本发明涉及生物肥料制作领域，特别涉及一种利用废菌棒生产地衣芽孢杆菌菌肥的方法。
背景技术：
地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)是一类需氧或兼性厌氧G+细菌，在一定条件下能产生抗逆性内生孢子，产生脂肽类、肽类、磷脂类、多烯类、氨基酸类、核酸类物质等多种抗生素。这些抗生素对多种动、植物及人类病原菌起到很好的抑制作用。地衣芽孢杆菌还产生蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶等。进入2l世纪以来，关于地衣芽孢杆菌在饲料工业上的应用研究很多，在医药、畜牧、水产业等中都有广泛的应用，地衣芽孢杆菌包含在农业部允许的添加剂菌种目录中，已广泛应用于医药、农药、食品、饲料加工、环境污染治理等各个行业，是芽孢杆菌中较具应用潜力的菌种之一。目前，地衣芽孢杆菌固态肥料混合品很多，原材料为麸皮、米糠、黄豆粉饼、花生粉饼等农业副产物，存在价格高、高温灭菌后粘度增加、疏松度不够、空隙小、后续接种困难等问题，且质量参差不齐，有些所含杂菌数不符合要求，但杂菌率高，影响了地衣芽孢杆菌菌肥的肥效性。食用菌，是一个“短平快”产业，其营养丰富，口味鲜美，已逐渐成为人们餐桌上的新宠。在我国政府一系列方针政策的指引下，迎来了前所未有的良好机遇，其产量占世界总产量的70％以上，其总产值在中国种植业中的排名仅次于粮、棉、油、菜、果，居第六位，是我国农民发家致富的新途径。据统计，2014年，全国食用菌种植产量达3169万吨，随着食用菌大规模的种植兴起，其栽培废弃物伴随而生，越来越多。据统计，我国每年食用菌栽培产生的栽培废弃物高达3000万吨以上未能得到有效的循环利用，被随意堆放在房前屋后、路旁、地头、河渠沟谷中，对水源、空气、土壤与环境造成了严重污染，给食用菌产业的发展、人民生活环境和生活质量带来一系列的负面影响，食用菌废弃物中含有丰富的菌体蛋白、多种代谢产物及未被充分利用的营养物质等大量资源，可考虑作为地衣芽胞杆菌固态发酵原料进行生产。
技术实现要素：
鉴于上述内容，有必要提供一种利用食用菌废菌棒生产地衣芽孢杆菌菌肥的方法，利用废菌棒食用菌废弃物中含有丰富的菌体蛋白、多种代谢产物，作为固态发酵培养基成分之一，为地衣芽孢杆菌菌株提供养分，降低生产成本，又可降低食用菌废菌棒对环境的污染，同时提高地衣芽孢杆菌活菌数含量，提高肥效。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
步骤(1)液体菌种的制备：以地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)为菌种，以NA培养基为液体菌种用培养基，制备液体菌种A；
步骤(2)液体菌种的扩大培养：将步骤(1)得到的液体菌种放进摇瓶中培养，转速为180r/min，温度为30±1℃，培养时间为18～24h，得到液体菌种B。
步骤(3)地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)固体菌肥的制备：以废菌棒与麸皮或蔗渣或糖蜜混合后作为制备菌肥生产的固体基础培养基，分装发酵罐中，灭菌后，接种步骤(2)所制备的液体菌种B，30～35℃恒温下发酵30～72h，制备地衣芽孢杆菌固体发酵产物，发酵结束后将其拌匀，即得地衣芽孢杆菌菌肥；
所述步骤(1)液体菌种的制备为：用接种环将地衣芽孢杆菌菌株的单菌落接种于NA液体培养基中，于恒温培养箱中培养24h，培养温度设定为30±1℃，得到液体菌种A；
所述步骤(2)液体菌种的扩大培养为：将液体菌种A接种于LB液体培养基中，温度设定为30℃，恒温培养24h后即得液体菌种，然后置于恒温摇瓶振荡培养，转速180r/min，温度设定为30±1℃，培养18～24h，即得液体菌种B。
进一步的，所述步骤(1)中NA培养基由以下重量百分比的组分组成：牛肉浸膏0.3％，蛋白胨0.5％，酵母膏0.5％，氯化钠0.2％，琼脂1.8％，余量为水，pH为7.0；LB液体培养基由以下重量百分比的组分组成：：牛肉浸膏0.3％，蛋白胨0.5％，酵母膏0.5％，氯化钠0.2％，余量为水，pH为7.0。
进一步地，所述步骤(3)中地衣芽孢杆菌固体菌肥的制备步骤为：
步骤A.以废菌棒为主要成份的固体基础培养基配制：所述废菌棒与麸皮重量比为2:3～4:1配制，所述微生物废菌棒与蔗渣或糖蜜按重量比为1:4～4:1配制形成固体基础培养基；
步骤B.基础培养基中其他成分的添加：在固体基础培养基中按质量比添加K2HPO40.2％、K3PO40.4％，无水硫酸镁0.2％，酵母粉0.2％，搅拌均匀后加水，调整含水体积比为30％～50％，转入发酵罐中，发酵罐中装料量控制在10％-30％体积比范围内灭菌；
步骤C.地衣芽孢杆菌固体菌肥的培养与制备：往步骤D的培养基中接种步骤(2)中制备的液体菌种，按接种量3％(v/g)体积接种，30～32℃恒温下发酵15-47小时，即地衣芽孢杆菌固体发酵产物，发酵结束后将其通风干燥后拌匀，即得地衣芽孢杆菌菌肥。
进一步地，所述步骤A中，所述废菌棒与麸皮重量比为2:3～4:1配制，所述微生物废菌棒与蔗渣或糖蜜按重量比为1:4～4:1配制形成固体基础培养基；
所述步骤B中，调整含水体积比为40％，转入发酵罐中，发酵罐中装料量控制在30％体积比范围；
所述步骤B中，接种完成后，在30℃恒温下发酵32小时，即地衣芽孢杆菌固体发酵产物，发酵结束后将其通风干燥后拌匀，即得地衣芽孢杆菌菌肥。
进一步的，所述步骤(3)中食用菌废菌棒
本发明具有如下优点：
本发明利用废菌棒生产地衣芽孢杆菌菌肥为一种新的利用途径，解决了废菌棒造成的环境污染，实现资源再利用。该发酵产物既有很好的有机肥料，又含有丰富的地衣芽孢杆菌生防菌，有效活菌数含量能达到8亿/g以上，提高了地衣芽孢杆菌有效活菌数的含量。作为菌肥使用，改善土壤微生态环境，使用后，土壤中的优势种群稳定的保持优势地位，提高了肥效，提高农作物产量及质量。故本发明具有很好的经济效应和环境效应。
【具体实施方式】
一、利用香菇废菌棒生产地衣芽孢杆菌固体菌肥的制备
一种利用香菇废菌包生产地衣芽孢杆菌菌肥的方法，具体步骤如下：
步骤(1)液体菌种A的制备：用接种环将地衣芽孢杆菌菌划线于NA培养基上，并于恒温培养箱中培养24h，培养温度设定为30℃，即得菌种A；
步骤(2)液体菌种的扩大培养：将菌种A接种于LB液体培养基中，温度设定为30℃，转速180r/min，培养24h，然后置于恒温摇瓶振荡培养，转数180r/min，温度设定为31℃，培养18～24h，即得菌种B。
所述步骤(1)中NA培养基由以下重量百分比的组分组成：牛肉浸膏0.3％，蛋白胨0.5％，酵母膏0.5％，氯化钠0.2％，琼脂1.8％，余量为水，pH为7.0；
所述步骤(2)中LB液体由以下重量百分比的组分组成：牛肉浸膏0.3％，蛋白胨0.5％，酵母膏0.5％，氯化钠0.2％，余量为水，pH为7.0。
步骤A.以香菇废菌棒为主要成份的固体基础培养基配制：所述香菇废菌棒与麸皮4:1(质量比)配制形成固体基础培养基；
步骤B.基础培养基中其他成分的添加：在固体基础培养基中按质量比添加K2HPO40.2％、K3PO40.4％，无水硫酸镁0.2％，酵母粉0.2％，，搅拌均匀后加水，调整含水体积比为40％，转入发酵罐中，发酵罐中装料量控制在20％体积比范围内灭菌；
步骤C.地衣芽孢杆菌固体菌肥的培养与制备：往步骤A的培养基中接种步骤(2)中制备的液体菌种B，按接种量3％(v/g)体积接种，30℃恒温下发酵32小时，即地衣芽孢杆菌固体发酵产物，发酵结束后将其通风干燥后拌匀，即得地衣芽孢杆菌菌肥。
二、地衣芽孢杆菌固体发酵菌肥在水稻种植栽培中的应用
1.材料与分析
实验在贵港市港南区新塘乡的农户责任田进行。供试土壤为杂沙泥田，土壤肥料中等，前茬作物为水稻。
2.供试肥料
地衣芽孢杆菌微生物菌肥
3.供试作物
供试水稻品种为优特1012
4.试验方法
试验设四个处理：随机区组排列，小区试验面积为100cm2，处理如下：
处理1：秧苗苗定植时，用上述地衣芽孢杆菌菌肥的20kg做为基肥，30天后施等量追肥.
处理2：秧苗苗定植时，用普通基肥20kg做为基肥，30天后施等量追肥；
处理3：秧苗定植时，不施基肥与追肥。
5.结果与分析
5.1不同处理对水稻生物学形状的影响，试验采收前对处理进行生物学形状考擦，结果见
表1.
表1不同处理黄瓜生物学形状参考结果
由表1可知，处理1和处理2、处理3对比，株高分别增高5cm、9cm,没亩有效穗分别增
多0.3万及0.5万穗，每穗实颗粒分别增多7.0及9.0粒，结实率分别增加1.5和2.5
个百分点，千粒重分别增重0.4克和0.5克。说明地衣芽孢杆菌菌肥对改善水稻生物学
形状有一定作用。
5.2不同处理对水稻产量和产值的影响
(1)对产量的影响。不同处理各小区产量见表2
表2不同处理小区产量
从表2可知，处理1平均亩产490.0kg，处理2平均亩产456.7kg，处理3平均亩产443.4kg，处
理1比处理2亩产33.3kg，增产7.29％；处理1比处理3增产46.6kg，增产10.51％，处理2比
处理3增产13.3kg，增产3％。
(2)对水稻产值的影响。不同处理的产值比较见表3.
表3不同处理产值比较结果
注：稻谷以2.0元/kg计算。
综上可知，本发明利用废菌棒生产地衣芽孢杆菌菌肥为一种新的利用途径，解决了废菌棒造成的环境污染，实现资源再利用。该发酵产物既有很好的有机肥料，又含有丰富的地衣芽孢杆菌生防菌，有效活菌数含量能达到8亿/g，提高了地衣芽孢杆菌有效活菌数的含量，作为菌肥使用，改善土壤微生态环境，使用后，土壤中的优势种群稳定的保持优势地位，提高了肥效，提高农作物产量及质量。故本发明具有很好的经济效应和环境效应。
总之，利用废菌棒作为固态发酵培养基成份之一，即可为菌株发酵提供所需养分，降低生产成本，又可降低农副产品废弃物对环境的污染。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是熟悉本技术领域的技术人员应当理解，我们所描述的具体的实施例只是说明性的，而不是用于对本发明的范围的限定，熟悉本领域的技术人员在依照本发明的精神所作的等效的修饰以及变化，都应当涵盖在本发明的权利要求所保护的范围内。