用于精神类药物相关基因多态性位点检测的引物组、试剂盒和方法与流程

本发明涉及基因多态性检测
技术领域：
，具体而言，涉及一种用于精神类药物相关基因多态性位点检测的引物组、试剂盒和方法。
背景技术：
：精神疾病已经成为我国的高发疾病，药物治疗是目前精神疾病的主要临床手段，但是药物疗效和不良反应也呈现较明显的个体差异。出现差异的原因，除了病理、生理、性别、年龄、身高、体重、依从性等外，遗传因素是影响药物反应差异的重要因素。研究发现，用于治疗精神疾病的药物的疗效与多种基因表型相关，基因表型不同，药物的治疗效果就存在显著差异。近年来，药物基因组学得到了飞速发展，在美国fda批准的药品说明书中，已有多种精神类药物添加了药物基因组学的信息。因此为取得最佳治疗效果，医生应依据患者的基因型资料选取合适的精神类药物，即根据个体遗传特征(基因型)，选择有效的治疗方案。实现“基因导向型”个体化药物治疗和“量体用药”。传统的检测方法主要为sanger测序、片段分析或是单碱基延伸技术，每个反应仅检测1个或是几个基因位点。其存在检测效率低，通量低的问题。传统的检测方法完成一次检测周期较长，需要实验人员较多；同时检测配套试剂中，需要荧光标记引物或ddntp或长片段引物，成本较高。由于药物代谢基因在基因组中存在有较多重复序列，传统的检测方法对基因难扩增、难检测。传统的检测方法实验流程长，样品孔反复开盖、加样次数多；同时同一反应内多个基因位点竞争性扩增，相关干扰大。传统检测方法得到的原始结果均无法在仪器上直观显示检测结果，需要实验员自行设置参数分析，结果判读复杂。传统的检测方法需要用到荧光标记的引物或ddntp或是长片段引物，在室温或是光照条件下暴露较长时间，或是反复冻融次数过多极易导致检测失败，失败率高。鉴于此，特提出本发明。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种用于精神类药物相关基因多态性位点检测的引物组，采用该引物组可以同时对20个精神类药物相关基因的25个snp位点的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，snp位点之间无干扰等特点。本发明的另一目的在于提供一种用于精神类药物相关基因多态性位点检测的试剂盒，采用该试剂盒可以同时对20个精神类药物相关基因的25个snp位点的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，snp位点之间无干扰等特点。本发明的另一目的在于提供一种精神类药物相关基因多态性位点检测的方法，该方法可以同时对20个精神类药物相关基因的25个snp位点的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，snp位点之间无干扰等特点。本发明是这样实现的：一方面，本发明提供了一种用于精神类药物相关基因多态性位点检测的引物组，其包括引物组合1-引物组合25中的一种或多种的组合；其中，引物组合1包括：seqidno.1-2所示的扩增引物和seqidno.51所示的检测引物；引物组合2包括：seqidno.3-4所示的扩增引物和seqidno.52所示的检测引物；引物组合3包括：seqidno.5-6所示的扩增引物和seqidno.53所示的检测引物；引物组合4包括：seqidno.7-8所示的扩增引物和seqidno.54所示的检测引物；引物组合5包括：seqidno.9-10所示的扩增引物和seqidno.55所示的检测引物；引物组合6包括：seqidno.11-12所示的扩增引物和seqidno.56所示的检测引物；引物组合7包括：seqidno.13-14所示的扩增引物和seqidno.57所示的检测引物；引物组合8包括：seqidno.15-16所示的扩增引物和seqidno.58所示的检测引物；引物组合9包括：seqidno.17-18所示的扩增引物和seqidno.59所示的检测引物；引物组合10包括：seqidno.19-20所示的扩增引物和seqidno.60所示的检测引物；引物组合11包括：seqidno.21-22所示的扩增引物和seqidno.61所示的检测引物；引物组合12包括：seqidno.23-24所示的扩增引物和seqidno.62所示的检测引物；引物组合13包括：seqidno.25-26所示的扩增引物和seqidno.63所示的检测引物；引物组合14包括：seqidno.27-28所示的扩增引物和seqidno.64所示的检测引物；引物组合15包括：seqidno.29-30所示的扩增引物和seqidno.65所示的检测引物；引物组合16包括：seqidno.31-32所示的扩增引物和seqidno.66所示的检测引物；引物组合17包括：seqidno.33-34所示的扩增引物和seqidno.67所示的检测引物；引物组合18包括：seqidno.35-36所示的扩增引物和seqidno.68所示的检测引物；引物组合19包括：seqidno.37-38所示的扩增引物和seqidno.69所示的检测引物；引物组合20包括：seqidno.39-40所示的扩增引物和seqidno.70所示的检测引物；引物组合21包括：seqidno.41-42所示的扩增引物和seqidno.71所示的检测引物；引物组合22包括：seqidno.43-44所示的扩增引物和seqidno.72所示的检测引物；引物组合23包括：seqidno.45-46所示的扩增引物和seqidno.73所示的检测引物；引物组合24包括：seqidno.47-48所示的扩增引物和seqidno.74所示的检测引物；引物组合25包括：seqidno.49-50所示的扩增引物和seqidno.75所示的检测引物。采用本发明提供的引物组，结合飞行时间质谱技术可以同时对20个精神类药物相关基因例如abcb1、ankk1、ces1、cyp1a2、cyp2c19、cyp2c9、cyp3a5、drd1、drd2、fkbp5、hla-b、htr1a、htr2c、mc4r、polg、scn1a、scn2a、ugt1a4、ugt2b15和cyp3a4共25个snp位点例如rs1045642、rs1800497、rs71647871、rs762551、rs4244285、rs4986893、rs12248560、rs1799853、rs1057910、rs776746、rs4532、rs1799978、rs1799732、rs4713916、rs1360780、rs10484555、rs6295、rs1414334、rs489693、rs3087374、rs2298771、rs2304016、rs2011425、rs1902023以及rs35599367的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，各snp位点检测结果之间无干扰等特点。其中，上述20个精神类药物相关基因与25个snp位点的位置关系加下表1。表1上述的引物组合1-引物组合25的扩增引物的序列见下表2。表2注：f：扩增用上游引物；r：扩增用下游引物上述的引物组合1-引物组合25的检测引物的序列以及检测的snp见下表3。表3上述的引物组合1-引物组合25的检测引物以其扩增产物的分子量大小的峰位置及其对应的snp位点基因型见下表4。表4另一方面，本发明提供了一种精神类药物相关基因多态性位点检测的试剂盒，其包括上述的引物组。采用本发明提供的试剂盒，结合飞行时间质谱技术可以同时对20个精神类药物相关基因例如abcb1、ankk1、ces1、cyp1a2、cyp2c19、cyp2c9、cyp3a5、drd1、drd2、fkbp5、hla-b、htr1a、htr2c、mc4r、polg、scn1a、scn2a、ugt1a4、ugt2b15和cyp3a4共25个snp位点例如rs1045642、rs1800497、rs71647871、rs762551、rs4244285、rs4986893、rs12248560、rs1799853、rs1057910、rs776746、rs4532、rs1799978、rs1799732、rs4713916、rs1360780、rs10484555、rs6295、rs1414334、rs489693、rs3087374、rs2298771、rs2304016、rs2011425、rs1902023以及rs35599367的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，各snp位点检测结果之间无干扰等特点。进一步地，在本发明的一些实施方案中，试剂盒还包括有如下组分：mg2+、dntps和taqdna聚合酶。另一方面，本发明提供了一种精神类药物相关基因多态性位点检测的方法，其包括如下步骤：(1)使用上述引物组中的扩增引物对样品进行pcr扩增，得到第一扩增产物；(2)使用上述引物组中的检测引物对经碱性磷酸酶处理后的第一扩增产物进行单碱基延伸反应，得到第二扩增产物；(3)采用飞行时间质谱技术分析所述第二扩增产物的多态性。判断结果时，根据检测引物扩增的分子量大小和峰位置，各确定各snp位点的基因型。进一步地，在本发明的一些实施方案中，在步骤(1)中，进行pcr扩增的体系含有：引物组合1-引物组合25的扩增引物、mg2+、dntps和taqdna聚合酶。进一步地，在本发明的一些实施方案中，在步骤(1)中，所述扩增引物在体系中的浓度为0.8-1.2μm。进一步地，在本发明的一些实施方案中，在步骤(1)中，进行pcr扩增的程序的退火温度为：55-57℃。进一步地，在本发明的一些实施方案中，在步骤(2)中，进行单碱基延伸反应的体系含有：引物组合1-引物组合25的检测引物和第一扩增产物。进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述检测引物在单碱基延伸反应的体系中的总浓度为20-22μm。进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述引物组合1-引物组合25的各检测引物在单碱基延伸反应的体系中的浓度分别如下：0.577μm、0.582μm、0.657μm、0.661μm、0.698μm、0.731μm、0.742μm、0.768μm、0.772μm、0.806μm、0.836μm、0.843μm、0.853μm、0.857μm、0.874μm、0.882μm、0.937μm、0.946μm、0.992μm、1.000μm、1.017μm、1.045μm、1.122μm、1.150μm以及1.189μm。进一步地，在本发明的一些实施方案中，单碱基延伸反应的体系的体积为9μl。进一步地，在本发明的一些实施方案中，在步骤(2)中，进行单碱基延伸反应的程序的退火温度为：51-53℃，退火时间为：4-6s。进一步地，在本发明的一些实施方案中，进行单碱基延伸反应的程序的延伸温度为79-81℃，时间为4-6s。采用本发明提供的检测方法，结合飞行时间质谱技术可以同时对20个精神类药物相关基因例如abcb1、ankk1、ces1、cyp1a2、cyp2c19、cyp2c9、cyp3a5、drd1、drd2、fkbp5、hla-b、htr1a、htr2c、mc4r、polg、scn1a、scn2a、ugt1a4、ugt2b15和cyp3a4共25个snp位点例如rs1045642、rs1800497、rs71647871、rs762551、rs4244285、rs4986893、rs12248560、rs1799853、rs1057910、rs776746、rs4532、rs1799978、rs1799732、rs4713916、rs1360780、rs10484555、rs6295、rs1414334、rs489693、rs3087374、rs2298771、rs2304016、rs2011425、rs1902023以及rs35599367的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，各snp位点检测结果之间无干扰等特点。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为实验例2中的采用实施例1的试剂盒对样品1的检测结果。图2为实验例1中的对照引物对1的检测结果。图3为实验例1中的引物组合12的检测结果。图4为实验例2中的对照引物对2的检测结果。图5为实验例2中的引物组合20的检测结果。图6为实验例3中的对照引物对3的检测结果。图7为实验例3中的引物组合24的检测结果。图8为实验例4中的对照引物对4的检测结果。图9为实验例4中的引物组合7的检测结果。图10为实验例5中的对照引物对5的检测结果。图11为实验例5中的引物组合22的检测结果。图12为实验例6中的对照引物对6的检测结果。图13为实验例6中的引物组合2的检测结果。具体实施方式为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。实施例1本实施例提供的精神类药物相关基因多态性位点检测的试剂盒，其包括用于精神类药物相关基因多态性位点检测的引物组，该引物组包括如下引物组合1-引物组合25。其中，引物组合1包括：seqidno.1-2所示的扩增引物和seqidno.51所示的检测引物；引物组合2包括：seqidno.3-4所示的扩增引物和seqidno.52所示的检测引物；引物组合3包括：seqidno.5-6所示的扩增引物和seqidno.53所示的检测引物；引物组合4包括：seqidno.7-8所示的扩增引物和seqidno.54所示的检测引物；引物组合5包括：seqidno.9-10所示的扩增引物和seqidno.55所示的检测引物；引物组合6包括：seqidno.11-12所示的扩增引物和seqidno.56所示的检测引物；引物组合7包括：seqidno.13-14所示的扩增引物和seqidno.57所示的检测引物；引物组合8包括：seqidno.15-16所示的扩增引物和seqidno.58所示的检测引物；引物组合9包括：seqidno.17-18所示的扩增引物和seqidno.59所示的检测引物；引物组合10包括：seqidno.19-20所示的扩增引物和seqidno.60所示的检测引物；引物组合11包括：seqidno.21-22所示的扩增引物和seqidno.61所示的检测引物；引物组合12包括：seqidno.23-24所示的扩增引物和seqidno.62所示的检测引物；引物组合13包括：seqidno.25-26所示的扩增引物和seqidno.63所示的检测引物；引物组合14包括：seqidno.27-28所示的扩增引物和seqidno.64所示的检测引物；引物组合15包括：seqidno.29-30所示的扩增引物和seqidno.65所示的检测引物；引物组合16包括：seqidno.31-32所示的扩增引物和seqidno.66所示的检测引物；引物组合17包括：seqidno.33-34所示的扩增引物和seqidno.67所示的检测引物；引物组合18包括：seqidno.35-36所示的扩增引物和seqidno.68所示的检测引物；引物组合19包括：seqidno.37-38所示的扩增引物和seqidno.69所示的检测引物；引物组合20包括：seqidno.39-40所示的扩增引物和seqidno.70所示的检测引物；引物组合21包括：seqidno.41-42所示的扩增引物和seqidno.71所示的检测引物；引物组合22包括：seqidno.43-44所示的扩增引物和seqidno.72所示的检测引物；引物组合23包括：seqidno.45-46所示的扩增引物和seqidno.73所示的检测引物；引物组合24包括：seqidno.47-48所示的扩增引物和seqidno.74所示的检测引物；引物组合25包括：seqidno.49-50所示的扩增引物和seqidno.75所示的检测引物。各引物组合的扩增引物和检测引物的序列以及所检测的snp位点见前文表2-表4。当然，需要说明的是，在其他的实施例中，引物组包括引物组合1-引物组合25中的任意1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种、18种、19种、20种、21种、22种、23种以及24种的组合。在本发明公开了上述引物组合的基础上，本领域技术人员可以根据检测目的基因的类别和数量，从引物组合1-引物组合25中进行任意组合。无论是何种的组合方式，只要其是选自引物组合1-引物组合25，即属于本发明的保护范围。本实施例的试剂盒可以同时对20个精神类药物相关基因例如abcb1、ankk1、ces1、cyp1a2、cyp2c19、cyp2c9、cyp3a5、drd1、drd2、fkbp5、hla-b、htr1a、htr2c、mc4r、polg、scn1a、scn2a、ugt1a4、ugt2b15和cyp3a4共25个snp位点例如rs1045642、rs1800497、rs71647871、rs762551、rs4244285、rs4986893、rs12248560、rs1799853、rs1057910、rs776746、rs4532、rs1799978、rs1799732、rs4713916、rs1360780、rs10484555、rs6295、rs1414334、rs489693、rs3087374、rs2298771、rs2304016、rs2011425、rs1902023以及rs35599367的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，各snp位点检测结果之间无干扰等特点。采用该试剂盒进行检测的方法如下：(1)使用上述引物组中的扩增引物对样品进行pcr扩增，得到第一扩增产物；pcr扩增体系如下：试剂体积(μl)终浓度ddh2o0.8n/a10xpcrbuffer0.51xmgcl20.42mmdntpmix0.1500μmprimermix1.01μmpcrenzyme0.20.2u/μldna样品2.010-20ngtotal5.0n/a注：1.本发明中所有检测用试剂均购自agenabioscience(基纳生物技术(上海)有限公司)，下同；2.primermix为所有扩增引物以1:1的浓度比例配置成的混合物，反应时所有引物的终浓度为1μm(即每条扩增引物的终浓度为1μm)；3.n/a表示此项无意义。pcr扩增程序如下：(2)使用上述引物组中的检测引物对经碱性磷酸酶处理后的第一扩增产物进行单碱基延伸反应，得到第二扩增产物；单碱基延伸反应体系如下：其中，iplexprimermix为所有检测引物的混合物，检测引物配置表(以配置100μl为例，余量用ddh2o补足至100μl)如下：单碱基延伸反应程序如下：(3)采用飞行时间质谱技术分析所述第二扩增产物的多态性。根据检测引物及其第二扩增产物的分子量大小的峰位置可确定snp位点的基因型，见表4。实施例2采用实施例1的试剂盒和方法，对已知snp位点基因型的20份样品(均来自临床，样品类型为全血或口腔拭子)进行检测，结果如下表5-7所示。表5表6表7其中，1号样本的质谱检测结果见图1。表5-7中的已知结果为使用传统方法(片段分析，单碱基延伸和sanger测序)检测的样本结果统计，右侧检测结果为使用实施例1的引物组检测的结果。结果显示使用实施例1的引物组和检测方法的结果与传统方法结果一致。实验例1距离rs12248560位点3个碱基范围内有一个高突变率的snp位点rs1024814428，10个碱基范围内有snp位点2个，有7个snp位点在rs4986893位点前后20个碱基之间。此外，基因组中存在有假基因，极容易扩增得到非目的片段，故在引物设计中一般策略为扩增尽可能长的片段，再检测，易造成单一检测位点少，通量少(如测序分析、片段分析)；若降低扩增长度，易检测失败。这些原因说明本发明引物组的各种引物的设计是需要付出创造性劳动的。基于此，针对rs12248560位点，设计对照引物对1：f(代表上游引物，下同):cgtggcgcattatctcttac；r(代表下游引物，下同):aacaaagttttagcaaacg。使用对照引物对1可得到扩增产物86bp。对产物使用质谱分析的结果如图2所示。图中rs12248560代表检测引物，右侧标黑的c/a/t代表检测产物，根据峰的有无可判定成3种不同基因型，如图所示结果中由于无产物峰，无法判断样本基因型。结果难以判断，分型失败。而使用本发明实施例1提供的针对rs12248560位点的引物组合12的扩增引物对：f:aacaaagttttagcaaacg；r:ggatttgagctgaggtcttc。进行扩增，对产物进行质谱分析结果如图3所示。图中左侧rs12248560代表检测引物，右侧标黑的c/a/t代表检测产物，根据峰的有无可判定成3种不同基因型，如图所示结果样本基因型为cc纯合。结果显示检测结果较好，基因分型清晰，无假阳性产物生成。表示使用此引物检测该位点，可以成功分型。实验例2根据ncbi数据库数据，rs4244285位点前后存在众多snp位点，在距离3个碱基范围内，存在有rs879130837、rs6413438、rs1316237390和rs1362033140等4个snp位点，在10个碱基范围内则存在8个snp位点，在20个碱基范围内有snp位点16个。针对rs4244285位点，设计对照引物对2：f:tgcaataattttcccactatcatt；r:tggtgttcttttactttctcca。使用对照引物对2扩增可得到扩增产物110bp。对产物使用质谱分析的结果如图4所示。图中左侧rs4244285代表检测引物，右侧g/c/a代表检测产物，根据峰的有无可判定成3种不同基因型，如图所示结果显示可能同时存在有3种基因型。结果存在假阳性，有错误的产物峰生成。根据ncbi数据库显示，真实情况下，c突变的频率极低，即在本实验中应不会产生产物峰，因此使用此引物检测该位点结果不准确。而使用本发明实施例1提供的针对rs4244285位点的引物组合20的扩增引物对：f:tccatcgattcttggtgttc；r:gcaataattttcccactatc。进行扩增，对产物进行质谱分析结果如图5所示。图中左侧rs4244285代表检测引物，右侧g/c/a代表检测产物，根据峰的有无可判定成3种不同基因型，如图所示结果显示为g纯合基因型。结果显示检测结果较好，基因分型清晰，无假阳性产物生成。表示使用此引物检测该位点，可以成功分型。实验例3针对rs1902023位点，设计对照引物对3：f:tctactcttgtcaatgccag；r:ccatatatccatctatcgag。使用对照引物对3扩增可得到扩增产物119bp。对产物使用质谱分析的结果如图6所示。图中rs1902023代表检测引物，右侧标黑的c/a代表检测产物，根据峰的有无可判定成3种不同基因型，如图所示结果中由于无产物峰，无法判断样本基因型。而使用本发明实施例1提供的针对rs1902023位点的引物组合24的扩增引物对：f:tagctctggaagctgtggaa；r:cgagaattttcagaagaga。进行扩增，对产物进行质谱分析结果如图7所示。图中左侧rs1902023代表检测引物，右侧c/a代表检测产物，根据峰的有无可判定成3种不同基因型，如图所示结果显示为ca杂合基因型。结果显示检测结果较好，基因分型清晰，无假阳性产物生成。表示使用此引物检测该位点，可以成功分型。实验例4rs1057910位点前后3个碱基范围内有rs1057909、rs1201563690、rs56165452和rs774992703四个snp位点，且都为三等位基因，即每个位点均有3种组成碱基的可能，此段7bp的序列存在多达162种排列组合，极易导致检测失败；而在距离rs1057910位点10个碱基范围内有snp位点11个，有24个snp位点在rs4986893位点前后20个碱基之间。针对rs1057910位点，设计对照引物对4：f:atgcaagacaggagccacat；r:catggggcaggctggtggg。使用对照引物对4扩增可得到扩增产物91bp。对产物使用质谱分析的结果如图8所示。图中rs1057910代表检测引物，右侧标黑的c/a代表检测产物，根据峰的有无可判定成3种不同基因型，如图所示结果中由于无产物峰，无法判断样本基因型。结果难以判断，分型失败。而使用本发明实施例1提供的针对rs1057910位点的引物组合7的扩增引物对：f:aggaagagattgaacgtgtg；r:tgtcacaggtcactgcatgg。进行扩增，对产物进行质谱分析结果如图9所示。图中左侧rs1057910代表检测引物，右侧c/a代表检测产物，根据峰的有无可判定成3种不同基因型，如图所示结果显示为aa纯合基因型。结果显示检测结果较好，基因分型清晰，无假阳性产物生成。表示使用此引物检测该位点，可以成功分型。实验例5rs2011425位点前后3个碱基范围内有rs140860588、rs138086321、rs767708509和rs182680267四个snp位点，10个碱基范围内有snp位点10个，有17个snp位点在rs4986893位点前后20个碱基之间。针对rs1057910位点，设计对照引物对5：f:gcgtgattggtctttcccag；r:ttgagtgtagcccagggtaa。使用对照引物对5扩增可得到扩增产物500bp。对产物使用质谱分析的结果如图10所示。图中rs2011425代表检测引物，右侧标黑的g/t/a代表检测产物，根据峰的有无可判定成3种不同基因型，如图所示结果中由于g峰矮小，无法判断是杂峰干扰还是正确扩增产物，因此无法判断样本基因型为tt纯合还是gt杂合。结果难以判断，分型失败。而使用本发明实施例1提供的针对rs2011425位点的引物组合22的扩增引物对：f:attcacctctggggtgaggar:tgttggtggtgcccactgat。进行扩增，对产物进行质谱分析结果如图11所示。图中左侧rs2011425代表检测引物，右侧g/t/a代表检测产物，根据峰的有无可判定成3种不同基因型，如图所示结果显示为tt纯合基因型。结果显示检测结果较好，基因分型清晰，无假阳性产物生成。表示使用此引物检测该位点，可以成功分型。实验例6在靠近rs1045642位点1个碱基距离位置有一个三等位位点rs779788253，下游距离12个碱基位置有一高频突变的rs2229107位点，是导致rs1045642位点检测失败的主要潜在原因，同时在该位点前后20个碱基的范围内还有10个snp位点。针对rs1045642位点，设计对照引物对6：f:gtgtcccaggagcccatc；r:gctcccaggctgtttatttg。使用对照引物对6扩增可得到扩增产物177bp。对产物使用质谱分析的结果如图12所示。图中图中rs1045642代表检测引物，右侧标黑的g/t/a代表检测产物，根据峰的有无可判定成3种不同基因型，如图所示结果中由于g峰矮小，无法判断是杂峰干扰还是正确扩增产物，因此无法判断样本基因型aa纯合还是ga杂合。结果难以判断，分型失败。。而使用本发明实施例1提供的针对rs1045642位点的引物组合2的扩增引物对：f:taggcagtgactcgatgaag；r:tatggagacaacagccgggt。进行扩增，对产物进行质谱分析结果如图13所示。图中左侧rs1045642代表检测引物，右侧a/g/t代表检测产物，根据峰的有无可判定成3种不同基因型，如图所示结果显示为ag杂合基因型。结果显示检测结果较好，基因分型清晰，无假阳性产物生成。表示使用此引物检测该位点，可以成功分型。以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。sequencelisting<110>广州金域医学检验中心有限公司<120>用于精神类药物相关基因多态性位点检测的引物组、试剂盒和方法<160>75<170>patentinversion3.5<210>1<211>20<212>dna<213>人工序列<400>1gttcagagtcctcatcttcc20<210>2<211>20<212>dna<213>人工序列<400>2atctgactgacccctattcc20<210>3<211>20<212>dna<213>人工序列<400>3taggcagtgactcgatgaag20<210>4<211>20<212>dna<213>人工序列<400>4tatggagacaacagccgggt20<210>5<211>20<212>dna<213>人工序列<400>5ttttgaggcgggaacgcaac20<210>6<211>19<212>dna<213>人工序列<400>6aggacccagcctgcaatca19<210>7<211>20<212>dna<213>人工序列<400>7ggcctcatctacccaataac20<210>8<211>20<212>dna<213>人工序列<400>8agcctaaagtaggccttgtc20<210>9<211>20<212>dna<213>人工序列<400>9tcaaaacaagggatggcgga20<210>10<211>20<212>dna<213>人工序列<400>10aaaggagctgtacctcctcg20<210>11<211>20<212>dna<213>人工序列<400>11acacagccatcctcaaagtg20<210>12<211>20<212>dna<213>人工序列<400>12acatgatgccctgctttcgg20<210>13<211>20<212>dna<213>人工序列<400>13aggaagagattgaacgtgtg20<210>14<211>20<212>dna<213>人工序列<400>14tgtcacaggtcactgcatgg20<210>15<211>20<212>dna<213>人工序列<400>15ctccttgatctcagaggtag20<210>16<211>20<212>dna<213>人工序列<400>16cagaaggtgttatcaggtgc20<210>17<211>20<212>dna<213>人工序列<400>17ctaagctccatctaccatgc20<210>18<211>20<212>dna<213>人工序列<400>18gaatcttgaggctcctttcc20<210>19<211>20<212>dna<213>人工序列<400>19gtaatgtggtccaaacaggg20<210>20<211>20<212>dna<213>人工序列<400>20atgtaccacccagcttaacg20<210>21<211>20<212>dna<213>人工序列<400>21gactgtaagtggtttctcag20<210>22<211>20<212>dna<213>人工序列<400>22aacatcaggattgtaagcac20<210>23<211>19<212>dna<213>人工序列<400>23aacaaagttttagcaaacg19<210>24<211>20<212>dna<213>人工序列<400>24ggatttgagctgaggtcttc20<210>25<211>20<212>dna<213>人工序列<400>25gtcagtctcccaattattgc20<210>26<211>20<212>dna<213>人工序列<400>26cgagaacggaggtagctttt20<210>27<211>20<212>dna<213>人工序列<400>27ttgaactcaccaaaggctcc20<210>28<211>20<212>dna<213>人工序列<400>28agcaaatacagagcctccag20<210>29<211>20<212>dna<213>人工序列<400>29tatctggcaaccctaacctc20<210>30<211>20<212>dna<213>人工序列<400>30cctaacgagatagtgaggag20<210>31<211>20<212>dna<213>人工序列<400>31cagtgatatggagtagggtc20<210>32<211>19<212>dna<213>人工序列<400>32ctgcggaattttgggatgg19<210>33<211>20<212>dna<213>人工序列<400>33gccagttcctataccacttg20<210>34<211>20<212>dna<213>人工序列<400>34agaaagacagttgtatgtcc20<210>35<211>20<212>dna<213>人工序列<400>35aggcacagaaggctttcaca20<210>36<211>20<212>dna<213>人工序列<400>36tgccagcagtagcaagtaag20<210>37<211>20<212>dna<213>人工序列<400>37atacctgccacgctgtaaac20<210>38<211>20<212>dna<213>人工序列<400>38ccagatttggtcaatacagg20<210>39<211>20<212>dna<213>人工序列<400>39tccatcgattcttggtgttc20<210>40<211>20<212>dna<213>人工序列<400>40gcaataattttcccactatc20<210>41<211>20<212>dna<213>人工序列<400>41agagcatcattttgcccctc20<210>42<211>20<212>dna<213>人工序列<400>42gggtggctgaagtgttttac20<210>43<211>20<212>dna<213>人工序列<400>43attcacctctggggtgagga20<210>44<211>20<212>dna<213>人工序列<400>44tgttggtggtgcccactgat20<210>45<211>20<212>dna<213>人工序列<400>45cactcctgaagtgaaaactc20<210>46<211>20<212>dna<213>人工序列<400>46atcccaagataatccacggc20<210>47<211>20<212>dna<213>人工序列<400>47tagctctggaagctgtggaa20<210>48<211>19<212>dna<213>人工序列<400>48cgagaattttcagaagaga19<210>49<211>20<212>dna<213>人工序列<400>49ccaaagtgcagtgaggagag20<210>50<211>20<212>dna<213>人工序列<400>50cctggctctgtgtcctgtaa20<210>51<211>15<212>dna<213>人工序列<400>51cacccctcaagttcc15<210>52<211>15<212>dna<213>人工序列<400>52ctttgctgccctcac15<210>53<211>16<212>dna<213>人工序列<400>53cccacacccagagtaa16<210>54<211>16<212>dna<213>人工序列<400>54gtgactttgctaccct16<210>55<211>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