本发明属于药物化学技术领域，涉及含有黄嘌呤结构化合物的设计、合成的技术领域，并将其应用于以组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(以下称lsd1)的抗肿瘤药物的开发中。
背景技术：
lsd1作为一种高度保守的fad依赖性氨基氧化酶，具有广泛的生物学功能，如参与p53的去甲基化，作为dna的甲基化转移酶及作为e2f的转录因子等，参与多种疾病的发生发展，在维持正常的生理机能方面亦发挥着重要作用。lsd1在多种肿瘤(如前列腺癌，乳腺癌和胃癌等)中高表达，通过小分子化合物或rna干扰技术抑制lsd1活性或降低lsd1的表达可有效地抑制肿瘤细胞的增殖，侵袭与转移，证实其是可用于肿瘤治疗的表观遗传调控蛋白。
目前已有多个lsd1抑制剂(如ory-1001，gsk2879552等)进入临床实验，用于小细胞肺癌和白血病的治疗。处于临床研究阶段的lsd1抑制剂均为苯环丙胺类不可逆抑制剂，虽然已有一些具有高活性高选择性的可逆lsd1抑制剂报道，但均尚未进入临床研发阶段，设计可用于肿瘤治疗的新型非共价结合lsd1抑制剂仍然是一个比较有挑战性的工作，具有较高的实际应用价值。
黄嘌呤(xanthine)是一种广泛分布于人体及其他生物体器官及体液内的一种嘌呤碱，常用作温和的兴奋剂和支气管扩张剂。对其进行结构修饰，研究其lsd1抑制活性目前未见相关文献报道。
技术实现要素：
本发明目的之一在于提供一种具有黄嘌呤结构的新型lsd1抑制剂及其制备方法；其次在于提供其在以lsd1为作用靶点的抗肿瘤药开发中的应用。
为实现本发明的目的，本发明所述及的黄嘌呤结构lsd1抑制剂的结构通式为：
其中r1选自：
其中r2选自：甲基或如下取代基：
其中r3选自：
优选以下化合物：
通式i化合物的合成制备方法包括以下步骤：
(1)i-d的制备方法：
有机溶剂中，碱性条件下，在化合物i-a中逐滴加入液溴，反应完全后抽滤，干燥后即得到i-b，i-b在过量的丙胺条件下发生胺的取代反应得到i-c，i-c与乙基原磺酸钾发生成环的反应，反应完全后，冷却调节ph后固体析出，抽滤、干燥后即得到i-d。
本合成使用的碱为以下中一种：碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、三乙胺、二异丙基乙胺、氢氧化钠、氢氧化钾，所使用的有机溶剂为以下中的一种：二氯甲烷、四氢呋喃、n,n-二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、乙醇、乙醚。
(2)i-(1～20)的制备方法：
有机溶剂中，i-d在碱性条件下与相应的卤代烃发生亲核取代反应，反应完全后经萃取、水洗、干燥，过层析柱即得到i-(1～20)。
本反应过层析柱使用石油醚和乙酸乙酯的洗脱体系，所述的碱可以为碳酸钠、碳酸钾、三乙胺、二异丙基乙胺，所述有机溶剂可以为乙醇、乙腈、丙酮、n,n-二甲基甲酰胺,反应优选温度为50～80℃。
通式ii化合物的合成制备方法包括以下步骤：
(1)ii-d的制备方法
有机溶剂中，boc-哌嗪在碱性条件下，以4-二甲氨基吡啶为催化剂，与氯乙酰氯发生取代反应，反应完全后，经洗涤、干燥后得到ii-b；碱性条件下，可可碱与ii-b发生取代反应，反应完全后萃取、洗涤、干燥，过层析柱后得到化合物ii-c，ii-c在过量的三氟乙酸中发生水解反应,反应完成后于真空泵下蒸干，加入乙醚，搅拌过夜，后抽滤、干燥后产物呈白色粉末状，即得到ii-d的盐。所述中使用的碱可以为三乙胺、碳酸钾、氢化钠、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾，所使用的有机溶剂可以为甲醇、乙醇、二氯甲烷、n,n-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、甲苯。
(2)ii-(1～9)的制备方法
有机溶剂中，ii-d和对应的卤代烃在碱性条件下发生取代反应，反应完成后蒸干，加入有机溶剂，水洗，饱和食盐水洗涤，加入无水硫酸镁蒸干后过层析柱即得到ii-(1-9)。本反应所述的碱可以为碳酸钾、碳酸钠、三乙胺，有机溶剂为乙腈、乙醇、丙酮、n,n-二甲基甲酰胺，过柱使用的洗脱剂可以为二氯甲烷与甲醇、石油醚与乙酸乙酯。
(3)ii-(10～17)的制备方法
有机溶剂中，碱性条件下，ii-d和对应的酰氯于冰浴条件下进行反应，待酰氯滴加完成后转至室温，反应完全后，加入有机溶剂，水洗后，饱和食盐水洗涤，加入无水硫酸镁蒸干后过层析柱即得到ii-(10～17)。本反应所述碱可以为三乙胺、二异丙基乙胺、碳酸钾，有机溶剂可以为二氯甲烷、氯仿、n,n-二甲基甲酰胺，过柱所使用的展开剂可以二氯甲烷与甲醇、石油醚与乙酸乙酯。
通式iii化合物的合成制备包括以下步骤：
(1)iii-b的制备方法
有机溶剂中，在碱性条件下，可可碱与溴乙酰叔丁酯发生取代，反应完全后冷却至室温，加入有机溶剂，洗涤，干燥，过层析柱(二氯甲烷与甲醇为洗脱剂),即得到白色固体iii-b，iii-b在过量的三氟乙酸环境下,发生水解反应得到iii-c。
本合成中所述的碱可以为碳酸钠、碳酸钾、氢化钠、三乙胺，有机溶剂为二氯甲烷、n,n-二甲基甲酰胺、乙腈。
(2)ii-(18～19)和iii-(1～8)的制备方法
有机溶剂中，冰浴中，iii-c在碱性下与缩合剂作用后，加入对应的胺，转为室温条件下反应，反应完全后，加入有机溶剂，水洗，饱和食盐水洗涤，加入无水硫酸镁后，蒸干后过层析柱即得到ii-(18～19)和iii-(1～8)。
本反应碱可以为碳酸钾、三乙胺、二异丙基乙胺，有机溶剂为二氯甲烷、n,n-二甲基甲酰胺，使用的洗脱剂为二氯甲烷与甲醇体系。
本发明所述的含黄嘌呤结构的衍生物可以作为制备基于靶向lsdl抗肿瘤先导化合物。
本发明优点在于：通过lsd1酶活性检测，发现该系列黄嘌呤类化合物对lsd1酶具有较好抑制作用，可作为先导化合物，为进一步设计新型lsd抑制剂打好基础。合成方法简单可行，具有较高的收率，达50％以上。
具体实施方式
为了更好的说明本发明，特举实施例如下：
实施例1
化合物i-b的制备
冰浴条件下，于反应瓶中称取i-a(10g,70.86mmol)，加入100ml的甲醇溶剂，碳酸氢钠(7.14g,85.03mmol)，而后逐滴加入液溴(13.59g,85.03mmol)，滴加完成后转至室温下搅拌，待反应完全，将所得反应物抽滤，分别使用适量水与甲醇进行洗涤，烘干箱干燥，得到白色固体，产率83.12％，不经进一步纯化即可下一步使用。mp:157-159℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.90(s,1h),7.03(s,2h),3.28(s,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ158.30,152.88,149.92,70.52,29.95.13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ158.30,152.88,149.92,70.52,29.95.。
化合物i-c的制备
将上步所得到i-b(5g，22.72mmol)加入反应瓶中，量取30ml的丙胺加入反应瓶中，反应于55℃条件下进行回流，过夜搅拌，反应完全后冷却至室温，加入10ml的二氯甲烷出现固体析出，抽滤，加入5ml二氯甲烷和10ml乙醚洗涤，烘干箱干燥后即得到i-c，固体呈淡黄色2.1g，产率46.7％。mp:139-140℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.14(s,1h),6.34(s,1h),3.21(s,2h),2.58(s,1h),1.43(q,j＝7.3hz,1h),0.87(s,1h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ160.87,152.68,149.89,97.44,55.99,50.22,28.98,22.85,18.49,11.69.。
化合物i-d的制备
反应瓶中称取i-c(3g,15.13mmol)，加入50ml的n,n-二甲基甲酰胺和乙基原磺酸钾(9g,56.15mmol)，反应于120℃条件下进行，反应8h后冷却至室温，加入50ml的冰水，调节ph之3～5后固体析出，抽滤、分别使用10ml水和10ml乙醚洗涤、烘干箱干燥后即得到i-d，产物呈黄色，产率43.15％。
mp:>300℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.58(s,1h),11.29(s,1h),4.14(dd,j＝8.2,6.3hz,2h),3.30(s,4h),1.71(d,j＝7.3hz,1h),0.86(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso)δ163.30,152.27,149.61,140.45,103.76,45.80,29.89,21.48,10.65.。
实施例2r1＝propargyl，化合物i-1的合成
如式所示，其合成过程为：反应瓶中加入溶剂乙腈5ml，称取化合物i-d
(200mg，0.83mmol)，碳酸钾(172.55mg，1.25mmol)，取溴丙炔(128.72mg，1.08mmol)滴加入反应体系，反应温度为80℃下回流8h，反应完全后加入乙酸乙酯进行萃取，水洗2次，饱和食盐水洗1次，加入无水硫酸镁除水后，真空泵蒸干过层析柱(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)，产品呈现白色固体，产率67.34％。mp:184-185.9℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.14(s,1h),4.15(t,j＝7.0hz,2h),4.10(d,j＝2.5hz,2h),3.35(s,3h),3.27(d,j＝2.4hz,1h),1.75(d,j＝7.3hz,1h),0.84(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ153.82,150.59,149.62,147.43,108.21,79.38,74.68,46.99,28.49,23.13,21.28,10.53.。
实施例3r1＝o-bromobenzyl，化合物i-2的合成
如式所示，i-2的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:166.4-167.1℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.11(s,1h),7.46(dd,j＝8.3,5.3hz,2h),7.14(t,j＝8.7hz,2h),4.50(s,2h),4.02(s,2h),3.40(s,3h),1.63(d,j＝7.2hz,1h),0.75(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.66,160.24,153.72,150.60,149.58,148.67,133.51,133.48,131.08,130.99,115.29,115.08,107.95,46.72,35.55,28.46,22.86,10.41.。
实施例4r1＝p-isopropylidene，化合物i-3的合成
如式所示，i-3的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:153.8-154.8℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.10(s,1h),7.45–6.85(m,4h),4.46(s,2h),4.00(t,j＝7.0hz,2h),3.39(s,3h),1.60(m,j＝7.3hz,2h),1.16(d,j＝6.9hz,6h),0.74(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ153.73,150.62,149.61,148.88,147.77,134.32,128.94,126.36,107.92,46.73,36.32,33.08,28.48,23.77,22.84,10.44.
实施例5r1＝allyl，化合物i-4的合成
如式所示，i-4的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:156.1-156.7℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.09(s,1h),5.96(m,j＝17.0,10.0,7.0hz,1h),5.49–4.95(m,2h),4.10(t,j＝7.0hz,2h),3.35(s,3h),1.73(h,j＝7.3hz,2h),0.83(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ153.72,150.61,149.63,148.77,133.10,118.83,107.92,46.79,35.00,28.41,22.96,10.52.。
实施例6r1＝p-trifluoromethylbenzyl，化合物i-5的合成
如式所示，i-5的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:152.2-153.3℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.11(s,1h),7.78–7.50(m,4h),4.59(s,2h),4.02(t,j＝7.0hz,2h),3.39(s,3h),1.60(m,j＝7.3hz,2h),0.72(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ153.73,150.60,149.57,148.31,142.48,129.82,125.27,125.23,108.08,46.76,35.59,28.47,22.84,10.37.13cnmr(101mhz,dmso-d6)δ153.71,150.58,149.52,148.33,138.80,131.21,130.69,130.48,129.99,129.41,108.07,46.78,34.85,28.43,22.85,10.41.。
实施例7r1＝3,4-dichlorobenzyl，化合物i-6的合成
如式所示，i-6的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:190.5-192.9℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.11(s,1h),7.73(d,j＝2.1hz,1h),7.57(d,j＝8.3hz,1h),7.41(dd,j＝8.3,2.1hz,1h),4.50(s,2h),4.03(t,j＝7.0hz,2h),3.39(s,3h),1.64(h,j＝7.1hz,2h),0.75(t,j＝7.4hz,3h).。
实施例8r1＝m-methoxybenzyl，化合物i-7的合成
如式所示，i-7的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:130.8-140.1℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.11(s,1h),7.46–6.59(m,4h),4.47(s,2h),4.02(t,j＝7.0hz,2h),3.71(s,3h),3.39(s,3h),1.63(m,j＝7.3hz,2h),0.75(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ159.18,153.73,150.61,149.59,148.81,138.58,129.53,121.15,114.47,113.12,107.95,54.97,46.74,36.41,28.46,22.87,10.45.。
实施例9r1＝p-fluorobenzyl，化合物i-8的合成
如式所示，i-8的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:172.8-174.7℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.11(s,1h),7.68–7.48(m,2h),7.43–7.18(m,2h),4.57(d,j＝2.5hz,2h),4.01(t,j＝7.0hz,2h),3.40(d,j＝2.4hz,3h),1.61(hept,j＝6.4,4.7hz,2h),0.72(td,j＝7.3,2.3hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ153.75,150.60,149.58,148.09,136.07,132.75,131.52,129.84,127.89,123.96,108.08,46.79,37.35,28.51,22.88,10.40.。
实施例10r1＝2-pyridylmethyl，化合物i-9的合成
如式所示，i-9的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈棕色固体。mp:197.6-198.5℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.10(s,1h),8.64–7.02(m,4h),4.61(s,2h),4.05(t,j＝7.0hz,2h),3.37(s,3h),1.66(m,j＝7.2hz,2h),0.77(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ156.17,153.74,150.61,149.59,149.23,148.85,136.83,123.24,122.59,107.98,46.77,38.51,28.47,22.88,10.45.。
实施例11r1＝p-chlorobenzyl，化合物i-10的合成
如式所示，i-10的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:204.9-206.4℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.11(s,1h),7.61–7.10(m,4h),4.49(s,2h),4.01(t,j＝7.0hz,2h),3.39(s,3h),1.62(h,j＝7.3hz,2h),0.74(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ153.72,150.61,149.58,148.55,136.47,132.07,130.88,128.36,108.00,46.74,35.52,28.48,22.86,10.42.。
实施例12r1＝benzyl，化合物i-11的合成
如式所示，i-11的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:172.9-174.7℃.1hnmr(400mhz,cdcl3--d6)δ8.38(s,1h),8.25–8.07(m,2h),7.69–7.45(m,2h),4.56(s,2h),4.11(t,j＝7.2hz,2h),3.54(s,3h),1.77(m,j＝7.4hz,2h),0.89(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3--d6)δ153.39,150.76,150.41,149.34,147.50,144.42,129.90,123.88,108.80,77.34,47.71,35.99,29.04,23.52,10.80.。
实施例13r1＝n-(4-nitro-2-chloroaniline)-2-oxoethyl，化合物i-12的合成
如式所示，i-12的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:208.5-211.3℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.13(s,1h),10.21(s,1h),8.37(d,j＝2.0hz,1h),8.22(d,j＝2.3hz,2h),4.40(s,2h),4.14(t,j＝7.0hz,2h),3.29(s,3h),1.76(m,j＝7.2hz,2h),0.85(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ206.72,167.07,153.75,150.57,149.53,148.55,143.37,140.71,124.91,124.29,123.50,123.16,108.12,46.99,29.78,28.39,22.93,10.48.。
实施例14r1＝n-(4-methylaniline)-2-oxoethyl，化合物i-13的合成
如式所示，i-13的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:193.3-195.8℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.11(s,1h),10.26(s,1h),7.44(d,j＝8.1hz,2h),7.11(d,j＝8.1hz,2h),4.21(s,2h),4.14(t,j＝7.0hz,2h),3.30(s,3h),2.25(s,3h),1.75(m,j＝7.2hz,2h),0.85(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ165.15,153.75,150.59,149.55,148.92,136.20,132.49,129.13,119.15,108.00,37.24,30.64,28.41,22.94,20.39,10.57.。
实施例15r1＝n-(4-methylaniline)-2-oxoethyl，化合物i-13的合成
如式所示，i-13的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:158.9-159.9℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.12(s,1h),7.31(d,j＝7.4hz,1h),7.24–7.14(m,2h),4.50(s,2h),4.00(t,j＝7.0hz,2h),3.57(s,0h),3.40(s,3h),2.39(s,3h),1.61(d,j＝7.2hz,2h),0.74(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ153.74,150.62,149.59,148.63,136.58,134.40,130.29,129.91,127.89,125.98,107.91,46.75,34.97,28.48,22.89,18.70,10.42.。
实施例16r1＝m-fluorobenzyl，化合物i-15的合成
如式所示，i-15的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:145.1-147.1℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.12(s,1h),7.45–7.32(m,1h),7.26(t,j＝9.1hz,2h),7.10(m,j＝8.7,2.6hz,1h),4.51(s,2h),4.02(t,j＝7.0hz,2h),3.38(s,3h),1.63(m,j＝7.3hz,2h),0.74(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ163.11,160.69,153.73,150.60,149.57,148.53,140.20,140.12,130.38,130.30,125.13,125.10,115.86,115.64,114.39,114.18,108.03,46.76,35.70,28.44,22.86,10.41.。
实施例17r1＝isopropyl，化合物i-16的合成
如式所示，i-16的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:162.7-163.9℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.11(s,1h),4.11(t,j＝7.0hz,2h),3.89(m,j＝6.7hz,1h),1.72(m,j＝7.3hz,2h),1.39(d,j＝6.8hz,6h),0.82(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ153.79,150.63,149.78,148.71,107.67,46.75,28.43,23.10,23.02,10.51.。
实施例18r1＝p-tert-butylbenzyl，化合物i-17的合成
如式所示，i-17的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:196.8-197.3℃.1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ8.97(s,1h),7.34–7.15(m,4h),4.39(s,j＝3.7hz,2h),4.02(t,j＝7.3hz,2h),3.50(s,j＝3.8hz,3h),1.70–1.62(m,2h),1.31–1.21(s,9h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ153.73,151.13,150.97,150.64,150.49,133.38,128.68,125.65,108.52,47.56,37.16,34.57,31.28,29.69,29.03,23.46,10.77.。
实施例19r1＝m-methylbenzyl，化合物i-18的合成
如式所示，i-18的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:136.0-138.1℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.12(s,1h),7.55–6.43(m,4h),4.46(s,2h),4.01(t,j＝7.0hz,2h),3.39(s,3h),2.27(s,3h),1.63(d,j＝7.2hz,2h),0.76(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ153.73,150.61,149.59,148.87,137.57,136.80,129.64,128.34,128.12,126.05,107.92,46.72,36.46,28.45,22.87,20.84,10.45.。
实施例20r1＝o-nitrobenzyl，化合物i-19的合成
如式所示，i-19的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈黄色固体。mp:200.4-201.3℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.12(s,1h),8.13–7.98(m,1h),7.82–7.66(m,2h),7.56(s,1h),4.80(s,2h),3.99(t,j＝7.0hz,2h),3.38(s,3h),1.59(m,j＝7.2hz,2h),0.70(t,j＝7.4hz,,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ153.71,150.58,149.52,148.16,148.01,133.85,132.73,132.61,129.22,124.91,108.16,46.76,33.51,28.44,22.84,10.34.。
实施例21r1＝p-nitrobenzyl，化合物i-20的合成
如式所示，i-20的合成过程与实施例2的合成采取同样的合成方法，产品呈黄色固体。mp:211.4-212.3℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.13(s,1h),8.21–8.14(m,2h),7.75–7.65(m,2h),4.63(s,2h),4.02(t,j＝7.0hz,2h),3.39(s,3h),1.63(q,j＝7.2hz,2h),0.74(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ153.71,150.58,149.55,148.15,146.67,145.67,130.32,123.46,108.12,46.7g9,35.30,28.48,22.86,10.40.。
实施例22
化合物ii-b的制备
于反应瓶中称取boc-哌嗪(5g，26.84mmol)，加入50ml二氯甲烷做为反应溶剂，三乙胺(5.43g，63.69mmol)，并加入4-二甲氨基吡啶(328mg，2.68mmol)，反应于冰浴条件下逐滴加入氯乙酰氯(4.55g，40.27mmol)，待氯乙酰氯滴加完成后转为室温，搅拌2h后停止反应，加入100ml二氯甲烷，水洗2遍，饱和食盐水洗涤1遍，加入无水硫酸镁干燥，真空泵蒸干后，过柱(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)即得到ii-b，呈淡黄色，产率67％。1hnmr(400mhz,cdcl-d6)δ4.25–3.94(s,2h),3.77–3.13(m,8h),1.48(s,9h).。
化合物ii-c的制备
反应瓶中加入可可碱(3g，16.65mmol)，加入溶剂dmf50ml，搅拌均匀后，分批加入质量百分含量60％含量的氢化钠(1g，24.98mmol)，于80℃下搅拌半小时，后将ii-b(5.69g，21.65mmol)溶于5mldmf中加入至反应体系，反应加热搅拌12h，反应完全后加入30ml水于真空泵下蒸去dmf，加入100ml二氯甲烷，使用水、饱和食盐水洗涤，蒸干后过层析柱(二氯甲烷：甲醇＝20:1),即得到白色固体ii-c，产率56％。mp:265.7-266.6℃.1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.54(s,1h),4.85(s,2h),3.97(s,3h),3.65–3.51(m,9h),3.45(t,j＝5.2hz,2h),1.48(s,9h).13cnmr(101mhz,cdcl3-d6)δ165.34,154.93,154.46,151.43,149.20,141.71,107.51,80.35,44.66,41.98,41.86,33.54,29.79,28.35.。
化合物ii-d的制备
将上步得到ii-c(3g，7.38mmol)溶解于二氯甲烷10ml中，冰浴条件下加入10ml的三氟乙酸,反应时间4h，反应完成后于真空泵下蒸干，加入20ml乙醚，搅拌过夜，后抽滤、干燥后产物呈白色粉末状，即得到ii-d的盐，产率为88％。mp:>300℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.09(s,2h),8.07(s,1h),4.78(s,2h),3.88(s,3h),3.86–3.75(m,6h),3.64(d,j＝5.5hz,4h),3.43(s,3h),3.16(d,j＝39.3hz,4h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ165.53,154.06,150.75,148.41,143.21,106.49,42.79,42.57,41.49,41.17,38.33,33.12,29.37.。
实施例23r2＝benzyl，化合物ii-1的合成
如式所示，ii-1的制备方法为：反应瓶中加入ii-d(150mg，0.49mmol)和碳酸钾(101.51mg，0.73mmol)，反应溶剂为乙腈5ml，搅拌均匀后加入苄溴(108.88mg，0.11mmol)，反应于80℃下回流5h，反应完成后，于真空泵下蒸干后加入50ml二氯甲烷，水洗两次、饱和食盐水洗涤一次，加入无水硫酸镁除水，蒸干后过层析柱(二氯甲烷：甲醇＝20:1)，即得到ii-1-9，产品呈白色，产率51.38％。mp:190.7～191.3℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.51(s,1h),7.33(d,j＝4.3hz,4h),4.83(s,2h),3.96(s,3h),3.64(t,j＝5.1hz,2h),3.57(d,j＝7.5hz,5h),3.54(s,2h),2.50(m,j＝27.8,5.1hz,4h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ164.90,155.03,151.50,149.22,141.57,137.60,129.09,128.33,127.28,107.59,62.84,52.79,52.58,44.79,42.26,41.88,33.54,29.79.。
实施例24r2＝isopropyl，化合物ii-2的合成
如式所示，ii-2的合成过程与实施例23的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:197.9～211.1℃。。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.52(s,1h),4.85(s,2h),3.96(s,3h),3.61(d,j＝23.5hz,7h),2.56(dt,j＝35.6,5.0hz,4h),1.05(d,j＝6.5hz,6h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ164.74,155.03,151.50,149.21,141.56,107.59,54.56,48.60,48.11,45.14,42.53,41.87,33.53,29.78,18.35.
实施例25r2＝cyclopropyl，化合物ii-3的合成方法
如式所示，ii-3的合成过程与实施例23的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:210.0～211.2℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.52(s,1h),4.85(s,2h),3.97(s,3h),3.64–3.49(m,7h),2.66(dt,j＝34.9,5.1hz,4h),1.66(t,j＝8.8,6.6,3.7hz,1h),0.46(t,j＝16.5,6.2,3.6hz,4h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ164.86,155.03,151.50,149.21,141.57,107.59,53.09,52.72,44.78,42.24,41.90,38.28,33.53,29.78,5.92.。
实施例26r2＝phenylpropyl，化合物ii-4的合成
如式所示，ii-4的合成过程与实施例23的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:154.8～155.0℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.28(t,j＝7.4hz,2h),7.24–7.13(m,3h),4.70(s,2h),3.87(s,3h),3.55(t,j＝4.9hz,2h),3.43(d,j＝4.7hz,2h),3.42(s,3h),2.60(t,j＝7.7hz,2h),2.41(t,j＝4.9hz,2h),2.31(d,j＝7.0hz,4h),1.76(q,j＝7.5hz,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ164.71,154.10,150.76,148.36,143.10,141.96,128.26,128.18,125.61,106.51,56.99,52.85,52.33,44.11,41.67,41.59,33.11,32.82,29.34,27.99.。
实施例27r2＝propyl，化合物ii-5的合成
如式所示，ii-5的合成过程与实施例23的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:235.2～236.6℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.53(s,1h),4.84(s,2h),3.96(s,3h),3.65(t,j＝5.1hz,2h),3.58(s,5h),2.49(m,j＝35.7,5.1hz,4h),2.42–2.31(m,2h),1.52(m,j＝7.5hz,2h),0.92(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ164.85,155.01,151.48,149.20,141.59,107.57,60.40,53.01,52.59,44.75,42.19,41.86,33.53,29.77,29.67,19.89,11.83.。
实施例28r2＝ethyl，化合物ii-6的合成
如式所示，ii-6的合成过程与实施例23的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:223.2～227.6℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.49(s,1h),4.77(s,2h),3.88(s,3h),3.58(t,j＝5.2hz,2h),3.52(d,j＝5.2hz,2h),3.50(s,3h),2.47(t,j＝5.0hz,2h),2.40(d,j＝7.4hz,2h),2.38(s,2h),1.03(t,j＝7.2hz,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ164.83,154.93,151.42,149.13,141.67,107.47,52.58,52.16,44.70,42.13,41.82,33.49,29.74,11.85.。
实施例29r2＝p-chlorobenzyl，化合物ii-7的合成
如式所示，ii-7的合成过程与实施例23的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:156.6～158.3℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.32–7.24(m,4h),4.83(s,2h),3.96(s,3h),3.64(t,j＝5.1hz,2h),3.58(s,3h),3.55(d,j＝5.3hz,2h),2.48(m,j＝28.4,4.9hz,4h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ164.95,155.02,151.49,149.23,144.80,141.58,133.04,130.32,128.51,107.59,62.02,52.74,52.53,44.75,42.21,41.86,33.55,29.80.。
实施例30r2＝propargyl，化合物ii-8的合成
如式所示，ii-8的合成过程与实施例23的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp152.7～153.2℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(s,1h),4.71(s,2h),3.87(s,3h),3.51(m,j＝50.4,5.0hz,4h),3.33(d,j＝10.3hz,4h),3.19(t,j＝2.4hz,1h),2.41(t,j＝5.0hz,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ164.76,154.10,150.76,148.37,143.11,106.51,78.91,75.98,51.23,50.72,45.91,43.87,41.68,41.34,33.12,29.34.。
实施例31r2＝n-morpholinopropyl，化合物ii-9的合成
如式所示，ii-9的合成过程与实施例23的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:275.7～276.3℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.04(s,1h),8.01(t,j＝5.6hz,1h),4.41(s,2h),3.87(s,3h),3.56(t,j＝4.6hz,4h),3.41(s,3h),3.07(m,j＝6.6hz,2h),2.39–2.21(m,6h),1.55(p,j＝7.0hz,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ166.64,154.17,150.82,148.40,142.99,106.62,66.15,55.65,53.26,42.81,36.91,33.11,29.35,25.93.。
实施例32r2＝n-morpholineformyl，化合物ii-10的合成
如式所示，其制备过程为：于反应瓶中加入ii-d(150mg，0.49mmol)及二氯甲烷5ml，搅拌均匀后加入三乙胺(74.33mg，0.734mmol)，并于冰浴条件下缓慢加入吗啉碳酰氯，加入完成后转至室温下搅拌两小时，反应完全后，加入50ml二氯甲烷，水洗两次后，饱和食盐水洗涤一次，加入无水硫酸镁蒸干后过层析柱(二氯甲烷：甲醇＝20:1)，即得到ii-10，得到白色固体，产率48.9％。mp:241.2～242.3℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.54(s,1h),4.86(s,2h),3.97(s,3h),3.74–3.59(m,8h),3.58(s,3h),3.49–3.22(m,8h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ165.43,163.47,154.94,151.44,149.23,141.70,107.53,66.56,47.21,46.90,46.13,44.54,41.90,41.84,33.55,29.80.。
实施例33r2＝p-nitrobenzoyl，化合物ii-11的合成
如式所示，ii-11的合成过程与实施例32的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:154.3～156.1℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.31(d,j＝8.2hz,2h),8.05(s,1h),7.74(d,j＝8.1hz,2h),4.75(d,j＝24.1hz,2h),3.88(s,3h),3.65(d,j＝39.0hz,4h),3.42(s,7h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ167.31,165.29,154.08,150.76,148.39,147.84,143.15,141.94,128.36,123.73,106.50,41.69,33.12,29.35.。
实施例34r2＝p-methylbenzenesulfonyl，化合物ii-12的合成
如式所示，ii-12的合成过程与实施例32的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:233.1～234.3℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.63(d,j＝7.7hz,2h),7.51(s,1h),7.36(d,j＝7.8hz,2h),4.77(s,2h),3.94(s,3h),3.68(d,j＝26.0hz,4h),3.55(s,3h),3.06(d,j＝34.2hz,4h),2.47(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ164.97,154.87,144.26,141.71,132.21,129.94,127.73,107.52,45.95,41.71,33.53,29.78,21.53.。
实施例35r2＝acryloyl，化合物ii-13的合成
如式所示，ii-13的合成过程与实施例32的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:189.7～190.3℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.54(s,1h),6.57(dd,j＝16.8,10.5hz,1h),6.34(dd,j＝16.8,1.8hz,1h),5.76(dd,j＝10.5,1.8hz,1h),4.87(s,2h),3.97(s,3h),3.85–3.61(m,8h),3.58(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ165.58,154.93,151.44,149.27,141.72,128.72,126.99,107.55,41.81,33.56,29.81.。
实施例36r2＝acetyl，化合物ii-14的合成
如式所示，ii-14的合成过程与实施例32的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:178.3～179.2℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.55(s,1h),4.86(s,2h),3.97(s,3h),3.78–3.60(m,6h),3.58(s,3h),3.57–3.46(m,2h),2.14(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ169.23,165.58,154.89,151.41,149.22,141.76,107.50,45.84,44.55,42.06,41.81,41.04,33.54,29.79,21.30.。
实施例37r2＝n,n-dimethylsulfonyl，化合物ii-16的合成
如式所示，ii-16的合成过程与实施例32的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:195.6～198.2℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.06(s,1h),4.74(s,2h),3.88(s,3h),3.65(t,j＝5.0hz,2h),3.51(d,j＝5.0hz,2h),3.19(dt,j＝39.3,4.9hz,4h),2.80(s,6h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ165.20,154.08,150.76,148.40,143.16,106.51,46.19,45.81,43.91,41.65,41.23,33.13,29.37.。
实施例38r2＝cinnamoyl，化合物ii-17的合成
如式所示，ii-17的合成过程与实施例32的合成采取同样的合成方法，产品呈黄色固体。mp:130.4～131.3℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(d,j＝3.8hz,1h),7.73(d,j＝6.4hz,2h),7.53(dd,j＝15.4,3.9hz,1h),7.42(m,j＝7.4,3.5hz,3h),7.29(d,j＝15.7hz,1h),4.77(s,2h),3.88(s,3h),3.86–3.40(m,11h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ165.27,164.63,154.10,150.77,148.39,143.12,141.75,135.04,129.54,128.69,128.00,118.04,106.52,54.86,41.73,33.11,29.35.。
实施例39
化合物iii-b的制备
将50mldmf加入反应瓶中，后加入可可碱(3g，16.65mmol)，搅拌均匀后，分批加入质量百分比60％含量的氢化钠(1g，24.98mmol)，待氢化钠加入完成后于80℃下加热搅拌半小时，后冷却至50℃左右，继而加入溶于5mldmf中的溴乙酰叔丁酯(6.5g，33.30mmol)至反应体系，反应加热搅拌12h，反应完全后加入30ml水于真空泵下蒸去dmf，冷却至室温，加入100ml二氯甲烷，使用水、饱和食盐水洗涤，蒸干后过层析柱(二氯甲烷：甲醇＝20:1),即得到白色固体iii-b，产物呈白色固体，产率65％。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.54(s,1h),4.66(s,2h),3.98(s,3h),3.58(s,3h),1.49(s,9h).。
化合物iii-c的制备
将上步得到iii-b(3g，10.19mmol)溶解于二氯甲烷15ml中，冰浴条件下加入15ml的三氟乙酸,反应时间4h，反应完成后于真空泵下蒸干，加入20ml乙醚，搅拌过夜，后抽滤、干燥后产物呈白色粉末状，即得到iii-c，产率为93％。mp:256.2～257.6℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.06(s,1h),4.51(s,2h),3.88(s,3h),3.43(s,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ169.49,153.87,150.66,148.46,143.30,106.43,41.67,33.16,29.39.。
实施例40r2＝methyl，化合物ii-18的合成
如式所示，其制备过程为：反应瓶中加入iii-c(200mg，0.84mmol)，溶剂为二氯甲烷5ml，搅拌均匀后加入n,n-二异丙基乙胺(162.78mg，1.26mmol)，于冰浴条件下加入缩合剂1-丙基环磷酸酐(47.3mg，1.09mmol)，搅拌15min后，加入甲基哌嗪(109.33mg，1.09mmol)，待加入完成后转为室温条件下反应，反应完全后，加入二氯甲烷，水洗两次后，饱和食盐水洗涤一次，加入无水硫酸镁后，蒸干后过层析柱(二氯甲烷：甲醇＝20:1)即得到)iii-12。mp:191.2～192.5℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.53(s,1h),4.85(s,2h),3.97(s,3h),3.66(t,j＝5.1hz,2h),3.60(d,j＝4.6hz,2h),3.58(s,3h),2.51(t,j＝5.1hz,2h),2.43(t,j＝5.2hz,2h),2.34(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ164.94,155.00,151.48,149.21,141.59,107.57,77.36,77.04,76.72,54.76,54.46,45.99,44.62,42.07,41.85,33.54,29.79,29.67.。
实施例41r2＝n-methylpiperazinylanilino，iii-1化合物的合成
如式所示，iii-1的合成过程与实施例40的合成采取同样的合成方法，产品呈黄色固体。mp:253.2～254.1℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.97(s,1h),8.06(s,1h),7.39(d,j＝8.6hz,2h),6.87(d,j＝8.6hz,2h),4.62(s,2h),3.89(s,3h),3.44(s,3h),3.06(t,j＝4.9hz,4h),2.44(t,j＝4.9hz,4h),2.21(s,3h).13cnmr(101mhz,dmso-d6)δ164.93,150.88,148.45,147.18,143.14,130.69,120.11,115.61,54.58,48.44,45.68,33.15,29.39.。
实施例42r3＝cyclohexylaminogroup，iii-2化合物的合成
如式所示，iii-2的合成过程与实施例40的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:263.5～265.1℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.04(s,1h),7.91(d,j＝7.7hz,1h),4.42(s,2h),3.88(s,3h),3.60–3.47(m,1h),3.41(s,3h),1.82–1.02(m,11h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ165.61,154.17,150.82,148.34,142.99,106.56,47.66,42.66,33.11,32.41,29.33,25.17,24.48.。
实施例43r3＝piperidinyl，iii-3化合物的合成
如式i所示，iii-3的合成过程与实施例40的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:216.8～218.4℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.52(s,1h),4.84(s,2h),3.96(s,3h),3.54(d,j＝35.4hz,7h),1.58(q,j＝5.1hz,6h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ164.68,155.06,151.52,149.16,141.56,107.57,45.84,43.33,41.95,33.51,29.76,26.21,25.34,24.43.。
实施例44r3＝4,4-difluoropiperidinyl，iii-4化合物的合成
如式i所示，iii-4的合成过程与实施例40的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:182.1～183.5℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.53(s,1h),4.87(s,2h),3.97(s,3h),3.71(m,j＝31.5,5.9hz,4h),3.58(s,3h),2.12(s,2h),2.00(m,j＝17.3,12.4hz,2h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ165.21,154.93,151.44,149.26,141.69,121.33,107.54,77.35,77.23,77.03,76.71,41.67,39.32,33.56,29.81。
实施例45r3＝morpholinyl，iii-5化合物的合成
如式所示，iii-5的合成过程与实施例40的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:216.7～217.5℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.46(s,1h),4.77(s,2h),3.90(s,3h),3.73–3.55(m,8h),3.51(d,j＝3.4hz,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ165.32,154.98,151.46,149.25,141.65,107.57,66.75,66.33,45.20,42.42,41.74,33.55,29.80.。
实施例46r3＝thiomorpholinyl，iii-6化合物的合成
如式i所示，iii-6的合成过程与实施例40的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:199.3～200.5℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.53(s,1h),4.83(s,2h),3.97(s,3h),3.86(m,j＝22.7,5.0hz,4h),3.58(s,3h),2.70(m,j＝42.4,5.0hz,4h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ165.13,154.96,151.45,149.22,141.65,107.55,47.71,44.98,41.95,33.56,29.81,27.70,27.24.。
实施例47r3＝4-piperidinylpiperidine，iii-7化合物的合成
如式所示，iii-7的合成过程与实施例40的合成采取同样的合成方法，产品呈白色固体。mp:206.1～207.3℃。1hnmr(400mhz,cdcl3-d6)δ7.53(s,1h),4.84(s,2h),4.66(d,j＝13.3hz,1h),3.97(s,3h),3.58(s,3h),3.17(t,j＝12.8hz,1h),2.98–2.54(m,6h),2.01(dd,j＝63.3,12.5hz,2h),1.53(s,8h),1.25(s,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3-d6)δ164.90,154.98,151.47,149.21,141.63,107.56,62.76,49.92,44.14,41.82,33.53,29.77,27.73,26.42,25.08,23.87.。
实施例48r3＝phenylpiperazinyl，iii-8化合物的合成
如式所示，iii-8的合成过程与实施例40的合成采取同样的合成方法，产品呈黄色固体。mp:222.1～223.3℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.07(s,1h),7.25(t,j＝7.7hz,2h),6.99(d,j＝8.1hz,2h),6.83(t,j＝7.3hz,1h),4.78(s,2h),3.66(dt,j＝55.7,5.1hz,4h),3.43(s,3h),3.17m,j＝40.0,5.0hz,4h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ164.99,154.12,150.78,150.74,148.38,143.14,
128.97,119.41,115.93,106.52,48.69,48.28,43.95,41.70,41.41,33.14,29.51,29.36.。
应用例1本发明化合物lsd1抑制活性的测定
1.实验方法：
样品为所合成的以上化合物、纯化而得；
样品储备液：称取1-2mg样品于1.5mlep管中，用dmso配制成浓度为20mm的溶液，4℃保存，实验过程中，所需浓度用dmso稀释。将待测样品和lsdl蛋白在室温孵育后，加入lsdl底物h3k4me2并孵育反应，之后加入荧光染料amplex和辣根过氧化酶hrp室温孵育，在酶标仪上设定激发光530nm，发射光590nm检测荧光数值：
对本发明系列化合物进行lsd1抑制活性测定，优选化合物在10μm浓度下的抑制率及对应的ic50值，如下表所示，其中化合物i-15，i-18及i-d对lsd1抑制活性较好，分别为8.98,8.89及6.45μm，其可作为先导化合物进行新型高效高选择性的lsd1抑制剂设计。