含有胍基的取代嘧啶衍生物、其药物组合物及其制备方法和应用与流程

本发明涉及一种含有胍基的取代嘧啶衍生物，还涉及含有该类衍生物的药物组合物以及该类衍生物的制备方法。

背景技术：

胍基具有广泛的生物活性，在治疗各种疾病的药物开发中具有重要的如抗肿瘤、抗病毒、降血糖、杀菌等作用。胍基阳离子基团y型叉状结构使其能依靠氢键相互作用或是电荷配对方式与阴离子形成强的非共价作用，可用于细胞内分子的识别，对细胞内阴离子多糖具有较好的结合能力。

嘧啶二苯乙烯是一种具有良好荧光性能的d-π-a-π-d结构，该类化合物具有抗肿瘤、抗阿尔兹海默症等多种生物活性，而且在荧光成像方面具有重要应用，可用于活细胞蛋白质、细胞器的活性成像，以检测和治疗疾病。

嘧啶衍生物的合成方法很多，但嘧啶胍类化合物的合成方法很少，如果可以利用胍基对嘧啶二苯乙烯类化合物进行结构修饰，简便、高效地合成含有胍基的二苯乙烯嘧啶衍生化合物，预计可以使二苯乙烯嘧啶衍生化合物获得广阔的市场前景。

技术实现要素：

本发明提出一种含有胍基的取代嘧啶衍生物、其药物组合物及其制备方法和应用，为新型抗hsv药物的理性设计提供了新的结构和思路，并为开发基于新靶标的抗单纯疱疹病毒药物提供了重要的理论参考。

为了达到上述目的，本发明提供了一种具有由通式i所示的含有胍基的取代嘧啶衍生物：

其中，取代基r为r1、r2、r3和r4分别独立选自-h或-och3，n为2-6的正整数。

作为优选，所述衍生物选自如下化合物之一：

a1：2-(4,6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)乙基胍三氟乙酸盐；

a2：3-(4,6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丙基胍三氟乙酸盐；

a3：4-(4,6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丁基胍三氟乙酸盐；

a4：5-(4,6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)戊基胍三氟乙酸盐；

a5：6-(4,6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)己基胍三氟乙酸盐；

b1：2-(4,6-二(3,4,5-三甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)乙基胍三氟乙酸盐；

b2：3-(4,6-二(3,4,5-三甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丙基胍三氟乙酸盐；

b3：4-(4,6-二(3,4,5-三甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丁基胍三氟乙酸盐；

b4：5-(4,6-二(3,4,5-三甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)戊基胍三氟乙酸盐；

b5：6-(4,6-二(3,4,5-三甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)己基胍三氟乙酸盐；

c1：2-(4,6-二(3,4-二甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)乙基胍三氟乙酸盐；

c2：3-(4,6-二(3,4-二甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丙基胍三氟乙酸盐；

c3：4-(4,6-二(3,4-二甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丁基胍三氟乙酸盐；

c4：5-(4,6-二(3,4-二甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)戊基胍三氟乙酸盐；

c5：6-(4,6-二(3,4-二甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)己基胍三氟乙酸盐；

d1：2-(4,6-二(3-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)乙基胍三氟乙酸盐；

d2：3-(4,6-二(3-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丙基胍三氟乙酸盐；

d3：4-(4,6-二(3-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丁基胍三氟乙酸盐；

d4：5-(4,6-二(3-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)戊基胍三氟乙酸盐；

d5：6-(4,6-二(3-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)己基胍三氟乙酸盐；

e1：2-(4,6-二(2-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)乙基胍三氟乙酸盐；

e2：3-(4,6-二(2-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丙基胍三氟乙酸盐；

e3：4-(4,6-二(2-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丁基胍三氟乙酸盐；

e4：5-(4,6-二(2-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)戊基胍三氟乙酸盐；

e5：6-(4,6-二(2-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)己基胍三氟乙酸盐。

本发明还提供一种根据上述技术方案所述的含有胍基的取代嘧啶衍生物的制备方法，包括以下步骤：

将2-羟基-4,6-二(甲氧基取代的苯乙烯基)嘧啶、碳酸钾以摩尔比1:(2-2.5)溶于dmf中，室温搅拌1-1.5h，加入溴取代叔丁基二甲基硅醚于70-80℃搅拌反应12-16h，再用tbaf/thf溶液脱去叔丁基二甲基硅基，得到2-位羟基的氢被烷基醇取代的化合物；

将得到的2-位羟基的氢被烷基醇取代的4,6-二(甲氧基取代的苯乙烯基)嘧啶化合物与n,n＇-双(叔丁氧基羰基)胍以摩尔比1:(1.5-2)和三苯基膦以摩尔比1:(1.5-2)在无水四氢呋喃中搅拌，冰浴下滴入以摩尔比1:(1-1.5)溶有20-60％diad的无水四氢呋喃溶液，转移至室温反应3-5h；然后于0-5℃条件下加酸脱除boc基团，纯化得到含有胍基的取代嘧啶衍生物。

在上述技术方案中，n,n＇-双(叔丁氧基羰基)胍、溴取代叔丁基二甲基硅醚、2-羟基-4,6-二(甲氧基取代的苯乙烯基)嘧啶的制备方法为常规方法，并不限于上述制备方法，也可通过其他合成路线制备得到，但优选上述合成路线，简单、易操作。

作为优选，2-羟基-4,6-二(甲氧基取代的苯乙烯基)嘧啶选自2-羟基-4,6-二(3-甲氧基苯乙烯基)嘧啶、2-羟基-4,6-二(3,4-二甲氧基苯乙烯基)嘧啶、2-羟基-4,6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶、2-羟基-4,6-二(2-甲氧基苯乙烯基)嘧啶和2-羟基-4,6-二(3,4,5-三甲氧基苯乙烯基)嘧啶中的任一种；

溴取代叔丁基二甲基硅醚选自3-溴丙基叔丁基二甲基硅醚、2-溴乙基叔丁基二甲基硅醚、4-溴丁基叔丁基二甲基硅醚、5-溴戊基叔丁基二甲基硅醚和6-溴己基叔丁基二甲基硅醚中的任一种。

作为优选，脱除boc基团所加的酸选自盐酸、硫酸、有机羧酸、有机磺酸和三氟乙酸中的任意一种。在一优选技术方案中，脱除boc基团所加的酸为三氟乙酸。

本发明还提供一种抑制hsv-1和hsv-2病毒感染和复制的药物组合物，所述组合物包含治疗有效量的一种或多种上述技术方案所述的含有胍基的取代嘧啶衍生物，并包含至少一种可药用辅料。

本发明还提供一种根据上述技术方案所述的含有胍基的取代嘧啶衍生物在制备治疗或预防抑制hsv-1和hsv-2病毒感染和复制的药物中的应用。

作为优选，含有胍基的取代嘧啶衍生物在制备治疗或预防抗单纯疱疹病毒的药物中的应用。

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果在于：

1、本发明提供了含有胍基的取代嘧啶衍生物及其制备方法，并以含有胍基的取代嘧啶衍生物作为抗单纯疱疹病毒的研究对象，全面阐述了其在体外的作用机制及其构效关系，证明了胍基的取代对嘧啶衍生物抗hsv活性的巨大影响，为新型抗hsv药物的理性设计提供了新的结构和思路；

2、本发明首次揭示了含有胍基的取代嘧啶衍生物的作用靶点为病毒表面的包膜糖蛋白gb以及细胞pi3k/akt/mtor信号通路，这与目前临床应用的核苷类药物抑制dna聚合酶的作用机制具有显著差异，可为开发基于新靶标的抗单纯疱疹病毒的药物提供了重要的理论参考。

附图说明

图1是本发明实施例中含有取代嘧啶化合物，当n＝2-6,r为r1、r3、r4为h，r2为och3时的反应流程图；

图2是本发明实施例中含有取代嘧啶化合物，当n＝2-6,r为r1、r2、r3为och3，r4为h时的反应流程图；

图3是本发明实施例中含有取代嘧啶化合物，当n＝2-6,r为r1、r2为och3，r3、r4为h时的反应流程图；

图4是本发明实施例中含有取代嘧啶化合物，当n＝2-6,r为r1、r2为h，r3、r4为och3时的反应流程图；

图5是本发明实施例中含有取代嘧啶化合物，当n＝2-6,r为r1、r2、r3为h，r4为och3时的反应流程图；

图6是本发明实施例中化合物c1的空斑减少试验结果；

图7是本发明实施例中不同浓度的c1对病毒蛋白表达的抑制作用；

图8是本发明化合物c1在不同作用方式下抗hsv-1免疫荧光检测结果；

图9是本发明化合物c1在不同作用方式下抗hsv-2免疫荧光检测结果；

图10是本发明化合物c1在吸附后不同时间段的抗hsv作用结果；

图11是本发明实施例中不同浓度的a0，a1及c1的cpe抑制实验结果；

图12是本发明实施例中化合物a0，a1及c1对hsv抑制的空斑检测结果；

图13是本发明实施例中荧光探针标记细胞器的共聚焦结果；

图14是本发明实施例中化合物c1与细胞器共定位的共聚焦结果；

图15是本发明实施例中化合物c1与细胞器共定位的电子放大图；

图16是本发明实施例中化合物a0与病毒gb蛋白的细胞共定位结果；

图17是本发明实施例中化合物c1与病毒gb蛋白的细胞共定位结果；

图18是本发明实施例中不同浓度c1对hsv-1诱导的膜融合的抑制作用；

图19是本发明实施例中不同浓度c1对hsv-2诱导的膜融合的抑制作用；

图20是本发明实施例化合物a0，a1和c1对病毒诱导的膜融合抑制作用；

图21是本发明实施例化合物c1在hela细胞中对hsv-1吸附过程的影响；

图22是本发明实施例化合物c1在hela细胞中对hsv-1进入过程的影响；

图23是本发明实施例化合物c1在vero细胞中对hsv-1吸附过程的影响；

图24是本发明实施例化合物c1在vero细胞中对hsv-1进入过程的影响；

图25是本发明实施例中磁珠与病毒蛋白之间的结合关系；

图26是本发明实施例中磁珠与病毒蛋白与样品之间的结合关系；

图27是本发明实施例中化合物c1对pi3k/akt/mtor信号通路的影响；

图28是本发明实施例中小鼠体重变化曲线；

图29是本发明实施例中小鼠的生存曲线；

图30是本发明实施例中小鼠肺组织中病毒mrna水平变化；

图31是本发明实施例中小鼠脊髓组织中病毒mrna水平变化；

图32是本发明实施例中小鼠脑组织病理切片；

图33是本发明实施例中小鼠肺组织病理切片。

具体实施方式

为了更清楚详细地介绍本发明实施例所提供的含有胍基的取代嘧啶衍生物、其药物组合物及其制备方法和应用，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

本发明中含有取代嘧啶化合物，当n＝2-6，r为br、oh；r1、r3、r4为h，r2为och3时的反应流程如图1所示。

化合物a2即3-(4，6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丙基胍三氟乙酸盐的制备的合成

i)100ml茄形瓶中加入原料2-羟基-4，6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶1a(600mg，1.13mmol，1eq)，碳酸钾(312mg，2.25mmol，2eq)，以dmf(30ml)为溶剂，室温搅拌1h，加入3-溴丙基叔丁基二甲基硅醚2(427mg，1.69mmol，1.5eq)，80℃反应12h，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，柱层析(pe:ea)纯化，减压蒸馏去除溶剂得黄色固体产物。再以thf(10ml)溶解，加入1m的tbaf/thf(1.90ml，2.29mmol，2eq)溶液，室温搅拌2h，检测反应完毕，柱层析纯化，得黄色固体产物，即化合物a21。

ii)将a21(386mg，0.89mmol，1eq)、n，n＇-双(叔丁氧基羰基)胍11(466mg，1.42mmol，2eq)和三苯基膦(349mg，1.34mmol，1.5eq)加入圆底烧瓶中，再加入无水四氢呋喃(30ml)溶解，冰浴下滴加diad(0.2ml，1.34mmol，1.5eq)无水四氢呋喃溶液，室温搅拌5h，蒸干溶剂，柱层析(pe:ea)纯化，减压去除溶剂，得黄色固体产物479mg，0℃下加入三氟乙酸/二氯甲烷(1:10，30ml)溶液，室温搅拌15h，蒸干溶剂，得红色固体产物化合物a2250mg，收率：58％。¹hnmr(500mhz,dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.82(d,j＝15.9hz,2h)，7.65(d,j＝8.1hz,4h)，7.24(s,1h)，7.06(d,j＝15.9hz,2h)，6.99(d,j＝8.1hz,4h)，4.42(t,j＝5.9hz,2h)，3.79(s,6h)，3.30(t,j＝6.7hz,2h)，2.02–1.94(m,2h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.36，165.08，160.81，156.99，136.59，129.77，128.50，124.00，114.89，111.19，64.12，55.73，38.26，28.42。

iii)化合物a0、a31、a41、a51的合成实验操作流程同化合物a21的合成，步骤中反应原料3-溴丙基叔丁基二甲基硅醚分别改为：2-溴乙基叔丁基二甲基硅醚、4-溴丁基叔丁基二甲基硅醚、5-溴戊基叔丁基二甲基硅醚、6-溴己基叔丁基二甲基硅醚。

iv)化合物a1、a3、a4、a5的合成实验操作流程同化合物a2的合成，制备步骤ii)的反应原料a21分别由a0、a31、a41、a51代替。

化合物a1即2-(4，6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)乙基胍三氟乙酸盐，产率：57％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.82(d，j＝15.9hz，2h)，7.64(d，j＝8.6hz，4h)，7.27(s，1h)，7.06(d，j＝15.9hz，2h)，6.99(d，j＝8.6hz，4h)，4.48(t，j＝4.6hz，2h)，3.78(s，6h)，3.5-3.61(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.44，164.82，160.85，157.11，136.79，129.82，128.44，123.86，114.91，111.39，64.95，55.74，40.65。

化合物a3即4-(4，6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丁基胍三氟乙酸盐，产率：52％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.82(d，j＝15.9hz，2h)，7.65(d，j＝8.7hz，4h)，7.23(s，1h)，7.05(d，j＝16.0hz，2h)，6.99(d，j＝8.7hz，4h)，4.40(t，j＝6.3hz，2h)，3.79(s，6h)，3.19(t，j＝7.0hz，2h)，1.84-1.73(m，2h)，1.69-1.61(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.35，165.19，160.79，136.57，129.77，128.52，124.04，114.88，111.01，66.42，55.73，40.84，26.14，25.79。

化合物a4即5-(4，6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)戊基胍三氟乙酸盐，产率：53％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.80(d，j＝15.9hz，2h)，7.64(d，j＝8.4hz，4h)，7.23(s，1h)，7.04(d，j＝16.0hz，2h)，6.99(d，j＝8.5hz，4h)，4.38(t，j＝6.2hz，2h)，3.78(s，6h)，3.15-3.07(，2h)，1.81-1.72(m，2h)，1.59-1.51(m，2h)，1.50-1.39m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.33，165.24，160.79，156.82，136.53，129.76，128.50，124.04，114.89，110.94，66.77，55.73，41.05，28.64，28.52，23.26。

化合物a5即6-(4，6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)己基胍三氟乙酸盐，产率：53％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢δ7.81(d，j＝15.9hz，2h)，7.64(d，j＝8.7hz，4h)，7.22(s，1h)，7.04(d，j＝15.9hz，2h)，6.98(d，j＝8.7hz，4h)，4.37(t，j＝6.4hz，2h)，3.78(s，6h)，3.09(t，j＝7.0hz，2h)，1.79-1.69(m，2h)，1.53-1.42(m，4h)，1.40-1.32(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.31，165.27，160.77，156.88，136.47，129.74，128.54，124.09，114.87，110.94，66.80，55.73，41.04，28.87，28.83，26.29，25.69。

实施例2

本发明中含有取代嘧啶化合物，当n＝2-6，r为br、oh；r1、r2、r3为och3，r4为h时的反应流程如图2所示。

i)化合物b0、b21、b31、b41、b51的合成实验操作流程同化合物a21的合成，只是原料2-羟基-4，6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶1a由原料2-羟基-4,6-二(3,4,5-三甲氧基苯乙烯基)嘧啶1b替代。

ii)化合物b1、b2、b3、b4、b5的合成实验操作流程同化合物a2的合成。步骤中反应原料a21分别由b0、b21、b31、b41、b51代替。

化合物b1即2-(4，6-二(3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)乙基胍基三氟乙酸盐，产率59％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.85(s，1h)，7.82(s，1h)，7.34(s，1h)，7.22(d，j＝15.9hz，2h)，7.04(s，4h)，4.51(t，j＝5.2hz，2h)，3.85(s，12h)，3.70(s，6h)，3.59(t，j＝5.1hz，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.38，164.92，153.59，139.25，137.35，131.50，125.72，111.65，105.66，65.05，60.61，56.45

化合物b2即3-(4，6-二(3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丙基胍基三氟乙酸盐，产率：58％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.83(d，j＝15.9hz，2h)，7.32(s，1h)，7.21(d，j＝15.9hz，2h)，7.04(s，4h)，4.45(t，j＝6.1hz，2h)，3.85(s，12h)，3.70(s，6h)，3.32(t，j＝6.9hz，2h)，2.05-1.94(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.31，165.16，153.59，139.21，137.20，131.54，125.80，111.43，105.63，64.17，60.60，56.45，38.25，28.41

化合物b3即，4-(4，6-二(3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丁基胍三氟乙酸盐，产率55％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.83(d，j＝15.9hz，2h)，7.30(s，1h)，7.20(d，j＝15.9hz，2h)，7.04(s，4h)，4.43(t，j＝6.2hz，2h)，3.84(s，12h)，3.69(s，6h)，3.20(t，j＝7.0hz，2h)，1.84-1.74(m，2h)，1.72-1.63(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.29，156.89，153.58，139.17，137.15，131.57，125.84，111.29，66.49，60.60，56.44，40.84，26.15，25.80。

化合物b4即，5-(4，6-二(3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)戊基胍三氟乙酸盐，产率50％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.82(d，j＝15.9hz，2h)，7.30(s，1h)，7.20(d，j＝15.9hz，2h)，7.04(s，4h)，4.40(t，j＝6.2hz，2h)，3.85(s，11h)，3.69(d，j＝7.3hz，5h)，3.16-3.11(m，2h)，1.82-1.74(m，2h)，1.57(dt，j＝14.1，7.0hz，2h)，1.53-1.44(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.34，165.28，156.87，153.58，139.17，137.11，131.57，125.88，111.19，105.62，66.87，60.60，56.44，41.06，28.69，28.59，23.32。

化合物b5即，6-(4，6-二(3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)己基胍三氟乙酸盐，产率55％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.82(d，j＝15.9hz，2h)，7.29(s，1h)，7.19(d，j＝15.9hz，2h)，7.04(s，4h)，4.39(t，j＝6.3hz，2h)，3.84(s，12h)，3.69(s，6h)，3.10(t，j＝7.0hz，2h)，1.81-1.71(m，2h)，1.56-1.42(m，4h)，1.41-1.31(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.36，165.27，156.89，153.58，139.16，137.09，131.58，125.89，111.16，105.62，66.89，60.59，56.43，41.04，28.90，28.85，26.30，25.72。

实施例3

本发明中含有取代嘧啶化合物，当n＝2-6，r为br、oh；r1、r2为och3，r3、r4为h时的反应流程如图3所示。

i)化合物c0、c21、c31、c41、c51的合成实验操作流程同化合物a21的合成，只是原料2-羟基-4，6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶1a由原料2-羟基-4，6-二(3，4-二甲氧基苯乙烯基)嘧啶1c替代。

ii)化合物c1、c2、c3、c4、c5的合成实验操作流程同化合物a2的合成。步骤中反应原料a21分别由c0、c21、c31、c41、c51代替。

化合物c1即2-(4，6-二(3，4-二甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)乙基胍三氟乙酸盐，产率：56％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.82(d，j＝15.9hz，2h)，7.33(s，2h)，7.29(s，1h)，7.23(dd，j＝8.3，1.5hz，2h)，7.12(d，j＝15.9hz，2h)，7.01(d，j＝8.4hz，2h)，4.50(t，j＝5.1hz，2h)，3.84(s，6h)，3.80(s，6h)，3.62-3.56(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.54，165.47，164.87，157.16，150.71，149.47，137.17，128.73，124.10，122.41，112.18，111.32，110.40，64.98，55.94。

化合物c2即3-(4，6-二(3，4-二甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丙基胍三氟乙酸盐，产率：56％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.82(d，j＝15.9hz，2h)，7.33(s，2h)，7.29(s，1h)，7.23(dd，j＝8.3，1.5hz，2h)，7.12(d，j＝15.9hz，2h)，7.01(d，j＝8.4hz，2h)，4.50(t，j＝5.1hz，2h)，3.84(s，6h)，3.80(s，6h)，3.62-3.56(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.54，165.47，164.87，157.16，150.71，149.47，137.17，128.73，124.10，122.41，112.18，111.32，110.40，64.98，55.94。

化合物c3即4-(4，6-二(3，4-二甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丁基胍三氟乙酸盐，产率：50％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.82(d，j＝15.9hz，2h)，7.33(s，2h)，7.26-7.20(m，3h)，7.11(d，j＝15.9hz，2h)，7.01(d，j＝8.4hz，2h)，4.42(t，j＝6.2hz，2h)，3.83(s，6h)，3.80(s，6h)，3.20(t，j＝7.0hz，2h)，1.83-1.74(m，2h)，1.67(dt，j＝14.4，7.2hz，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.38，165.23，156.90，150.63，149.45，136.98，128.90，124.32，122.30，112.18，110.91，110.43，66.40，56.01，40.84，26.16，25.82。

化合物c4即5-(4，6-二(3，4-二甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)戊基胍三氟乙酸盐，产率：45％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.82(d，j＝15.9hz，2h)，7.34(s，2h)，7.28-7.21(m，3h)，7.11(d，j＝15.9hz，2h)，7.01(d，j＝8.3hz，2h)，4.40(t，j＝5.9hz，2h)，3.84(s，6h)，3.80(s，6h)，3.14(d，j＝6.7hz，2h)，1.83-1.75(m，2h)，1.61-1.53(m，2h)，1.53-1.44(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.36，165.30，156.91，150.63，149.46，136.94，128.81，124.32，122.26，112.18，110.84，110.49，110.41，66.75，56.06，55.96，41.04，28.72，28.59，23.32。

化合物c5即6-(4，6-二(3，4-二甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)己基胍三氟乙酸盐，产率：56％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.79(d，j＝15.9hz，2h)，7.31(d，j＝1.7hz，2h)，7.21(dd，j＝9.1，2.2hz，3h)，7.09(d，j＝15.9hz，2h)，6.99(d，j＝8.4hz，2h)，4.37(t，j＝6.4hz，2h)，3.82(s，6h)，3.78(s，6h)，3.09(t，j＝7.0hz，2h)，1.78-1.71(m，2h)，1.53-1.41(m，4h)，1.40-1.33(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.33，165.25，156.83，150.60，149.42，136.94，128.77，124.23，122.30，112.14，110.36，66.81，55.98，41.03，28.87，28.82，26.28，25.69。

实施例4

本发明中含有取代嘧啶化合物，当n＝2-6，r为br、oh；r1、r2为h，r3、r4为och3时的反应流程如图4所示。

i)化合物d0、d21、d31、d41、d51的合成实验操作流程同化合物a21的合成，只是原料2-羟基-4，6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶1a由原料2-羟基-4，6-二(3-甲氧基苯乙烯基)嘧啶1d替代。

ii)化合物d1、d2、d3、d4、d5的合成实验操作流程同化合物a2的合成。步骤中反应原料a21分别由d0、d21、d31、d41、d51代替。

化合物d1即2-(4，6-二(3-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)乙基胍三氟乙酸盐，产率：43％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.85(d，j＝16.0hz，2h)，7.38-7.31(m，3h)，7.30-7.22(m，6h)，6.98-6.92(m，2h)，4.50(t，j＝5.1hz，2h)，3.79(s，6h)，3.58(t，j＝5.0hz，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.30，164.89，160.09，157.14，137.25，137.10，130.49，126.63，120.79，115.88，113.01，112.16，65.10，55.64。

化合物d2即3-(4，6-二(3-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丙基胍三氟乙酸盐，产率：45％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.84(d，j＝16.0hz，2h)，7.37-7.31(m，3h)，7.30-7.24(m，5h)，7.23(s，1h)，6.95(d，j＝8.2hz，2h)，4.44(t，j＝5.7hz，2h)，3.79(s，6h)，3.30(t，j＝6.5hz，2h)，2.05-1.95(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.22，165.12，160.09，156.98，137.28，136.95，130.48，126.70，120.75，115.86，112.97，111.94，64.28，55.63，38.24，28.38。

化合物d3即4-(4，6-二(3-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丁基胍三氟乙酸盐，产率：53％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.84(d，j＝15.9hz，2h)，7.37-7.31(m，3h)，7.29-7.24(m，5h)，7.22(s，1h)，6.95(d，j＝8.1hz，2h)，4.41(t，j＝5.7hz，2h)，3.79(d，j＝1.6hz，6h)，3.18(t，j＝6.4hz，2h)，1.83-1.72(m，2h)，1.70-1.61(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.26，165.21，160.10，137.33，136.90，130.44，126.78，120.73，115.84，112.98，111.76，109.99，66.55，55.63，40.81，26.13，25.81。

化合物d4即5-(4，6-二(3-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)戊基胍三氟乙酸盐，产率：50％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ7.84(d，j＝16.0hz，2h)，7.37-7.32(m，3h)，7.28-7.24(m，5h)，7.22(s，1h)，6.98-6.91(m，2h)，4.39(t，j＝6.3hz，2h)，3.78(d，j＝12.1hz，6h)，3.13(d，j＝7.5hz，2h)，1.81-1.74(m，2h)，1.59-1.51(m，2h)，1.51-1.42(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.31，165.19，160.09，156.86，137.32，136.86，130.46，126.79，120.74，115.84，112.95，111.70，66.92，55.63，41.03，28.69，28.54，23.29。

化合物d5即6-(4，6-二(3-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)己基胍三氟乙酸盐，产率：43％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.88(d，j＝15.9hz，2h)，7.32(t，j＝7.9hz，2h)，7.20(d，j＝7.6hz，2h)，7.13(s，2h)，7.06(d，j＝15.9hz，2h)，6.97(s，1h)，6.92(d，j＝8.1hz，2h)，4.49(t，j＝6.6hz，2h)，3.86(s，6h)，3.63(t，j＝6.5hz，2h)，1.93-1.86(m，2h)，1.61-1.49(m，4h)，1.47-1.38(m，2h)，0.89(s，9h)，0.05(s，6h)；¹³cnmr(125mhz，cdcl3)δ164.85，159.91，137.12，129.82，125.84，120.42，115.24，112.67，110.77，67.65，63.21，55.29，32.82，29.01，25.98，25.92，25.67，18.37，-5.25。

实施例5

本发明中含有取代嘧啶化合物，当n＝2-6，r为br、oh；r1、r2、r3为h，r4为och3时的反应流程如图5所示。

i)化合物e0、e21、e31、e41、e51的合成实验操作流程同化合物a21的合成，只是原料2-羟基-4，6-二(4-甲氧基苯乙烯基)嘧啶1a由原料2-羟基-4，6-二(2-甲氧基苯乙烯基)嘧啶1e替代。

ii)化合物e1、e2、e3、e4、e5的合成实验操作流程同化合物a2的合成。步骤中反应原料a21分别由e0、e21、e31、e41、e51代替。

化合物e1即2-(4，6-二(2-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)乙基胍三氟乙酸盐，产率：33％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ8.13(d，j＝16.1hz，2h)，7.72(dd，j＝7.7，1.1hz，2h)，7.40-7.34(m，2h)，7.27(s，1h)，7.23(d，j＝16.1hz，2h)，7.09(d，j＝8.3hz，2h)，7.01(t，j＝7.5hz，2h)，4.48(t，j＝5.0hz，2h)，3.87(s，6h)，3.58(t，j＝4.9hz，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.60，164.85，157.96，157.11，131.79，131.45，128.20，126.48，124.20，121.25，112.46，112.16，65.05，56.08。

化合物e2即3-(4，6-二(2-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丙基胍三氟乙酸盐，产率：30％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&d2o)δ8.11(d，j＝16.1hz，2h)，7.74-7.68(m，2h)，7.40-7.34(m，2h)，7.25(s，1h)，7.21(d，j＝16.1hz，2h)，7.08(d，j＝8.3hz，2h)，7.00(t，j＝7.5hz，2h)，4.41(t，j＝6.0hz，2h)，3.87(s，6h)，3.31(t，j＝6.9hz，2h)，2.02-1.95(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.54，165.08，157.94，156.96，131.69，131.42，128.20，126.56，124.20，121.26，112.14，64.20，56.06，28.34。

化合物e3即4-(4，6-二(2-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)丁基胍三氟乙酸盐，产率：30％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ8.12(d，j＝16.1hz，2h)，7.71(dd，j＝7.7，1.1hz，2h)，7.39-7.33(m，2h)，7.23(s，1h)，7.21(d，j＝16.1hz，2h)，7.07(t，j＝7.8hz，2h)，7.00(t，j＝7.5hz，2h)，4.40(t，j＝6.2hz，2h)，3.87(s，6h)，3.19(t，j＝7.0hz，2h)，1.84-1.74(m，2h)，1.69-1.63(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.51，165.19，157.94，156.88，131.59，131.37，128.17，126.61，124.24，121.24，112.14，112.04，66.46，56.06，26.11，25.80。

化合物e4即5-(4，6-二(2-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)戊基胍三氟乙酸盐，产率：30％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ8.11(d，j＝16.1hz，2h)，7.71(dd，j＝7.7，1.3hz，2h)，7.39-7.33(m，2h)，7.22(s，2h)，7.19(s，1h)，7.08(d，j＝8.2hz，2h)，7.00(t，j＝7.5hz，2h)，4.37(t，j＝6.3hz，2h)，3.87(s，6h)，3.13(t，j＝6.9hz，2h)，1.83-1.70(m，2h)，1.56(dt，j＝14.0，7.1hz，2h)，1.51-1.42(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.49，165.24，157.92，156.86，131.52，131.36，128.14，126.62，124.25，121.24，120.29，112.14，112.00，66.83，56.06，41.04，28.69，28.53，23.30。

化合物e5即6-(4，6-二(2-甲氧基苯乙烯基)嘧啶-2-氧)己基胍三氟乙酸盐，产率：38％。¹hnmr(500mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ8.11(d，j＝16.1hz，2h)，7.71(dd，j＝7.7，1.3hz，2h)，7.39-7.33(m，2h)，7.22(s，2h)，7.19(s，1h)，7.08(d，j＝8.2hz，2h)，7.00(t，j＝7.5hz，2h)，4.37(t，j＝6.3hz，2h)，3.87(s，6h)，3.13(t，j＝6.9hz，2h)，1.83-1.70(m，2h)，1.56(dt，j＝14.0，7.1hz，2h)，1.51-1.42(m，2h)；¹³cnmr(125mhz，dmso-d6&加入一滴d2o用于交换活泼氢)δ165.49，165.24，157.92，156.86，131.52，131.36，128.14，126.62，124.25，121.24，120.29，112.14，112.00，66.83，56.06，41.04，28.69，28.53，23.30。

实施例6取代嘧啶化合物(a、b、c、d及e系列化合物)抗hsv病毒活性其构效关系研究，结果如图6-12，表1-3所示

本发明对获得的25种嘧啶衍生物进行了细胞毒性和抗单纯疱疹病毒(hsv)活性的体外评价，结果表明该系列化合物几乎没有细胞毒性，且大部分的衍生物具有抗单纯疱疹病毒的活性。

编号0系列几乎没有活性(ic50大于80)，说明没有胍基修饰的化合物几乎没有抗hsv的活性。其余的化合物都具有大小不同的抑制活性，说明胍基的修饰能够提高化合物抗hsv的活性。a1-a5都含有胍基修饰，只是含胍基的侧链碳原子数从2到6不等。首先胍基修饰大大提高了化合物的抗hsv活性，但对细胞毒性影响不大。其次，随着含胍基的侧链碳原子数的不断增加其抗hsv活性不断减弱，a5化合物的抗hsv-1和hsv-2的ic50值达到了a1化合物的90-150倍。因此，这说明胍基侧链的延长可能减弱了胍基对于嘧啶衍生物的苯环的影响，或者空间位阻影响了其与病毒蛋白的相互作用。此外，构效关系表明c1的抗病毒活性明显优于a1，这表明两个苯环上分别再引入一个甲氧基，可以进一步增强其抗hsv-1和hsv-2的活性。且表1结果表明甲氧基的引入能够降低嘧啶衍生物的细胞毒性。但是苯环上其余位置引入-och3，其抗hsv-1和hsv-2的活性反而会降低，表明甲氧基取代并不是提高抗hsv活性的主要原因。

对其中活性明显优于阿昔洛韦的衍生物c1进行了系统的细胞水平的活性评价，主要通过cpe抑制、空斑形成、空斑减少等试验进行研究。

本发明发现取代嘧啶类化合物c1选择指数si高达60，且最好的给药方式是将c1与病毒先进行预处理，空斑减少试验证明可能是由于预处理病毒时，化合物c1能够直接与hsv-1和hsv-2病毒颗粒进行直接相互作用导致病毒感染细胞能力下降。间接免疫荧光试验进一步证明了预处理病毒是c1最好的作用方式，同时实验结果显示c1不但能阻止病毒的吸附，还能够在病毒吸附后的阶段起到抑制作用。从rna和蛋白水平上，分析了嘧啶衍生物c1抗hsv病毒的作用。通过定量rt-pcr和westernblot实验表明化合物c1对hsv病毒的mrna和蛋白质的表达都有一定的抑制作用，证明了c1样品的确能够抑制hsv病毒吸附后的一些步骤。

表1嘧啶衍生物对体外细胞毒性及其抗hsv作用

表2对体外细胞毒性和抗病毒作用

表3嘧啶衍生物a系列对体外细胞毒性及其抗hsv作用

实施例7取代嘧啶化合物c1抗hsv病毒作用机制研究，结果如图13-27所示

本发明研究了嘧啶衍生物抗hsv的作用机制，尤其是化合物c1与病毒蛋白的相互作用。由于嘧啶类的嘧啶衍生物本身具有绿色荧光的结构特点，通过共聚焦显微镜证明胍基取代的嘧啶衍生物能够与细胞亚结构存在共定位关系，并推测其通过与囊泡运输系统在细胞内与各细胞器进行相互作用。同时胍基修饰的嘧啶衍生物与hsv病毒的gb蛋白有很好的共定位，这可能与其抗hsv病毒的活性有关。由于病毒对hela和vero细胞的进入机制不同，分别研究了化合物c1对于hsv-1感染hela和vero细胞的影响，发现胍基修饰的嘧啶衍生物c1在两种细胞上对hsv病毒的吸附和进入过程都有抑制作用。gb糖蛋白介导hsv吸附和进入宿主细胞，通过试验证明胍基修饰的嘧啶衍生物能够与gb直接结合，从而阻断hsv病毒的早期感染过程。而pi3k是pi3k/akt/mtor这个信号通路的关键节点，能够激活重要的下游分子akt，磷酸化的akt能进一步刺激mtor，影响mrna的翻译。嘧啶衍生物c1处理后能够显著降低这三种蛋白的磷酸化水平，从而影响pi3k/akt/mtor途径的活化来发挥其抗hsv的活性。总之，上述结果表明化合物c1通过靶向病毒gb蛋白和宿主的pi3k/akt/mtor信号通路来抑制hsv病毒的侵染和复制过程。

实施例9取代嘧啶化合物在体内抗hsv病毒活性，结果如图28-33所示

本发明发现，化合物c1在体内具有显著的抗hsv病毒活性。单纯疱疹病毒滴鼻感染3周龄的balb/c小鼠后，表现出异常的临床症状如倒毛、弓背等，且会引起机体组织的异常，如充血、水肿等，严重会导致死亡，表明我们成功构建了疱疹性肺炎和脑炎的小鼠模型。通过化合物c1的治疗，发现其显著降低小鼠肺组织和脊髓组织中的病毒载量，减轻小鼠肺部和脑部病变，从而提高被病毒感染小鼠的生存率。但是无胍基修饰的化合物a0则不能显著提高hsv感染小鼠的生存率。综上所述，胍基修饰也能显著提高嘧啶化合物的体内抗hsv活性，且胍基修饰的嘧啶化合物c1有潜力开发成新型抗hsv制剂用于疱疹性肺炎和疱疹性脑炎的治疗。