7-位取代吡咯并三嗪类化合物或其药学上可用的盐，及其制备方法和用途与流程

本发明涉及药物化学领域，特别是涉及7-位取代吡咯并三嗪类化合物或其药学上可用的盐，及其制备方法和用途。

背景技术：

pi3k-akt-mtor信号通路是传递来自于受体酪氨酸激酶和g蛋白偶联受体信号的主要通路之一，在多种细胞功能中扮演着重要的角色。近年来的研究发现，在多种人类肿瘤中，pi3k-akt-mtor信号通路中的多个关键节点蛋白因编码基因存在突变或扩增而过度激活[vivancod等人，natrevcancer2(2002)，第489-501页]。其中pi3k作为联系细胞外信号与细胞应答效应的桥梁分子，是调节细胞生长、代谢和存活的关键因子，其过度激活与人类多种肿瘤的发生密切相关[sabbah等人，currmedchem18(2011)，第5528-5544页]。

pi3k属于细胞内的磷脂酰肌醇激酶，具有磷脂酰肌醇激酶活性以及丝/苏氨酸激酶活性。根据基因系列同源性、底物特异性及功能不同，pi3k超家族主要分为三类：i型、ii型、iii型[engelman等人，natrevgenet7(2006)，第606-619页]。i型pi3k是到目前为止研究最为广泛的一类，该类pi3k又可分为pi3kα，pi3kβ，pi3kδ，pi3kγ四个亚型。i型pi3k是由一个110kda的催化亚基和一个85kda的调节亚基构成的异二聚体酶。由于调节亚基和激活机理的不同，这四个亚型又可以归为两类：classia,classib。其中pi3kα，pi3kβ，pi3kδ属于classia，由受体酪氨酸激酶(receptortyrosinekinase,rtks)激活；而pi3kγ属于classib，由g-蛋白偶联受体激活。i型pi3k可以将磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸酯(phosphatidylinositol-4,5-phosphate,pip2)的3位磷酸化，生成磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸酯(phosphatidylinositol-3,4,5-phosphate,pip3)。pip3作为重要的第二信使，可以结合并激活多种细胞内的靶蛋白(如akt和pdk1)，形成一个信号级联复合物，最终调节细胞的增殖、分化、存活和迁移等。ii、iii型pi3k与i型pi3k的激酶区具有高度的同源性并且拥有相似的磷酸化功能，但其具体的生理作用知之甚少。ii型pi3k为单体结构，缺少调节亚基，分为pi3kc2α，pi3kc2β，pi3kc2γ三个亚型；主要参与细胞内物质的运输，细胞存活和膜受体蛋白的内化过程。iii型pi3k，只有一种亚型即vps34(vacuoleproteinsortingdefective34)，其关于胞吞作用和高尔基体的囊泡的运输功能已经广为人知[backer，biochemj410(2008)，第1-17页]。近年的研究表明vps34在细胞自噬过程中扮演了重要角色[ma等人，cellres24(2014)，第912-924页]。

目前，已经有数十个pi3k抑制剂处于临床研究阶段，它们大致可分为三类：非选择性pi3k抑制剂，i型pi3k选择性抑制剂和亚型选择性i型pi3k抑制剂。从现有的临床数据分析来看，虽然非选择性的pi3k抑制剂最早进入临床研究，但由于剂量限制性和毒性进展较慢。亚型选择性pi3k抑制剂进展最快，尤其是pi3kδ抑制剂，其中首个上市的pi3k抑制剂idelalisib就是pi3kδ抑制剂，另一个γ/δ选择性抑制剂duvelisib已经处于iii期临床[winkler等人，chembiol20(2013)，第1362-1372页]。在classia的催化亚基中，pi3kδ的催化亚基p110δ不同于广泛表达于全身各组织的p110α和p110β，主要在免疫系统中选择性高表达，如b细胞、t细胞等，与血液恶性肿瘤和炎症、免疫等疾病密切相关[fruman等人，nengljmed370(2014)，第1061-1062页]。idelalisib正是作为治疗复发的慢性淋巴细胞白血病(cll)、复发性滤泡b细胞非霍奇金淋巴瘤(fl)和复发性小淋巴细胞淋巴瘤三种血液瘤的药物被美国的fda批准上市。这彰显了pi3kδ抑制剂在血液恶性肿瘤治疗中的重大意义。

目前针对pi3kδ的抑制剂的骨架大都集中在idelalisib母核类似物上，例如us20140121224a1。而相比之下，以三嗪为母核的化合物就已有的数据来看，较idelalisib毒性明显降低。另一类研究较多的结构是噻吩并嘧啶母核，其代表化合物是pi3k泛抑制剂gdc-0941[folkes等人，jmedchem51(2008)，第5522-5532页]。这类化合物虽然也有pi3kδ选择性的报道[murray等人，jmedchem55(2012)，第7686-7695页]，但是其母核与吡咯并三嗪性质差异很大。而基于吡咯并三嗪为母核的pi3k抑制剂报到目前只有少数几例，例如cn102675323a，并且至今未有关于pi3kδ抑制活性的报道。

技术实现要素：

基于此，本发明的目的是提供一种通式i表示的7-位取代吡咯[2,1-f][1,2,4]并三嗪类化合物或其药学上可用的盐：

其中，

r1为卤素，或未取代或被至少一个取代基取代的c1-6烷基或c3-8环烷基，所述取代基为卤素；

r2为-c(oh)r5r6、-coc1-6烷基、-cn、未取代或被至少一个取代基取代的如下基团：c1-6烷基、-ch2nh-c1-6烷基、-ch2n(c1-6烷基)(c1-6烷基)、-ch2-(含1-2杂原子及3-6碳原子的饱和杂环基)、-ch2-(含1-2杂原子及3-6碳原子的饱和杂环基)-(含1-2杂原子及3-6碳原子的饱和杂环基)、-ch2-(含1-2杂原子及4-12碳原子的饱和螺环基)、-ch2-(含1-2杂原子及3-12碳原子的饱和桥环基)-(含1-2杂原子及3-6碳原子的饱和杂环基)，或-ch2-(含1-2杂原子及3-12碳原子的饱和桥环基)，所述取代基为卤素、-n(c1-4烷基)(c1-4烷基)、-o-c1-4烷基、-cn、-cooh、-cho、-nhs(o)2-c1-4烷基、-n(c1-4烷基)c(c1-4烷基)(c1-4烷基)-conh2、＝o、-oh、-s(o)2n(c1-4烷基)(c1-4烷基)、-s-c1-4烷基、-s(o)2-c1-4烷基、-co-c3-6环烷基、氧杂环丁烷基、吗啉基、c3-6环烷基、-c1-4烷基-n(c1-4烷基)(c1-4烷基)、未取代或被至少一个甲基取代的c1-4烷基-o-c1-4烷基、未取代或被至少一个甲基取代的-conh2、未取代或被至少一个甲基取代的c1-4烷基-conh2、未取代或被至少一个甲基取代的-coo-c1-4烷基、未取代或被至少一个甲基取代的-nh2、未取代或被至少一个甲基取代的-nhco-c1-4烷基、未取代或被至少一个取代基a取代的-co-c1-4烷基，所述取代基a为羟基或甲基，或者未取代或被至少一个取代基b取代的c1-4烷基，所述取代基b为-nh2、-och3、-conh2、-oh或-cf3。

所述r2中，所述杂原子选自n、o和s中的至少一种，

所述r5和r6各自独立地为氢或c1-6烷基；

r3为其中r7，r8，r9，r10各自独立地为氢或未取代或被至少一个取代基取代的c1-6烷基，所述取代基为卤素或羟基；

r4为-nh2、-nhconhr11或-nhco2r12，其中r11和r12各自独立地为未取代或被至少一个取代基取代的c1-6烷基、c3-8环烷基或苯基，所述取代基选自卤素和-c(o)or13中的至少一种，其中r13为未取代或被至少一个取代基取代的c1-6烷基，所述r13中的所述取代基为卤素。

在其中的一个实施例中，所述r1为卤素，或未取代或被至少一个取代基取代的c1-4烷基或c3-6环烷基。

在其中的一个实施例中，所述r1为-cl、-f、甲烷基、三氟甲烷基或二氟甲烷基。

在其中的一个实施例中，所述r2为-c(oh)r5r6、-coc1-4烷基、-cn、未取代或被至少一个取代基取代的如下基团：c1-4烷基、-ch2nh-c1-4烷基、-ch2n(c1-4烷基)(c1-4烷基)、-x-(含1-2杂原子的饱和四至六元杂环基)、-x-(含1-2杂原子的饱和四至六元杂环基)-(含1-2杂原子的饱和四至六元杂环基)、-x-(含1-2杂原子及4-8碳原子的饱和二环螺环基)、-x-(含1-2杂原子及3-8碳原子的饱和二环桥环基)-(含1-2杂原子的饱和四至六元杂环基)，或-x-(含1-2杂原子及3-8碳原子的饱和二环桥环基)，其中x为ch2，所述杂环基、螺环基和桥环基以n原子与x相连，所述r5和r6各自独立地为氢或c1-4烷基。

在其中的一个实施例中，所述r5和r6各自独立地为氢，甲基或乙基。

在其中的一个实施例中，所述r2中的所述取代基为-f、-cl、-br、-i、-ch3、-ch2ch3、-ch2ch(ch3)2、-ch2nh2、-ch2n(ch3)2、-ch2ch2nh2、-ch2ch2n(ch3)2、-ch2oh、-ch2och3、-ch2ch2oh、-c(ch3)2oh、-c(ch3)(cf3)oh、-c(cf3)2oh、-c(ch3)2och3、-c(ch3)2nh2、-ch2c(ch3)2oh、-ch(oh)ch(ch3)2、-c(ch3)2ch2oh、-c(ch3)2ch2och3、-cn、-cf3、-co2h、-cho、-coch3、-co2ch3、-co2c(ch3)3、-coch2oh、-coc(oh)(ch3)2、-coch(oh)ch3、-conh2、-conhch3、-con(ch3)2、-ch2conh2、-ch2con(ch3)2、-c(ch3)2conh2、-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-nhcoch3、-n(ch3)coch3、-nhs(o)2ch3、-n(ch3)c(ch3)2conh2、＝o、-oh、-och3、-s(o)2n(ch3)2、-sch3、-s(o)2ch3、-c(o)-环丙基、环丙基、环丁基、氧杂环丁烷基或吗啉基取代。

在其中的一个实施例中，所述r2为rx和ry分别为-n(ch3)2、-s(o)2ch3或未取代或被至少一个取代基取代的c1-4烷基，所述取代基为卤素、羟基、-conh2、-cf3、氨基或-och3。

在其中的一个实施例中，所述r2为

在其中的一个实施例中，所述r3为其中r7，r8，r9，r10各自独立地为氢或c1-4烷基。

在其中的一个实施例中，所述r7，r8，r9，r10各自独立地为h或甲基。

在其中的一个实施例中，所述r3为吗啉基或(s)-3-甲基吗啉基。

在其中的一个实施例中，所述r4为-nh2、-nhconhr11或-nhco2r12，其中r11和r12各自独立地为未取代或被至少一个取代基取代的c1-4烷基、c3-6环烷基或苯基，所述取代基选自氟、氯、溴和-c(o)or13中的至少一种，其中r13为c1-4烷基。

在其中的一个实施例中，所述r11和r12各自独立地为甲基、乙基、异丙基、环丙基、苯基、-ph-co2et-p或4-氟苯基。

所述的通式i表示的7-位取代吡咯[2,1-f][1,2,4]并三嗪类化合物或其药学上可用的盐，例如具有如下述通式中的一种表示的结构：

所述药学可接受的盐包括有机酸盐和无机酸盐，包括但不限于马来酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、乙酸盐、甲磺酸盐、盐酸盐、磷酸盐、硝酸盐或硫酸盐。

本发明的另一目的是提供通式i表示的7-位取代吡咯[2,1-f][1,2,4]并三嗪类化合物的制备方法，通过以下路线进行制备：

进一步来讲，各步骤所需试剂和条件包括：

步骤a：向化合物aa1'、二甲基甲酰胺(dmf)的无水乙腈溶液中，滴加氯磺酰异氰酸酯，反应得到化合物aa2'，或者步骤b：将化合物aa1”溶解于氯仿中，加入n-氯代丁二酰亚胺进行反应，得到化合物aa2”；

步骤c：向化合物aa2'、k2co3、nh4cl、浓氨水、甲基三辛基氯化铵的甲基叔丁基醚溶液中，滴加5％质量百分比的次氯酸钠溶液，反应得到化合物aa3，或者步骤d：将化合物aa2”溶解于无水二甲基甲酰胺中，加入nah，搅拌后加入o-(2,4-二硝基苯基)-羟胺，反应得到化合物aa3；

步骤e：将化合物aa3溶于饱和氨甲醇溶液或氨的甲醇溶液中，反应得到化合物aa4；

步骤f：将化合物aa4与醛、无水氯化铜、二甲亚砜混合，反应得到化合物aa5；

步骤g：向化合物aa5和n,n-二甲基氨基吡啶或二甲基氨基吡啶的混合物中加入三氯氧磷，反应得到化合物aa6；

步骤h：向化合物aa6中，加入无水四氢呋喃和吗啉，反应得到化合物aa7；

步骤i：向化合物aa7和一水次亚磷酸钠的醋酸/水/吡啶悬浮液中，加入雷尼镍，反应得到化合物aa8；和

步骤j：将化合物aa8、氰基硼氢化钠和胺悬浮于甲醇中，加入醋酸，反应得到产物；或者步骤j：向化合物aa8的无水四氢呋喃溶液中加入甲基溴化镁，反应得到产物；或者步骤j：向化合物aa8的无水二氯甲烷溶液中加入二乙胺基三氟化硫(dast)，反应得到产物。

在其中一个实施例中，化合物p-28通过以下路线进行制备：

具体包括以下步骤：

步骤1：将化合物p-28-1溶于二氯甲烷与水的混合液中，随后加入三氟甲基亚磺酸钠，冷却上述体系并缓慢滴加70％过氧叔丁醇水溶液，随后加入二甲基亚砜，升温反应得到化合物p-28-2；

步骤2：将化合物p-28-2和三氯氧磷加入到甲苯中，随后加入n,n-二甲基苯胺，于回流状态下反应得到氯代物粗品，将氯代物粗品溶于无水四氢呋喃中，0℃下加入吗啉，于室温下搅拌直到原料反应完全，浓缩得粗品直接下一步反应；

步骤3：将步骤2所得粗品加入甲醇溶解，随后加入水和氢氧化钠，于回流下反应直到原料完全消失，浓缩，加入水，调ph值析出固体，干燥，直接下一步反应；

步骤4：将步骤3的粗品、苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(hbtu)、三乙胺和2-(4-哌啶基)-2-丙醇加入n，n-二甲基甲酰胺(dmf)中，反应得到化合物p-28-5；和

步骤5：将p-28-5溶于无水四氢呋喃中，随后缓慢滴加甲硼烷/四氢呋喃(bh3/thf)，滴加完毕，升温反应体系进行反应，随后冷却反应体系并缓慢滴加浓盐酸，滴加完毕，升温反应得到化合物p-28。

本发明的另一个目的是提供通式i表示的7-位取代吡咯[2,1-f][1,2,4]并三嗪类化合物或其药学上可用的盐在制备pi3k活性抑制剂中的用途。

在其中一个实施例中，所述pi3k活性抑制剂对pi3kδ具有选择性抑制作用。

在其中一个实施例中，所述pi3k活性抑制剂用在治疗与pi3k通道相关的疾病的药物中。

优选的，所述与pi3k通道相关的疾病包括肿瘤、白血病和自身免疫性疾病。

另外，本发明提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的通式i表示的7-位取代吡咯[2,1-f][1,2,4]并三嗪类化合物或其药学上可用的盐，所述药物组合物用于治疗与pi3k通道相关的疾病。

本发明的发明人通过合理设计，综合考虑化合物的药代动力学因素，得到了一类新型的7-位取代吡咯[2,1-f][1,2,4]并三嗪类化合物。该类化合物显示较好的pi3k抑制活性，能有效地抑制pi3k激酶活性，并且由于7-位基团的引入，生物利用度等药代动力学性质有较大提高和改善；此外，本发明中的化合物表现出了对pi3kδ不可预期的高选择性和强抑制活性，因此这些化合物能用来治疗与pi3k通道相关的疾病，尤其是用来抗癌或者治疗肿瘤、白血病及自身免疫性疾病。经过进一步的优化和筛选后，有望研发成为新型的抗肿瘤药物。

具体实施方式

本文中所述的“烷基”指的是直链烷基或支链烷基。

本文中所述的“取代”指的是取代一个或多个氢原子。本文中的卤素可以选自f,cl,br和i中的至少一种，优选为f和cl中的至少一种。

下面结合实施例对本发明作进一步阐述，但这些实施例绝对不是对本发明的任何限制。所有实施例中，¹hnmr由brucheram-400型和gemini-300型核磁共振仪记录，化学位移以δ(ppm)表示；质谱由mat-95型质谱仪记录；分离用硅胶为200-300目。

步骤a：4-氰基-5-甲基-1h-吡咯-2-甲酸乙酯(aa2')的制备

冰浴下，向化合物aa1'(1.0g,6.5mmol)、dmf(1.3ml)的无水乙腈(20ml)溶液中，滴加氯磺酰异氰酸酯(0.7ml，8.0mmol)，移至室温，反应过夜。用饱和碳酸钠溶液(20ml)淬灭，加水稀释，乙酸乙酯(50ml)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水(100ml)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品，色谱柱纯化(石油醚/乙酸乙酯：3/1)，得白色化合物(980mg，84％)。

¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ10.07(brs1h),7.03(d,j＝2.53hz,1h),4.34(q,j＝7.13hz,2h),2.47(s,3h),1.37(t,j＝7.13hz,3h)。

步骤c：1-氨基-4-氰基-5-甲基-1h-吡咯-2-甲酸乙酯(aa3')的制备

冰盐浴下，向化合物aa2'(200mg，1.1mmol)，k2co3(840mg,6.0mmol)，nh4cl(385mg,7.2mmol)，浓氨水(1.2ml)，甲基三辛基氯化铵(0.010ml)的甲基叔丁基醚(50ml)溶液中，经恒压滴液漏斗滴加5％(质量百分比)的次氯酸钠溶液(12ml)，移至室温反应4小时。饱和硫代硫酸钠淬灭，分出甲基叔丁基醚层，水层用乙酸乙酯(50ml)萃取一次，合并有机层，水洗三次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品，色谱柱纯化(石油醚/乙酸乙酯：4/1)，得无色液体(183mg，86％)，放置后固化。

1hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.01(s,1h),5.46(s,2h),4.30(q,j＝7.13hz,2h),2.42(s,3h),1.35(t,j＝7.13hz,3h)。

步骤e：1-氨基-4-氰基-5-甲基-1h-吡咯-2-甲酰胺(aa4')的制备

将化合物aa3'(800mg，4.1mmol)溶于100ml饱和的氨甲醇溶液或氨的甲醇溶液，80℃封管反应2天，冷却至室温，浓缩得黄色固体(680mg，100％)。

¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.01(brs,1h),7.39br(s,1h),7.02(s,1h),6.70(brs,2h),2.27(s,3h)。

步骤b：4-氰基-5-氯-1h-吡咯-2-甲酸乙酯(aa2”)的制备

将化合物aa1”(2.0g，12.2mmol)溶解于氯仿中，加入n-氯代丁二酰亚胺(2.0g，15.0mmol)，室温搅拌过夜；加水(100ml)稀释，分出有机层，水层用氯仿(100ml)萃取两次，合并有机相，饱和食盐水(100ml)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品，色谱柱纯化(石油醚/乙酸乙酯：20/1)得白色固体(510mg，22％)。

¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ10.68(s,1h),7.09(d,j＝2.8hz,1h),4.39(q,j＝7.1hz,2h),1.39(t,j＝7.2hz,3h)。

步骤d：1-氨基-4-氰基-5-氯-1h-吡咯-2-甲酸乙酯(aa3”)的制备

将化合物aa2”(300mg，1.5mmol)溶解于无水dmf(10ml)中，冰浴下，加入nah(60％，分散于矿物油中，75mg，1.9mmol)，继续搅拌30分钟，加入o-(2,4-二硝基苯基)-羟胺(360mg，1.8mmol)，室温下搅拌6小时，将反应液倒入水(50ml)中，用乙酸乙酯(50ml)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水(100ml)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯：10/1)得到白色固体(305mg，95％)。

¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.09(s,1h),5.80(s,2h),4.34(q,j＝7.1hz,2h),1.37(t,j＝7.1hz,3h)。

步骤e：1-氨基-4-氰基-5-氯-1h-吡咯-2-甲酰胺(aa4”)的制备

以化合物aa3”(350mg，1.6mmol)为原料，参照化合物aa4'的制备过程得黄色固体(290mg，100％)。

¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.12(brs,1h),7.63(brs,1h),7.19(s,1h),6.86(brs,2h)。

步骤f：化合物aa5的合成

化合物aa4(1.0equiv.)，n-(5-甲酰基-4-(三氟甲基)吡啶基-2-)特戊酰胺(1.2equiv.，课题组制备)，无水氯化铜(1.0equiv.)的二甲亚砜溶液，升温至100℃反应。反应完毕后，冷却，倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，合并有机层，饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇：50/1)纯化得黄色固体。

化合物aa4'(600mg，3.7mmol)，对应的醛(1.2g，4.4mmol)，无水氯化铜(490mg，3.7mmol)，二甲亚砜(25ml)；得黄色固体(1.3g,85％)。

¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.82(s,1h),8.62(s,1h),8.43(brs,1h),7.27(s,1h),2.60(s,3h),1.38(s,9h)。

化合物aa4”(200mg，1.1mmol)，对应的醛(362mg，1.3mmol)，无水氯化铜(150mg，1.1mmol)，二甲亚砜(15ml)；得黄色固体(408mg,85％)。

¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.80(s,1h),8.62(s,1h),8.41(s,1h),7.36(s,1h),1.38(s,9h)。

步骤g和h：化合物aa7的合成

向化合物aa5(1.0equiv.)，4-二甲氨基吡啶(2.0equiv.)的混合物中加入三氯氧磷，回流10小时。冷却后，减压除掉三氯氧磷，依次加入无水四氢呋喃，吗啉，回流2小时。减压蒸掉四氢呋喃，加水，乙酸乙酯萃取，依次用饱和食盐水、水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯：4/1)纯化得白色固体。

化合物aa5'(1.0g，2.4mmol)，4-二甲氨基吡啶(583mg，4.8mmol)，三氯氧磷(20ml)，四氢呋喃(100ml)，吗啉(5ml)；得白色固体(980mg，84％)。

¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.76(s,1h),8.72(s,1h),8.24(brs,1h),6.99(s,1h),4.06(t,j＝4.77hz,4h),3.84(t,j＝4.73hz,4h),2.65(s,3h),1.36(s,9h)。

化合物aa5”(360mg，0.8mmol)，4-二甲氨基吡啶(200mg，1.6mmol)，三氯氧磷(5ml)，四氢呋喃(50ml)，吗啉(2ml)；得白色固体(370mg，88％)。

¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.75(s,1h),8.72(s,1h),8.24(s,1h),7.09(s,1h),4.07(t,j＝4.8hz,4h),3.86(t,j＝4.8hz,4h),1.36(s,9h)。

化合物aa5'(800mg，1.9mmol)，4-二甲氨基吡啶(466mg，3.8mmol)，三氯氧磷(15ml)，四氢呋喃(100ml)，(s)-3-甲基吗啉(5ml)；得黄色固体(720mg，76％)。

步骤i：化合物aa8的合成

往化合物aa7(1.0equiv.)，一水次亚磷酸钠(6.7equiv.)的醋酸/水/吡啶(v/v/v：1/1/2)悬浮液中，加入雷尼镍，升温至60℃反应。冷却至室温，过滤，乙酸乙酯萃取，3n盐酸洗涤3次，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇：50/1)纯化得黄色固体。

化合物aa7'(1.0g，1.0mmol)，一水次亚磷酸钠(710mg，6.7mmol)，醋酸/水/吡啶(v/v/v：1/1/2)(50ml)，雷尼镍(750mg)，得黄色固体(232mg，47％)。

¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ10.15(s,1h),8.78(brs,1h),8.72(s,1h),8.25(s,1h),7.17(s,1h),4.10(t,j＝4.8hz,8h),3.84(t,j＝4.8hz,8h),2.79(s,3h),1.36(s,9h)。

化合物aa7”(300mg，0.6mmol)，一水次亚磷酸钠(426mg，4.0mmol)，醋酸/水/吡啶(v/v/v：1/1/2)(25ml)，雷尼镍(450mg)，得黄色固体(130mg，42％)。

化合物aa7”'(600mg，1.2mmol)，一水次亚磷酸钠(852mg，8.0mmol)，醋酸/水/吡啶(v/v/v：1/1/2)(50ml)，雷尼镍(900mg)，得黄色色固体(420mg，83％)。

步骤j：化合物p-(1-9)，12，(29-32)，(34-35)，(38-43)，(45-46)的合成

化合物aa8(0.2mmol)、氰基硼氢化钠(0.4mmol)和对应的胺(0.24mmol)悬浮于甲醇(20ml)中，加入醋酸(0.05ml)，室温搅拌。反应完毕后，加水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(100ml)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水(100ml)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇：40/1)得产物。

将所得产物溶解于甲醇(15ml)中，加入10个当量的1m氢氧化钾溶液，回流反应。反应完毕后，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇：40/1)纯化。

黄色固体(38mg，两步总收率：44％)。¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.62(s,1h),6.80(s,1h),6.73(s,1h),4.90(brs,2h),4.03(t,j＝4.5hz,4h),3.81(t,j＝4.5hz,4h),3.50(s,2h),2.48(s,3h),2.28(s,6h)。

黄色固体(44mg，两步总收率：45％)。¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.63(s,1h),6.80(s,1h),6.77(s,1h),4.89(brs,2h),4.04(brs,4h),3.87(s,2h),3.82(brs,4h),2.77(t,j＝3.3hz,2h),2.49(s,3h),2.35(t,j＝6.3hz,2h),2.23(s,6h),1.80–1.64(m,2h)。

黄色固体(49mg，两步总收率：52％)。¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.62(s,1h),6.79(s,1h),6.72(s,1h),4.88(brs,2h),4.04(t,j＝3.9hz,4h),3.91–3.73(m,6h),3.46(t,j＝6.7hz,2h),3.32(s,3h),2.77(t,j＝6.8hz,2h),2.49(s,3h),1.89–1.72(m,2h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ158.83,153.94,151.95,151.83,138.11(q,j＝32.4hz),126.24,122.95(q,j＝274.3hz),122.44,121.65,111.79,105.21(q,j＝5.5hz),103.35,71.40,66.81,58.71,47.06,45.94,45.66,29.90,9.24。

黄色固体(38mg，两步总收率：38％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.63(s,1h),6.80(s,1h),6.76(s,1h),4.84(brs,2h),4.03(t,j＝4.9hz,4h),3.82(t,j＝4.8hz,4h),3.63(s,2h),3.53(t,j＝5.6hz,2h),3.35(s,3h),2.63(t,j＝5.6hz,2h),2.48(s,3h),2.33(s,3h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ158.77,153.94,151.95,151.77,138.13(q,j＝32.8hz),127.07,122.28(q,j＝275.7hz),121.72,120.25,111.93,105.22(q,j＝5.6hz),104.45,70.60,66.81,58.92,56.06,54.13,45.91,42.68,9.36。

黄色固体(68mg，两步总收率：64％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.65(s,1h),6.82(s,1h),6.74(s,1h),4.94–4.88(m,2h),4.06(t,j＝4.6hz,4h),3.84(t,j＝4.8hz,4h),3.59(s,2h),3.06(d,j＝10.7hz,2h),2.51(s,3h),1.97(t,j＝11.3hz,2h),1.81–1.67(m,2h),1.35–1.25(m,3h),1.19(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ158.79,153.93,151.95,151.77,138.12(q,j＝32.3hz),127.33,122.95(q,j＝274.5hz),121.68,120.06,111.82,105.23(q,j＝6.2hz),104.54,72.47,66.81,54.58,54.06,47.40,45.93,27.00,26.84,9.48。

黄色固体(58mg，两步总收率：58％)。¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.62(s,1h),6.80(s,1h),6.69(s,1h),4.84(brs,2h),4.03(t,j＝4.8hz,4h),3.82(t,j＝4.8hz,4h),3.57(s,2h),2.68–2.45(m,8h),2.41(q,j＝7.2hz,2h),1.07(t,j＝7.2hz,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ158.78,153.94,151.93,151.79,138.15(q,j＝32.5hz,cf3c),127.42,122.94(q,j＝274.4hz,cf3),121.71,119.89,111.77,105.23(q,j＝5.5hz,cf3cch),104.57,66.81,54.42,52.97,52.83,52.28,45.94,12.01,9.45。

黄色固体(55mg，两步总收率：53％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.64(s,1h),6.80(s,1h),6.71(s,1h),4.99(brs,2h),4.04(t,j＝4.8hz,4h),3.83(t,j＝4.8hz,4h),3.56(s,2h),3.09–2.86(m,2h),2.50(s,3h),2.29(s,6h),2.21–2.07(m,1h),2.05–1.93(m,2h),1.87–1.75(m,2h),1.65–1.44(m,2h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ158.88,153.92,151.93,151.77,138.07(q,j＝32.5hz),127.26,122.95(q,j＝274.6hz),121.58,120.29,111.78,105.21(q,j＝5.7hz),104.45,66.80,62.32,54.34,52.93,45.92,41.72,28.29,9.45。

黄色固体(46mg，两步总收率：47％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.62(s,1h),6.81(s,2h),4.87(brs,2h),4.05(t,j＝4.8hz,4h),3.83(t,j＝4.8hz,4h),3.70(s,2h),2.85(s,4h),2.78(s,4h),2.49(s,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ158.82,153.96,152.08,151.89,138.16(q,j＝32.3hz),127.58,122.93(q,j＝274.6hz),121.55,112.14,105.29(q,j＝5.4hz),105.03,66.80,54.99,54.49,45.96,27.36,9.47。

黄色固体(79mg，两步总收率：72％)。¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.62(s,1h),6.81(s,1h),6.64(s,1h),4.84(brs,2h),4.03(t,j＝4.5hz,4h),3.82(t,j＝4.9hz,4h),3.60(s,2h),3.24(t,j＝5.0hz,4h),2.77(s,3h),2.58(t,j＝4.9hz,4h),2.49(s,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ158.83,153.95,151.99,151.95,138.12(q,j＝32.4hz,cf3c),127.42,122.95(q,j＝274.4hz,cf3),121.57,119.23,111.90,105.25(q,j＝5.5hz,cf3cch),104.48,66.79,54.26,52.19,45.95,45.84,34.28,9.44。

往化合物p-9(160mg，0.3mmol)的氯仿(10ml)溶液中，加入甲烷磺酸(370μl，0.3mmol)，室温反应2小时后，加入无水乙醚(50ml)稀释，过滤，干燥，得黄色化合物p-9甲烷磺酸盐(145mg，77％)。

¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ9.89(brs,1h),8.51(s,1h),7.25(s,1h),7.23(s,1h),4.47(brs,2h),4.02(t,j＝5.0hz,4h),3.76(t,j＝4.9hz,,4h),3.73(s,2h),3.57–3.47(m,2h),3.30–3.09(m,4h),3.01(s,3h),2.52(brs,2h),2.43(brs,6h).¹³cnmr(126mhz,dmso-d6)δ157.47,153.93,151.45,145.46,138.57(q,j＝33.3hz),129.45,122.77(q,j＝275.06hz),118.65,112.36,111.92,110.13,107.64,66.42,51.32,50.27,46.01,42.96,40.23,35.51,9.65。

黄色固体(63mg，两步总收率：53％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.63(s,1h),6.83(s,1h),6.70(s,1h),4.99(brs,2h),4.24–3.98(m,4h),3.96–3.78(m,4h),3.60(s,2h),3.46(brs,4h),2.51(s,3h),2.44(brs,4h),1.47(s,9h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ158.91,154.77,153.94,151.85,151.72,138.18(q,j＝32.6hz),127.40,122.93(q,j＝274.1hz),121.50,119.51,111.85,105.39(q,j＝5.6hz),104.52,79.65,66.79,54.45,52.74,45.93,28.43,9.45。

黄色固体(45mg两步总收率：43％)。¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ8.62(s,1h),6.80(s,1h),6.70(s,1h),4.84(d,j＝7.5hz,2h),4.06–4.00(m,4h),3.95(d,j＝11.4hz,2h),3.83–3.80(m,4h),3.65(s,2h),3.47(t,j＝7.5hz,2h),3.36(t,j＝11.7hz,2h),2.88(t,j＝7.3hz,2h),2.32–2.16(m,2h),1.71–1.57(m,2h),1.52(ddd,j＝13.2,3.8,1.9hz,2h)。

黄色固体(40mg两步总收率：41％)。¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ8.62(s,1h),6.81(s,1h),6.65(s,1h),4.85(d,j＝5.3hz,2h),4.75(s,4h),4.05–4.00(m,4h),3.82(t,j＝4.9hz,4h),3.61(s,2h),3.42(s,3h),2.48(s,4h)。

黄色固体(36mg两步总收率：32％)。¹hnmr(300mhz,chloroform-d)δ8.61(s,1h),6.79(s,1h),6.72(s,1h),4.90(d,j＝5.8hz,2h),4.02(t,j＝4.7hz,4h),3.81(t,j＝4.8hz,5h),3.73–3.68(m,4h),3.57(s,2h),3.00(d,j＝11.1hz,2h),2.58–2.46(m,8h),2.18(dq,j＝11.2,5.9,4.2hz,1h),2.01(t,j＝11.1hz,

2h),1.82(d,j＝13.4hz,2h),1.58(td,j＝12.1,3.6hz,2h)。

对应的胺的合成参考wo2010138589(a1)，黄色固体(20mg两步总收率：18％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.61(s,1h),7.74–7.50(m,1h),6.81(s,1h),4.84(s,2h),4.67–4.60(m,2h),4.59–4.51(m,2h),4.32–4.13(m,2h),4.10–3.98(m,4h),3.83(t,j＝4.9hz,4h),2.92–2.74(m,1h),2.50(s,3h),2.21(d,j＝7.7hz,2h),2.06–1.97(m,4h),1.00–0.84(m,6h)。

黄色固体(52mg两步总收率：52％)。¹hnmr(300mhz,chloroform-d)δ8.62(s,1h),6.80(s,1h),6.67(d,j＝1.3hz,1h),4.84(d,j＝4.0hz,2h),4.08–3.98(m,4h),3.81(t,j＝4.8hz,4h),3.62(s,2h),3.37(dd,j＝4.3,1.5hz,8h),2.47(d,j＝1.5hz,3h),2.32(d,j＝1.5hz,3h)。

对应的胺的合成参考wo2010138589(a1)，黄色固体(75mg两步总收率：67％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.61(s,1h),7.14(d,j＝5.3hz,1h),6.80(s,1h),6.68(s,1h),5.54(d,j＝5.3hz,1h),4.93(s,2h),4.03(dd,j＝5.7,4.0hz,4h),3.82(dd,j＝5.7,4.0hz,4h),3.58(s,2h),2.59–2.52(m,6h),2.49(s,3h),1.20(s,8h)。

黄色固体(49mg两步总收率：47％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.61(s,1h),6.85(s,1h),6.81(s,1h),4.86(s,2h),4.04(t,j＝4.9hz,4h),3.82(q,j＝4.8,3.6hz,8h),3.58(t,j＝5.3hz,4h),3.28–3.25(m,2h),2.51(s,3h),1.81(t,j＝5.6hz,4h)。

对应的胺的合成参考wo2010138589(a1)，黄色固体(47mg两步总收率：44％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.61(s,1h),6.80(s,1h),6.77(s,1h),4.88(s,2h),4.03(dd,j＝5.7,4.1hz,4h),3.82(dd,j＝5.6,4.0hz,4h),3.75(d,j＝1.5hz,2h),3.47(s,2h),3.42(d,j＝12.1hz,2h),3.32(d,j＝10.1hz,1h),3.20(d,j＝10.2hz,1h),3.01(s,1h),2.78(dd,j＝9.2,2.4hz,1h),2.66(d,j＝2.4hz,2h),2.50(s,3h),2.24–2.14(m,1h),1.75(d,j＝9.7hz,1h),1.51(d,j＝9.7hz,1h)。

黄色固体(56mg两步总收率：51％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.59(s,1h),7.62(s,1h),6.82(s,1h),4.97(s,2h),4.74(t,j＝6.3hz,1h),4.67(d,j＝6.4hz,1h),4.55–4.44(m,2h),4.26–4.14(m,2h),4.07(dd,j＝5.7,4.0hz,4h),4.03–3.87(m,2h),3.86–3.80(m,4h),3.49(s,1h),3.35(d,j＝11.7hz,1h),2.82–2.62(m,1h),2.51(s,3h),2.21(t,j＝7.6hz,1h),2.04–1.97(m,2h),0.90–0.82(m,1h)。

对应的胺的合成参考wo2010138589(a1)，黄色固体(53mg两步总收率：47％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.62(s,1h),6.81(s,1h),6.77(s,1h),4.81(s,2h),4.03(dd,j＝5.7,4.1hz,4h),3.83–3.81(m,4h),3.72(d,j＝4.7hz,4h),3.60(s,2h),3.04(s,3h),2.50(s,3h),2.32(d,j＝5.3hz,4h),1.70(s,6h)。

对应的胺的合成参考wo2010138589(a1)，黄色固体(52mg两步总收率：48％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.61(d,j＝3.7hz,1h),6.81(s,1h),6.71(s,1h),4.88(s,2h),4.03(dq,j＝6.3,2.8,2.3hz,4h),3.85–3.79(m,4h),3.59(s,2h),3.34(s,2h),2.67–2.42(m,15h),1.04(s,6h)。

对应的胺的合成参考wo2010138589(a1)，黄色固体(52mg两步总收率：48％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.62(s,1h),6.80(s,1h),4.86(s,2h),4.04(dd,j＝5.7,4.1hz,4h),3.84–3.79(m,4h),3.62(s,2h),3.16(d,j＝1.4hz,2h),3.09–3.04(m,2h),2.48(d,j＝1.5hz,3h),2.02(d,j＝13.2hz,2h),1.67(d,j＝8.8hz,2h),1.45(s,2h),1.08(s,6h)。

对应的胺合成参考wo2013134226，黄色固体(50mg两步总收率：43％)。lc-msm/z：[m+h]⁺＝588.0。

对应的胺合成参考wo2013134226，黄色固体(61mg两步总收率：48％)。lc-msm/z：[m+h]⁺＝641.9。

步骤j：化合物p-33，36，37的合成

化合物aa8(0.2mmol)、氰基硼氢化钠(0.4mmol)和对应的boc保护的胺(0.24mmol)悬浮于甲醇(20ml)中，加入醋酸(0.05ml)，室温搅拌。反应完毕后，加水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(100ml)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水(100ml)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇：40/1)得产物。

产物溶于二氯甲烷(10ml)中，加入10倍当量的三氟乙酸，室温搅拌2天。反应结束后直接旋干。

将所得产物溶解于甲醇(15ml)中，加入10个当量的1m氢氧化钾溶液，回流反应。反应完毕后，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇：40/1)纯化。

黄色固体(52mg两步总收率：50％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.62(s,1h),6.81(s,1h),6.68(d,j＝3.4hz,1h),4.83(s,2h),4.03(t,j＝4.8hz,4h),3.82(t,j＝5.0hz,4h),3.49(d,j＝3.3hz,2h),3.36(s,2h),2.47(d,j＝3.4hz,3h),2.34(s,2h),1.93(s,4h),1.79(t,j＝5.3hz,4h)。

黄色固体(50mg两步总收率：48％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.60(s,1h),6.79(s,1h),6.67(s,1h),4.90(s,2h),4.02(dd,j＝5.7,4.1hz,4h),3.84–3.77(m,4h),3.67(s,2h),3.05(s,4h),2.77(dd,j＝6.6,4.0hz,4h),2.49(s,3h),1.76–1.69(m,4h)。

黄色固体(45mg两步总收率：46％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.62(d,j＝2.0hz,1h),6.81(s,1h),6.65(d,j＝3.8hz,1h),4.80(s,2h),4.03(q,j＝4.1,3.2hz,4h),3.82(t,j＝4.8hz,4h),3.74(s,2h),3.60(d,j＝2.5hz,2h),3.35(s,3h),3.30(d,j＝8.3hz,2h),2.51–2.46(m,4h)。

步骤j：化合物p-44的合成

化合物aa8(0.2mmol)、氰基硼氢化钠(0.4mmol)和n-乙酰基-2-(4-哌啶基)-2-丙胺(0.24mmol)悬浮于甲醇(20ml)中，加入醋酸(0.05ml)，室温搅拌。反应完毕后，加水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(100ml)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水(100ml)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇：40/1)得产物。

将所得产物溶解于浓盐酸(10ml)中，回流反应7天。反应完毕后，中和，柱层析(二氯甲烷/甲醇：10/1)纯化。

n-乙酰基-2-(4-哌啶基)-2-丙胺的合成参考wo2014043068，黄色固体(12mg，两步总产率11％)。lc-msm/z：[m+h]⁺＝533.0。

步骤j：化合物p-10的合成

化合物aa8``(0.2mmol)、氰基硼氢化钠(0.4mmol)和对应的胺(0.24mmol)悬浮于甲醇(20ml)中，加入醋酸(0.05ml)，室温搅拌。反应完毕后，加水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(100ml)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水(100ml)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇：40/1)得产物。

将所得产物溶解于甲醇(15ml)中，加入10个当量的1m氢氧化钾溶液，回流反应。反应完毕后，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇：40/1)纯化。

黄色固体(55mg，两步总收率：48％)。¹hnmr(300mhz,chloroform-d)δ8.63(d,j＝3.1hz,1h),6.82(d,j＝3.1hz,1h),6.65(s,1h),4.93(brs,1h),4.83(s,2h),4.56(d,j＝11.3hz,1h),4.09–3.97(m,1h),3.89–3.74(m,2h),3.72–3.53(m,4h),3.26(s,4h),2.78(s,3h),2.60(s,4h),2.49(s,3h),1.45(d,j＝6.8hz,3h).¹³cnmr(126mhz,chloroform-d)δ158.81,153.66,152.06,151.91,138.12(q,j＝32.3hz),127.41,122.94(d,j＝274.5hz).,121.65,111.92,105.26(d,j＝6.7hz),104.58,71.03,66.98,54.26,52.16,45.83,34.28,15.27,9.49。

步骤j：化合物p-11，(25-27)的合成

化合物aa8```(0.2mmol)、氰基硼氢化钠(0.4mmol)和对应的胺(0.24mmol)悬浮于甲醇(20ml)中，加入醋酸(0.05ml)，室温搅拌。反应完毕后，加水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(100ml)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水(100ml)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇：40/1)得产物。

将所得产物溶解于甲醇(15ml)中，加入10个当量的1m氢氧化钾溶液，回流反应。反应完毕后，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇：40/1)纯化。

黄色固体(34mg，两步总收率：30％)。¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.59(s,1h),6.80(s,1h),6.74(s,1h),4.87(brs,2h),4.04(t,j＝4.6hz,4h),3.83(t,j＝4.7hz,4h),3.67(s,2h),3.27(t,j＝4.9hz,4h),2.78(s,2h),2.64(t,j＝5.1hz,4h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ159.02,153.50,153.30,151.82,138.25(q,j＝32.8hz),122.85(q,j＝274.3hz),120.96,118.53,115.86,112.74,105.24(q,j＝6.1hz),104.61,66.69,53.04,52.06,46.00,45.79,34.38。

白色固体(35mg，收率：45％)。¹hnmr(400mhz,cd3od)δ8.31(s,1h),7.00(s,1h),6.82(s,1h),3.97(m,4h),3.72(m,4h),3.68(s,2h),3.23(s,2h),3.06(d,2h),2.16(t,2h),1.72(d,2h),1.33(m,4h),1.05(s,6h)。

白色固体(30mg，收率：40％)。¹hnmr(400mhz,cd3od)δ8.32(s,1h),6.94(s,1h),6.83(s,1h),3.97(m,4h),3.72(m,4h),3.55(br，s,1h),3.22(d,2h),2.92(d,2h),2.23(s,6h),2.03(d,2h),1.78(d,2h),1.47(d,2h),1.18(d,2h)。

白色固体(38mg，收率：42％)。¹hnmr(400mhz,cd3od)δ8.30(s,1h),6.97(s,1h),6.83(s,1h),4.00(m,4h),3.73(m,4h),3.65(s,2h),3.23(d,2h),2.66(m,4h),1.16(t,3h)。

化合物p-13，14的合成

将化合物p-12(500mg,)溶解于40ml二氯甲烷中，加入2.5ml三氟乙酸，室温搅拌2小时。反应完毕后，减压除掉溶剂，得油状物，加10ml甲醇溶解，加入乙醚(80ml)有固体析出，过滤得脱boc产物的三氟乙酸盐420mg。

将上述所得盐(按含一分子三氟乙酸计算，114mg，0.2mmol)，对应的酸(1.5equiv.)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(edc·hcl)(1.5equiv.)，1-羟基苯并三唑(hobt)(1.5equiv.)，n,n-二异丙基乙胺(dipea)(3equiv.)悬浊于dmf中，室温下反应。反应完毕后，加入水稀释，乙酸乙酯萃取三次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇：20/1)纯化得产品。

黄色固体(67mg，60％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.65(s,1h),6.84(s,1h),6.68(s,1h),4.91(s,2h),4.53(brs,1h),4.06(t,j＝4.8hz,4h),3.85(t,j＝4.8hz,4h),3.79–3.65(m,4h),3.60(s,2h),2.51(s,7h),1.50(s,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ174.93,158.85,153.94,151.94,151.92,138.12(q,j＝32.6hz),127.36,122.90(q,j＝274.06hz),121.55,119.38,111.87,105.27(q,j＝6.3hz),104.42,71.53,66.79,54.40,52.96,45.94,27.83,9.44。

黄色固体(55mg，50％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.66(s,1h),6.84(s,1h),6.68(s,1h),4.87(s,2h),4.47(t,j＝6.7hz,1h),4.07(t,j＝4.8hz,4h),3.90(d,j＝7.3hz,1h),3.86(t,j＝4.8hz,4h),3.82–3.71(m,1h),3.69–3.62(m,1h),3.61(s,1h),3.43(d,j＝5.2hz,2h),2.58–2.35(m,7h),1.34(d,j＝6.6hz,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ173.50,158.83,153.95,151.97,138.26,138.13(d,j＝32.8hz),127.37,122.95(q,j＝274.6hz),121.59,119.28,111.89,105.27,104.41,66.79,64.02,54.42,52.70,52.56,45.94,44.87,42.53,21.50,9.44。

化合物p-15的合成

氮气保护、冰浴下，往化合物aa8'(600mg，1.2mmol)的无水四氢呋喃(40ml)溶液中、加入1m甲基溴化镁(4.8ml，4.8mmol)，移至室温下反应。待反应完毕后，加水50ml稀释，用乙酸乙酯(100ml)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水(100ml)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇＝40/1)得黄色化合物(520mg，86％)。

将上述所得产物(400mg，0.8mmol)溶解于15ml甲醇中，加入10个当量的1m氢氧化钾溶液(8ml)，回流反应。反应完毕后，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇＝40/1)纯化得黄色化合物(270mg，80％)。

¹hnmr(300mhz,cdcl3)。δ8.59(s,1h),6.80(s,1h),6.75(s,1h),5.14(q,j＝4.8hz,1h),4.82(s,2h),4.04(t,j＝4.8hz,4h),3.82(t,j＝4.8hz,4h),2.53(s,3h),1.99(brs,1h),1.58(d,j＝6.4hz,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ158.78,154.14,152.05,151.93,128.13,125.24,111.85,105.25(q,j＝5.5hz),100.27,66.80,63.82,45.97,24.52,9.38。

化合物p-16的合成

氮气保护、冰浴下，往化合物aa8'(100mg，0.2mmol)的无水二氯甲烷(20ml)溶液中、加入1ml二乙胺基三氟化硫(dast)，移至室温下反应。待反应完毕后，缓慢加冰水10ml淬灭，加水(50ml)稀释，用二氯甲烷(50ml)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水(100ml)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，直接用于下一步反应。

将上述所得产物溶解于15ml甲醇中，加入10个当量的1m氢氧化钾溶液(2ml)，回流反应。反应完毕后，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇＝40/1)纯化得黄色化合物(38mg，两步总收率：：44％)。

¹hnmr(300mhz,cdcl3)。δ8.63(s,1h),6.86(t,j＝56.4hz,1h),6.85(s,1h),6.82(s,1h),4.85(brs,2h),4.06(t,j＝4.9hz,4h),3.84(t,j＝4.8hz,4h),2.58(s,3h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ158.98,154.52,152.94,151.96,138.17(q,j＝32.6hz),127.09(t,j＝6.3hz),122.88(q,j＝274.3hz),121.13,117.39(t,j＝25.8hz),112.40(t,j＝233.7hz),112.24,105.29(q,j＝6.1hz),101.21(t,j＝5.0hz),66.71,45.96,9.46。

化合物p-17，18的合成

-30℃下，向化合物p-9(110mg，0.2mmol)的无水氯仿(10ml)溶液中，加入无水三乙胺(30μl，0.25mmol)，滴加对应的氯甲酸酯(0.6mmol)的氯仿(5ml)溶液，维持在该温度下反应。待反应完毕后，缓慢加冰水10ml淬灭，加二氯甲烷(40ml)稀释，分出有机层，饱和食盐水(50ml)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇：50/1)纯化得黄色固体。

黄色固体(55mg，45％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.18(brs,1h),8.84(s,1h),8.45(s,1h),6.68(s,1h),4.05(t,j＝4.5hz,4h),3.86(s,3h),3.84–3.78(m,4h),3.62(s,2h),3.25(s,4h),2.78(s,3h),2.59(s,4h),2.50(s,3h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ153.87,153.54,152.67,151.39,150.80,138.69(q,j＝32.9hz,cf3c),127.50,126.60,122.72(q,j＝275.83hz,cf3),119.55,111.79,109.21(q,j＝5.2hz,cf3cch),104.69,66.70,54.19,52.72,52.18,45.89,45.84,34.22,9.40。

参照化合物p-9的甲烷磺酸盐的制备方法。以化合物p-17(200mg，0.3mmol)为原料，得黄色化合物p-17甲烷磺酸盐(190mg，81％)。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.91(s,1h),9.83(brs,1h),8.79(s,1h),8.31(s,1h),7.23(s,1h),4.46(s,2h),4.01(t,j＝4.8hz,4h),3.82–3.68(m,7h),3.62–3.41(m,4h),3.28–3.04(m,4h),3.00(s,3h),2.50(s,3h),2.38(s,3h).¹³cnmr(126mhz,dmso-d6)δ154.58,154.11,153.99,152.04,151.38,136.87(q,j＝31.6hz,cf3c),129.53,125.47,123.08(q,j＝274.9hz,cf3),112.40,112.00,108.63(q,j＝6.9hz,cf3cch),107.63,66.41,52.76,51.36,50.31,46.02,42.98,40.23,35.54,9.69。

黄色固体(55mg，74％)。¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.69(s,1h),8.96(s,1h),8.51(s,1h),7.41(t,j＝7.2hz,2h),7.36–7.19(m,3h),6.67(s,1h),4.13–

3.91(m,4h),3.79(s,4h),3.61(s,2h),3.25(s,4h),2.78(s,3h),2.58(s,4h),2.41(s,3h)。

化合物p-19的合成

10ml微波反应管中，加入化合物p-17(122mg，0.2mmol)，无水氯化钙(10mg，mmol)，甲胺醇溶液(2ml)，微波100℃反应30分钟，浓缩，薄层层析(二氯甲烷/甲醇：20/1)纯化得白色固体(30mg，33％)。

¹hnmr(400mhz,cdcl3)。δ9.37(s,1h),9.06(brs,1h),8.74(s,1h),7.28(s,1h),6.68(s,1h),4.05(t,j＝4.6hz,4h),3.84(t,j＝4.9hz,4h),3.61(s,2h),3.25(brs,4h),3.01(d,j＝4.6hz,3h),2.78(s,3h),2.59(brs,4h),2.50(s,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ156.42,153.99(q,j＝13.5hz),151.34,149.71,138.66,138.39,127.59,124.36,122.56(q,j＝274.93hz),119.56,111.84,109.33(q,j＝5.4hz),104.70,66.78,54.26,52.23,45.95,45.90,34.27,26.54,9.45。

化合物p-20的合成

往化合物p-18(75mg，0.1mmol)的dmf(3ml)溶液中，加入环丙胺(1ml),升温至60℃反应。反应完毕，加水(30ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml)萃取两次，合并有机层，饱和食盐水(100ml)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，薄层层析(二氯甲烷/甲醇：40/1)得黄色化合物(26mg，40％)。

¹hnmr(400mhz,cdcl3)。δ9.47(brs,1h),9.09(brs,1h),8.73(s,1h),7.40(s,1h),6.67(s,1h),4.05(t,j＝4.7hz,4h),3.84(t,j＝4.8hz,4h),3.61(s,2h),3.25(t,j＝4.7hz,4h),2.78(brs,4h),2.59(s,4h),2.49(s,3h),0.95–0.78(m,2h),0.71–0.61(m,2h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ156.70,153.93,153.85,151.32,149.81,138.53(q,j＝33.2hz),127.59,124.65,122.57(q,j＝274.7hz),119.57,111.83,109.48(q,j＝6.6hz),104.69,66.77,54.26,52.23,45.95,45.90,34.27,22.58,9.45,6.80。

化合物p-(21-24)的合成

往化合物p-9(1equiv.)和1，8-二氮环[5.4.0]十一-7-烯(dbu，6equiv)的二氯甲烷溶液中加入对应的异氰酸酯(6equiv)，室温下反应。反应完毕，加水稀释，二氯甲烷萃取一次，饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(二氯甲烷/甲醇：50/1)纯化得黄色固体。

以化合物p-9(160mg，0.3mmol)为起始原料，得黄色固体(54mg，29％)。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ9.62(s,1h),8.71(s,1h),8.08(s,1h),7.45(d,j＝5.7hz,1h),6.92(s,1h),3.96(t,j＝4.8hz,4h),3.73(t,j＝4.8hz,4h),3.56(s,2h),3.18(t,j＝6.8hz,2h),3.08(s,4h),2.85(s,3h),2.48(s,4h),2.42(s,3h),1.09(t,j＝7.1hz,3h).¹³cnmr(126mhz,dmso-d6)δ154.81,154.58,153.78,151.31,150.88,136.71(q,j＝31.8hz),127.20,124.08,123.23(q,j＝274.81hz),120.27,111.34,108.29(q,j＝6.2hz),106.21,66.46,53.80,52.14,45.94,34.44,34.06,15.69,9.67。

参照化合物p-9的甲烷磺酸盐的制备方法。以化合物p-21(75mg，0.31mmol)为原料，得黄色化合物p-21甲烷磺酸盐(70mg，81％)。

¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ9.80(brs,1h),9.65(s,1h),8.72(s,1h),8.11(s,1h),7.44(brs,1h),7.20(s,1h),4.45(s,2h),4.13(s,2h),4.01(t,j＝4.9hz,4h),3.75(s,6h),3.49(s,2h),3.27–3.03(m,7h),3.00(s,3h),2.37(s,3h),1.09(t,j＝7.0hz,3h).¹³cnmr(126mhz,dmso-d6)δ155.00,154.56,153.98,152.13,150.91,136.74(q,j＝31.4hz),129.46,123.69,123.29(q,j＝274.3hz),112.39,111.93,108.36(q,j＝6.4hz),107.53,66.41,51.36,40.24,50.30,46.00,42.99,35.51,34.45,15.68,9.69。

以化合物p-9(160mg，0.3mmol)为起始原料，得黄色固体(128mg，67％)。¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.45(s,1h),8.93(brs,1h),8.74(s,1h),7.30(s,1h),6.67(s,1h),4.10-4.16(m,1h),4.05(t,j＝4.4hz,4h),3.84(t,j＝4.3hz,4h),3.61(s,2h),3.25(t,j＝4.5hz,4h),2.78(s,3h),2.59(t,j＝4.7hz,4h),2.50(s,3h),1.30(d,j＝6.4hz,6h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ155.16,154.33,153.93,151.41,149.67,138.39(q,j＝32.9hz),127.55,124.19,122.61(q,j＝274.4hz),119.53,111.83,109.53(q,j＝5.6hz),104.66,66.78,54.26,52.23,45.95,45.91,42.21,34.25,23.08,9.45。

以化合物p-9(110mg，0.2mmol)为起始原料，得黄色固体(40mg，29％)。¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ11.45(s,1h),9.44(s,1h),8.85(s,1h),7.60(dd,j＝8.9,4.7hz,2h),7.35(s,1h),7.07(t,j＝8.2hz,2h),6.69(s,1h),4.07(brs,4h),3.86(t,j＝5.1hz,4h),3.63(s,2h),3.26(s,4h),2.79(s,3h),2.60(s,4h),2.52(s,3h).¹³cnmr(126mhz,cdcl3)δ159.29(d,j＝242.9hz),153.74(d,j＝54.9hz),153.50,151.09,149.67,138.93(q,j＝32.9hz),133.94(q,j＝2.9hz),127.67,125.13,122.05(q,j＝7.8hz),119.69,115.66(q,j＝22.6hz),111.82,109.78,104.83,66.78,54.27,52.25,45.96,45.91,34.28,9.47。

以化合物p-9(110mg，0.2mmol)为起始原料，得黄色固体(46mg，31％)。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ10.04(s,1h),9.92(s,1h),8.82(s,1h),8.22(s,1h),7.91(d,j＝8.7hz,,2h),7.65(d,j＝8.8hz,,2h),6.94(s,1h),4.27(q,j＝6.9hz,2h),3.97(t,j＝4.9hz,4h),3.82–3.66(m,4h),3.57(s,2h),3.08(s,4h),2.85(s,3h),2.48-2.43(m,7h),1.30(t,j＝7.0hz,3h).¹³cnmr(126mhz,dmso-d6)δ165.79,153.90,153.79,152.07,151.17,143.65,136.95(q,j＝32.2hz),130.89,127.27,125.30,123.23(q,j＝274.93hz),124.16,120.35,118.45,111.35,108.74,106.31,66.47,60.89,53.80,52.14,45.94,34.07,14.71,9.68。

化合物p-28的合成

步骤1：将p-28-1(437.0mg,1.0mmol,其制备方法参见cn201210177980.3)溶于二氯甲烷:水(10:1,20ml)的混合液中，随后加入三氟甲基亚磺酸钠(936.0mg,6mmol),将上述体系冷却到0℃并缓慢滴加70％过氧叔丁醇水溶液(1.4ml,10.0mmol)，滴加完毕，继续搅拌30min；随后加入二甲基亚砜(4.0ml)并升温到40℃反应过夜，lc-ms检测分析反应结束。加入二氯甲烷和水搅拌，静止，分液的有机相，干燥，浓缩得到粗品。用石油醚：乙酸乙酯(10:1～4:1)过柱得到p-28-2(300mg)。lc-ms:506.2(m+1)。

步骤2：将p-28-2(300mg,0.6mmol)和三氯氧磷(1.85g,11.9mmol)加入到甲苯(20ml)中，随后加入n,n-二甲基苯胺(215.6mg,18.0mmol)于回流状态下反应过夜。tcl分析反应完全，将反应体系浓缩，随后加入乙酸乙酯和冰水进行搅拌，分液得到乙酸乙酯相，对乙酸乙酯相进行干燥，浓缩得到氯代物粗品。将氯代物粗品溶于无水四氢呋喃(10ml)中，0℃下加入吗啉(155.0mg,1.8mmol)于室温下搅拌直到原料反应完全，浓缩得粗品直接下一步反应。

步骤3：将步骤2所得粗品加入甲醇(20ml)溶解，随后加入水(1ml)和氢氧化钠(237.6mg)与回流下反应直到原料完全消失，浓缩，加入水，调ph到5-6析出固体，干燥，直接下一步。lc-ms:477.2(m+h)⁺。

步骤4：将步骤3的粗品、hbtu(455.0mg,1.2mmol)、三乙胺(121mg,1,2mmol)和2-(4-哌啶基)-2-丙醇(aa9`,93.2mg,0.65mmol)加入dmf(10ml)中于室温下反应过夜，lc-ms分析反应结束。将反应体系倒入到冰水中用乙酸乙酯萃取，有机相干燥，浓缩，过柱(dcm:meoh＝100:1～40:1)得到浅色固体p-28-5(140mg)。

¹hnmr(300mhz,cd3od)δ8.48(s,1h),7.79(d,1h),7.65(d,1h),7.34～7.42(brs,2h),6.81(s,1h),6.70(s,1h),5.26(s,1h),4.76(d,1h),4.02(s,4h),3.80(s,4h),1.82～1.95(m,2h),1.47～1.69(m,2h),1.24(s,6h).lc-ms:602.3(m+1)。

步骤5：n2保护下将p-28-5(100mg,0.17mmol)溶于无水四氢呋喃(10ml)中冷却到-20℃,随后缓慢滴加bh3/thf(1n,1.7ml,1.7mmol)，滴加完毕，将反应体系升温到60℃反应1h，随后将反应体系冷却到-20℃缓慢滴加浓盐酸(0.8ml),滴加完毕，随后升温到60℃反应，lc-ms检测中间体全部转化为目标化合物。冷却，加入乙酸乙酯和水进行分液的水。水相用氢氧化钠调ph到10左右，用dcm进行萃取，干燥浓缩，快速过柱(dcm:meoh＝100:1～40:1)得到p-28(20mg)。

¹hnmr(300mhz,cd3od)δ:8.36(s,1h),7.09(s,1h),6.84(s,1h),5.42(s,1h),4.05(t,4h),3.99(s,2h),3.77(t,4h),3.50(brs,1h),2.39(t,2h),1.80(t,2h),1.36～1.52(m,4h),1.08(s,6h),lc-ms:588.2(m+1)。

活性测试实验

初筛浓度设定：待测化合物用dmso(二甲基亚砜)溶解至100μm或10μm作为储存液，各取2μl加入48μl1倍反应缓冲液(1×reactionbuffer)中，得到1μm或100nm含4％dmso的化合物溶液，混匀后用4％dmso在1倍反应缓冲液中(in1×reactionbuffer)稀释得到100nm或20nm化合物溶液。每个稀释溶液各取5μl加入384孔板中，这样在最后的20μl激酶反应体系中化合物的终浓度就分别是1μm和100nm或者100nm和20nm并含有1％dmso。

ic50测定浓度设定：针对不同酶，起始浓度选择10μm和100μm。用dmso溶解至1mm或10mm作为工作液，各取1μl加入24μl1倍激酶缓冲液a(1×kinasebuffera)中，得到40μm或400μm含4％dmso的化合物溶液，依次4倍倍比梯度稀释，10个稀释浓度，每个稀释溶液各取2.5μl加入384孔板中，这样在最后的10μl激酶反应体系中化合物的终浓度就依次是10μm，2.5μm，0.625μm并含有1％dmso。

实验步骤：室温下，pi3k激酶反应30分钟后终止，向各孔加入检测液，充分混合，室温孵育2小时，多功能酶标仪(2104multilabelreader(cat:2104-0010,perkinelmer))检测，记录测试结果。

实验结果:

计算各孔的激发光比值(emissionratio)

emissionratio(er)＝665nmemissionsignal/620nmemissionsignal

100％抑制对照的平均emissionratio记为：er100％

0％抑制对照的平均emissionratio记为：er0％

计算抑制率

抑制率用以下公式计算：

抑制率＝(ersample-er0％)/(er100％-er0％)×100％

如表1和表2所示，表中化合物均显示出了对pi3k激酶较好的抑制作用，尤其是化合物p-5/6/7显示出了对pi3kδ选择性的抑制作用。

表1部分化合物在指定浓度下对pi3k激酶各个亚型的抑制作用

表2部分化合物对pi3k激酶各个亚型的抑制作用

从表中可以看出，化合物p-5，p-6，p-7等对pi3kδ有很好的选择性。gdc0941为阳性化合物,化学名称为2-(1h-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺酰基)-1-哌嗪基]甲基]-4-(4-吗啉基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(4-[2-(1h-indazol-4-yl)-6-[(4-methylsulfonylpiperazin-1-yl)methyl]thieno[3,2-d]pyrimidin-4-yl]morpholine)。

初步药代动力学测试实验

1.取健康sd大鼠14只，雄性，体重200-220g，随机分成4组，每组3-4只,分别灌胃(10mg/kg)和静脉注射(5mg/kg)给予被试化合物p-17和化合物cyh33(与化合物p-17相比，缺失一个7-位甲基)，具体安排见下表3：

试验前禁食12h，自由饮水。给药后2h统一进食。

2.采血时间点及样品处理

灌胃给药：给药后0.25h，0.5h，1.0h，2.0h，3.0h，4.0h，6.0h，8.0h和24h。

静脉给药：给药后5min，0.25h，0.5h，1.0h，2.0h，4.0h，6.0h，8.0h和24h。

在以上设定时间点经大鼠眼球后静脉丛取静脉血0.3ml，置肝素化试管中，11000rpm离心5min，分离血浆，于-20℃冰箱中冷冻。

3.样品测试和数据分析

采用lc/ms/ms法测定大鼠血浆中化合物的浓度。

采用phoenix1.3软件(美国pharsight公司)的非房室模型计算给药后的药代动力学参数。

(id为动物编号，tmax为达峰时间，cmax为血药峰浓度，auc为药时曲线下面积，mrt为平均驻留时间，t1/2，cl为药物清除率，vss为稳态分布容积，f为绝对生物利用度)

从上表中可以看出，p-17尽管和cyh33相差一个甲基，其稳态分布容积vss、平均驻留时间mrt、半衰期t1/2、绝对生物利用度f都有所改善，尤其是绝对生物利用度有大幅度提高(测试化合物为cyh33和p17的单甲磺酸盐，化合物结构如下)。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。