制在0.2-0.7mpa，过滤液再加入截留分子量150的纳滤膜进行浓缩，浓缩液转入萃取罐，加入3bv的水饱和正丁醇萃取4次，将萃取液浓缩，然后回收正丁醇，即可得到浓缩浸膏。浓缩浸膏加入10bv的乙酸乙酯溶解，除去水层，过滤不溶物，滤液加入无水硫酸钠回收乙酸乙酯，将滤液内加入二氯甲烷，然后搅匀直至有沉淀析出，随后放置结晶，结晶物再用乙酸乙酯溶解加入二氯甲烷重复结晶3次，过滤减压干燥得莫诺苷产品75g，含量97％。
实施例2：使用破碎设备将山茱萸原料粉碎，取5kg粉碎后的山茱萸投入到微波、超声波协同提取罐内，加入15l40％乙醇，将超声波发射器的频率调至60khz，功率调至8kw，微波发射器的频率为2500khz，功率为10kw，然后进行微波、超声波协同提取，每次提取30分钟，提取3次，将所有提取液合并在一起，回收提取液中的乙醇，将提取液加入2lhpd850大孔树脂柱进行吸附，流速控制在3l/h，吸附结束后依次用20l水-15l10％乙醇溶液-18l60％乙醇溶液进行洗脱，收集60％乙醇洗脱液，加入截留分子量3000-7000的过滤膜进行超滤，将进口压力控制在0.2-0.7mpa，过滤液再加入截留分子量150的纳滤膜进行浓缩，浓缩液转入萃取罐，加入3bv的水饱和正丁醇萃取4次，将萃取液浓缩，然后回收正丁醇，即可得到浓缩浸膏。浓缩浸膏加入10bv的乙酸乙酯溶解，除去水层，过滤不溶物，滤液加入无水硫酸钠回收乙酸乙酯，将滤液内加入二氯甲烷，然后搅匀直至有沉淀析出，随后放置结晶，结晶物再用乙酸乙酯溶解加入二氯甲烷重复结晶3次，过滤减压干燥得莫诺苷产品71g，含量96％。
实施例3：使用破碎设备将山茱萸原料粉碎，取5kg粉碎后的山茱萸投入到微波、超声波协同提取罐内，加入30l50％乙醇，将超声波发射器的频率调至20khz，功率调至1kw，微波发射器的频率为2500khz，功率为10kw，然后进行微波、超声波协同提取，每次提取60分钟，提取2次，将所有提取液合并在一起，回收提取液中的乙醇，将提取液加入3ls-8大孔树脂柱进行吸附，流速控制在2l/h，吸附结束后依次用22l水-9l15％乙醇溶液-12l65％乙醇溶液进行洗脱，收集65％乙醇洗脱液，加入截留分子量3000-7000的过滤膜进行超滤，将进口压力控制在0.2-0.7mpa，过滤液再加入截留分子量150的纳滤膜进行浓缩，浓缩液转入萃取罐，加入5bv的水饱和正丁醇萃取3次，将萃取液浓缩，然后回收正丁醇，即可得到浓缩浸膏。浓缩浸膏加入17bv的乙酸乙酯溶解，除去水层，过滤不溶物，滤液加入无水硫酸钠回收乙酸乙酯，将滤液内加入二氯甲烷，然后搅匀直至有沉淀析出，随后放置结晶，结晶物再用乙酸乙酯溶解加入二氯甲烷重复结晶3次，过滤减压干燥得莫诺苷产品68g，含量96％
实施例4：使用破碎设备将山茱萸原料粉碎，取10kg粉碎后的山茱萸投入到微波、超声波协同提取罐内，加入65l60％乙醇，将超声波发射器的频率调至80khz，功率调至1kw，微波发射器的频率为2500khz，功率为10kw，然后进行微波、超声波协同提取，每次提取30分钟，提取2次，将所有提取液合并在一起，回收提取液中的乙醇，将提取液加入2llnak-ii大孔树脂柱进行吸附，流速控制在3l/h，吸附结束后依次用80l水-28l20％乙醇溶液-33l60％乙醇溶液进行洗脱，收集60％乙醇洗脱液，加入截留分子量3000-7000的过滤膜进行超滤，将进口压力控制在0.2-0.7mpa，过滤液再加入截留分子量150的纳滤膜进行浓缩，浓缩液转入萃取罐，加入7bv的水饱和正丁醇萃取4次，将萃取液浓缩，然后回收正丁醇，即可得到浓缩浸膏。浓缩浸膏加入18bv的乙酸乙酯溶解，除去水层，过滤不溶物，滤液加入无水硫酸钠回收乙酸乙酯，将滤液内加入二氯甲烷，然后搅匀直至有沉淀析出，随后放置结晶，结晶物再用乙酸乙酯溶解加入二氯甲烷重复结晶3次，过滤减压干燥得莫诺苷产品142g，含量99％
实施例5：使用破碎设备将山茱萸原料粉碎，取15kg粉碎后的山茱萸投入到微波、超声波协同提取罐内，加入70l50％乙醇，将超声波发射器的频率调至70khz，功率调至2kw，微波发射器的频率为2500khz，功率为10kw，然后进行微波、超声波协同提取，每次提取40分钟，提取3次，将所有提取液合并在一起，回收提取液中的乙醇，将提取液加入9llas-7大孔树脂柱进行吸附，流速控制在9l/h，吸附结束后依次用95l水-39l10％乙醇溶液-55l70％乙醇溶液进行洗脱，收集70％乙醇洗脱液，加入截留分子量3000-7000的过滤膜进行超滤，将进口压力控制在0.2-0.7mpa，过滤液再加入截留分子量150的纳滤膜进行浓缩，浓缩液转入萃取罐，加入5bv的水饱和正丁醇萃取3次，将萃取液浓缩，然后回收正丁醇，即可得到浓缩浸膏。浓缩浸膏加入8bv的乙酸乙酯溶解，除去水层，过滤不溶物，滤液加入无水硫酸钠回收乙酸乙酯，将滤液内加入二氯甲烷，然后搅匀直至有沉淀析出，随后放置结晶，结晶物再用乙酸乙酯溶解加入二氯甲烷重复结晶3次，过滤减压干燥得莫诺苷产品196g，含量98％
实施例6：使用破碎设备将山茱萸原料粉碎，取20kg粉碎后的山茱萸投入到微波、超声波协同提取罐内，加入82l50％乙醇，将超声波发射器的频率调至80khz，功率调至5kw，微波发射器的频率为2500khz，功率为10kw，然后进行微波、超声波协同提取，每次提取50分钟，提取2次，将所有提取液合并在一起，回收提取液中的乙醇，将提取液加入12llads-17大孔树脂柱进行吸附，流速控制在20l/h，吸附结束后依次用125l水-46l10％乙醇溶液-78l65％乙醇溶液进行洗脱，收集65％乙醇洗脱液，加入截留分子量3000-7000的过滤膜进行超滤，将进口压力控制在0.2-0.7mpa，过滤液再加入截留分子量150的纳滤膜进行浓缩，浓缩液转入萃取罐，加入6bv的水饱和正丁醇萃取4次，将萃取液浓缩，然后回收正丁醇，即可得到浓缩浸膏。浓缩浸膏加入12bv的乙酸乙酯溶解，除去水层，过滤不溶物，滤液加入无水硫酸钠回收乙酸乙酯，将滤液内加入二氯甲烷，然后搅匀直至有沉淀析出，随后放置结晶，结晶物再用乙酸乙酯溶解加入二氯甲烷重复结晶3次，过滤减压干燥得莫诺苷产品273g，含量98％。
实施例7：使用破碎设备将山茱萸原料粉碎，取25kg粉碎后的山茱萸投入到微波、超声波协同提取罐内，加入95l40％乙醇，将超声波发射器的频率调至60khz，功率调至4kw，微波发射器的频率为2500khz，功率为10kw，然后进行微波、超声波协同提取，每次提取35分钟，提取3次，将所有提取液合并在一起，回收提取液中的乙醇，将提取液加入15llnak-ii大孔树脂柱进行吸附，流速控制在22l/h，吸附结束后依次用150l水-52l10％乙醇溶液-112l50％乙醇溶液进行洗脱，收集50％乙醇洗脱液，加入截留分子量3000-7000的过滤膜进行超滤，将进口压力控制在0.2-0.7mpa，过滤液再加入截留分子量150的纳滤膜进行浓缩，浓缩液转入萃取罐，加入7bv的水饱和正丁醇萃取4次，将萃取液浓缩，然后回收正丁醇，即可得到浓缩浸膏。浓缩浸膏加入15bv的乙酸乙酯溶解，除去水层，过滤不溶物，滤液加入无水硫酸钠回收乙酸乙酯，将滤液内加入二氯甲烷，然后搅匀直至有沉淀析出，随后放置结晶，结晶物再用乙酸乙酯溶解加入二氯甲烷重复结晶3次，过滤减压干燥得莫诺苷产品351g，含量99％。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。