本发明涉及一种具有抗炎活性的酚酸类化合物的制备方法及其应用，属于天然药物医药技术领域。
背景技术：
百尾参为百合科(liliaceae)万寿竹属(disporum)植物万寿竹(disporumcantoniense(lour)merr)的根及根茎，别名又叫白味参、百尾笋、白龙须。百尾参为多年生草本植物，其味甘、淡，性平。具有抗炎、镇痛、止咳的生物活性。我们对百尾参的化学成分及其生物活性进行了较为系统的研究，并对分离得到的化合物进行了抗炎活性的研究。本专利即首次报道了其中一个新化合物及其制备方法和抗炎活性。
技术实现要素：
本发明的目的是对百尾参进行活性成分研究，提供一种具有抗炎活性的新的酚酸类化合物。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种具有抗炎活性的酚酸类化合物，名称为：(3s,4s,5s)-3-羟基-4-甲氧基-2-(γ-内酯)-脱氧戊糖酸，其结构式如下：
本发明提供的一种具有抗炎活性的酚酸类化合物的制备方法，具体步骤为：
(1)提取：所用原料为百合科万寿竹属万寿竹的根及根茎，采自贵州安顺猫营镇，将干燥百尾参药材粉碎后，用75％乙醇溶液加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩得总提取物；
(2)粗分：将上述提取所得总提取物，用水溶解后，经hp-20离子型交换树脂，分别以水、30％乙醇溶液、60％乙醇溶液、95％乙醇溶液洗脱，每个梯度洗脱三个保留体积，收集30％乙醇溶液洗脱部位，于60℃减压浓缩得粗提物；
(3)精制：上述得粗提物，30％乙醇洗脱部位总浸膏63g，加水溶解，滤过，滤液上样于中压mci柱色谱，用10％、20％、30％、40％、50％的meoh-h2o洗脱得到5个流分a～e，取c流分经过中压ods反相柱色谱，用5％、10％、20％、50％meoh-h2o洗脱，其中20％meoh-h2o部位再经制备型hplc制备，以体积比为5:95的甲醇-水为流动相，检测波长254nm，流速2ml/min，保留时间22min处制备得该化合物。
其中，步骤(1)所述的提取方法包括冷浸法、渗漉法、微波提取法、超声提取法、回流提取法和连续回流提取法。
本发明提供了一种酚酸类化合物在制备抗炎药物中的应用。
本发明所提供的一种具有抗炎活性的酚酸类化合物，将化合物和药学上可接受的载体制备成片剂、胶囊剂、注射剂、粉针剂、颗粒剂、脂肪乳剂、微囊、滴丸、软膏剂或透皮控释贴剂等剂型。
本发明提供的一种具有抗炎活性的酚酸类化合物制备方法简单易行，所得化合物纯度高，具有良好的经济效益和应用前景。
附图说明
图1为本发明提供的一种具有抗炎活性的酚酸类化合物的结构示意图；
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
制备百尾参提取物
(1)提取：所用原料为百合科万寿竹属万寿竹的根及根茎，采自贵州安顺猫营镇，将干燥百尾参药材粉碎后，用75％乙醇溶液加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩得总提取物；
(2)粗分：将上述提取所得总提取物，用水溶解后，经hp-20离子型交换树脂，分别以水、30％乙醇溶液、60％乙醇溶液、95％乙醇溶液洗脱，每个梯度洗脱三个保留体积，收集30％乙醇溶液洗脱部位，于60℃减压浓缩得粗提物；
(3)精制：上述得粗提物，30％乙醇洗脱部位总浸膏63g，加水溶解，滤过，滤液上样于中压mci柱色谱，用10％、20％、30％、40％、50％的meoh-h2o洗脱得到5个流分a～e，取c流分经过中压ods反相柱色谱，用5％、10％、20％、50％meoh-h2o洗脱，其中20％meoh-h2o部位再经制备型hplc制备，以体积比为5:95的甲醇-水为流动相，检测波长254nm，流速2ml/min，保留时间22min处制备得该化合物。
结构鉴定：主要利用光谱技术，包括紫外、红外、质谱、核磁共振(1h-nmr、13c-nmr、2d-nmr)鉴定其结构，再经tof高分辨质谱精确确定其分子量及分子式。命名为(3s,4s,5s)-3-羟基-4-甲氧基-2-(γ-内酯)脱氧戊糖酸。分子式为c12h14o6，esi-ms：254.0796[m-h]-.其波谱数据见表1。
表1.化合物1h-nmr(dmso-d6，600mhz)和13c-nmr(dmso-d6，150mhz)
实施例2
抗炎活性试验
将单体化合物作用于脂多糖(lsp)诱导的raw264.7小鼠巨噬细胞，通过检测raw264.7细胞中il-1β，cox-2和tnf-αmrna的表达水平来检测其抗炎活性。
1、药物溶液的配制
(1)将单体化合物用dmso配制成100μg/ml溶液，置于-4℃保存；
(2)脂多糖(lipopolysaccharidefromescherichiacolie0127:b8-purifiedbyphenolextraction，lps)，购自sigma-aldrich公司，货号：l3129，用重蒸水配制成100μg/ml溶液，-20℃保存。
2、细胞株:raw264.7小鼠巨噬细胞，由中国科学研究院上海分院提供。
3、试验方法:
按常规复苏细胞并且传代培养，使用dmem+10％pbs+1％双抗(青霉素、链霉素)的完全培养基，接种细胞到6孔细胞培养板，每孔细胞悬液2ml，细胞数为1.5×105个；每个化合物按每孔不同药物浓度分成2组，即100μg/ml和10μg/ml组，置于5％co2培养箱于37℃培养48小时，加入lps(终浓度为10ng/ml)，诱导4小时，每孔加入lmltrizol试剂提取rna，用rna反转录试剂盒将rna反转录为cdna，用实时定量pcr方法(realtime-pcr)进行il-1β，cox-2和tnf-αmrna的表达水平检测，对检测数据进行统计分析，以确定药物预处理对于lps诱导的炎症反应是否具有抑制作用。结果如表2所示。
表2.化合物对脂多糖(lps)诱导的raw264.7小鼠巨噬细胞中il-1β，cox-2和tnf-αmrna表达水平相对值的影响(平均值±方差)
注：**p<0.01；药物预处理组与dmso+lsp组比较。
由表2数据可见，该化合物能显著抑制脂多糖(lsp)诱导的小鼠巨噬细胞raw264.7中il-1β，cox-2和tnf-αmrna的表达水平，且多呈剂量依赖关系，表明本发明所述化合物具有明显的抗炎活性。因此，可以用于制备新的抗炎活性药物。