本发明属于生物工程技术领域，特别涉及一种从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法。
背景技术：
橄榄油在国际上有“液体黄金”，“美女之油”，“地中海甘露”等美誉。在西方国家，无论是营养学家，医学家，食品科学研究人员，还是消费者都公认橄榄油是健康之油。许多疾病的发展都涉及到大量的脂肪饮食，一些实验室研究已经指出橄榄油中的酚类和其他同族物质水解产生具有强抗癌活性的小酚类组分。酚类物质有非常多的生物学作用，特别是羟基酪醇对低密度脂蛋白(LDL)具有有效的抗氧化保护作用、抑制血小板凝集。羟基酪醇是一种天然多酚类化合物，具有多种生物和药理活性，应用于美容产品保健品，能有效增强皮肤弹性和润泽，具除皱抗衰老之功效；有助于人体对矿物质的吸收，无需补钙，自然吸收，保持骨密度，减少骨骼疏松，同时提高内分泌系统功能，促进新陈代谢，促进伤口愈合，消除体内自由基，恢复人体脏腑器官的健康状态，防止脑衰，延缓衰老，保持青春活力；可以防治肺癌、乳腺癌、子宫癌、前列腺癌等，促进癌症后期恢复和提高化疗效果；防治因吸烟导致的多种病变；对动脉硬化、高血压、心脏病、脑溢血等的预防与治疗有奇效，优于同类药品；此外，羟基酪醇可作为天然的抗菌、抗病毒和杀真菌产品用于农业和虫害控制用途。因此具有巨大的医疗作用前景。
羟基酪醇可以来源于橄榄叶、橄榄油和加工橄榄油产生的废水中。而相对橄榄油，橄榄叶的来源更加丰富，但是橄榄叶中的羟基酪醇含量相对橄榄油中少很多，这是个技术难题。因此，如何提高工艺，从橄榄叶中提取高纯度的羟基酪醇是目前研究的重点。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法该方法制备得到的羟基酪醇提取率和纯度高，扩充了羟基酪醇的来源，充分利用资源。
为实现上述目的，本发明所要解决的技术方案为：
本发明提供从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取橄榄叶，除杂洗净，烘干，粉碎；
2)向粉碎的橄榄叶中加入水，在50～70MPa和30～40℃下高压微射流超微粉碎进行处理，得到膏状浆液；
3)再向膏状浆液中加入同等重量的乙醇溶液，在350～550W功率下微波提取12～24min，得到提取液；
4)提取液进大孔吸附树脂柱层析，以乙酸乙酯溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；
5)将洗脱液过截留分子量为16～28万的中空纤维膜，得到浓缩液；
6)干燥，得到羟基酪醇。
本发明所述步骤1)中，将橄榄叶烘干至含水量至40～60％。烘干有利于粉碎。
本发明所述步骤1)中，粉碎至120～200目。在这里细度下有利于后面的步骤处理，制备得到的羟基酪醇纯度比较高。
本发明所述步骤2)中，高压微射流超微粉碎进行处理4～9min。高压微射流超微粉碎设备处理得到的溶液颗粒粒径分布均匀，压力高达100～200MPa，细化效果可达0.lum甚至以下，具有操作简单、无污染、可在线清洁消毒、可高效率进行细胞破壁等诸多优点，同时缩短后面提取的时间，缩短制备周期。
本发明所述步骤2)中，加入橄榄叶重量12～18倍水。在这个料液比下，处于饱和状态，达到最佳的配比。
本发明所述步骤3)中，乙醇溶液的体积浓度为55～75％。乙醇溶液的体积浓度过高，不利于羟基酪醇的提取，过低提取不完。
本发明所述步骤4)中，乙酸乙酯溶液的用量为树脂柱床体积的3～6倍。在这个用量的下，羟基酪醇比较容易洗脱出来。
本发明所述步骤6)中，真空冷冻干燥，有利于保持羟基酪醇的生物活性。
本发明通过使用高压微射流超微粉碎技术处理柿子原料，利用高压微射流超微粉碎设备产生挤压力、剪切力、冲击力，经过液-液、液-固之间的高速撞击、高剪切、空穴作用等，使物料的分子结构发生变化；再进行微波处理，条件温和，最大限度提高羟基酪醇的提取率和纯度，同时有利于保护有效成分不被破坏，同时通过大孔吸附树脂柱层析进一步提高纯度，过中空纤维膜有利于提高羟基酪醇的生物活性，本发明方法制备得到的羟基酪醇提取得率和产物纯度均较高，有效扩充了羟基酪醇的来源。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1
从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取橄榄叶，除杂洗净，烘干至含水量至40％，粉碎至200目；
2)向粉碎的橄榄叶中加入橄榄叶重量12倍水，在70MPa和30℃下高压微射流超微粉碎进行处理9min，得到膏状浆液；
3)再向膏状浆液中加入同等重量的体积浓度为55％的乙醇溶液，在550W功率下微波提取12min，得到提取液；
4)提取液进大孔吸附树脂柱层析，以树脂柱床体积的4倍的乙酸乙酯溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；
5)将洗脱液过截留分子量为16万的中空纤维膜，得到浓缩液；
6)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇，HPLC检测，羟基酪醇纯度达99.8％，提取率为92.6％。
实施例2
从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取橄榄叶，除杂洗净，烘干至含水量至45％，粉碎至180目；
2)向粉碎的橄榄叶中加入橄榄叶重量15倍水，在65MPa和35℃下高压微射流超微粉碎进行处理7min，得到膏状浆液；
3)再向膏状浆液中加入同等重量的体积浓度为60％的乙醇溶液，在500W功率下微波提取15min，得到提取液；
4)提取液进大孔吸附树脂柱层析，以树脂柱床体积的6倍的乙酸乙酯溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；
5)将洗脱液过截留分子量为19万的中空纤维膜，得到浓缩液；
6)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇，HPLC检测，羟基酪醇纯度达99.6％，提取率为91.6％。
实施例3
从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取橄榄叶，除杂洗净，烘干至含水量至50％，粉碎至160目；
2)向粉碎的橄榄叶中加入橄榄叶重量14倍水，在60MPa和35℃下高压微射流超微粉碎进行处理6min，得到膏状浆液；
3)再向膏状浆液中加入同等重量的体积浓度为60％的乙醇溶液，在450W功率下微波提取18min，得到提取液；
4)提取液进大孔吸附树脂柱层析，以树脂柱床体积的5倍的乙酸乙酯溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；
5)将洗脱液过截留分子量为22万的中空纤维膜，得到浓缩液；
6)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇，HPLC检测，羟基酪醇纯度达99.7％，提取率为90.2％。
实施例4
从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取橄榄叶，除杂洗净，烘干至含水量至55％，粉碎至140目；
2)向粉碎的橄榄叶中加入橄榄叶重量16倍水，在55MPa和40℃下高压微射流超微粉碎进行处理5min，得到膏状浆液；
3)再向膏状浆液中加入同等重量的体积浓度为65％的乙醇溶液，在400W功率下微波提取21min，得到提取液；
4)提取液进大孔吸附树脂柱层析，以树脂柱床体积的4倍的乙酸乙酯溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；
5)将洗脱液过截留分子量为25万的中空纤维膜，得到浓缩液；
6)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇，HPLC检测，羟基酪醇纯度达99.9％，提取率为93.1％。
实施例5
从橄榄叶中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取橄榄叶，除杂洗净，烘干至含水量至60％，粉碎至120目；
2)向粉碎的橄榄叶中加入橄榄叶重量18倍水，在50MPa和30℃下高压微射流超微粉碎进行处理4min，得到膏状浆液；
3)再向膏状浆液中加入同等重量的体积浓度为75％的乙醇溶液，在350W功率下微波提取24min，得到提取液；
4)提取液进大孔吸附树脂柱层析，以树脂柱床体积的3倍的乙酸乙酯溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；
5)将洗脱液过截留分子量为28万的中空纤维膜，得到浓缩液；
6)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇，HPLC检测，羟基酪醇纯度达99.8％，提取率为92.1％。