一种从柿子中提取高纯度柿单宁的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于柿单宁制备的技术领域，特别涉及一种从柿子中提取高纯度柿单宁的方法。
【背景技术】
[0002]柿子，柿科植物浆果类水果，原产地在中国，栽培已有一千多年的历史。我国是柿子的原产国，也是世界上柿树栽培面积最大和柿果产量最多的国家。无论是栽培面积还是果实产量，我国都处于世界第一位，远大于世界上其他国家的总和。中国传统医学认为，柿子味甘、涩，性寒，归肺经。《本草纲目》中记载“柿乃脾、肺、血分之果也，其味甘而气平，性涩而能收，故有健脾涩肠，治嗽止血之功。”同时，柿蒂，柿霜，柿叶均可入药。柿果味甘涩、性寒、无毒；柿蒂味涩，性平，入肺、脾、胃、大肠经；有清热去燥、润肺化痰、软坚、止渴生津、健脾、治痢、止血等功能，可以缓解大便干结、痔疮疼痛或出血、干咳、喉痛、高血压等症。所以，柿子是慢性支气管炎、高血压、动脉硬化、内外痔疮患者的天然保健食品。
[0003]柿子中含有大量的单宁，柿单宁又叫鞣酸，是一种多酚的聚合物，具有防晒保湿、抗皱美容、防腐杀菌、预防心血管疾病、吸附金属离子以及和蛋白质相互作用等等功能。
[0004]目前，有许多人研宄从柿子中提取柿单宁的方法，如申请号为201110161337.7的中国发明专利公开的一种从柿子中制取柿单宁的方法，该方法主要工艺过程是将柿子经过清洗筛选、榨汁、加入酵母集中发酵、超声波浸提、浓缩、干燥得到单宁酸产品。但是制备得到的柿单宁纯度低。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种从柿子中提取高纯度柿单宁的方法，该方法工艺简单，易于操作，制备得到的柿单宁纯度高。
[0006]为实现上述目的，本发明采用如下技术方案:
[0007]一种从柿子中提取高纯度柿单宁的方法，包括以下制备步骤:
[0008](I)先将未成熟而色青味涩的鲜柿子洗净，破碎后备用；
[0009](2)加入体积浓度为70?90%的乙醇回流提取3次，每次提取时间为100?150min，每次的提取温度为85?95°C，合并提取液，蒸干，得到柿单宁粗品；
[0010](3)将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比5:1:1:6混合，摇勾，静置分层，平衡分层后，溶液分为上下相，下相作为固定相，上相作为流动相；
[0011](4)取步骤(3)得到的柿单宁粗品溶解于15?20倍体积的流动相中，得到样品溶液；
[0012](5)将固定相以20?25ml/min流速装满色谱分离柱，以590?670rpm转速开启逆流色谱仪主机，将流动相以5?7ml/min流速泵入色谱柱内，待流动相平衡后，取样品溶液通过进样阀进样，然后根据紫外色谱图，在215nm波长下，收集目的组分，分别减压蒸干，乙醇重结晶，得到高纯度柿单宁。
[0013]优选地，本发明步骤(2)中，回流提取时，乙醇第一次加入量为柿子体积的10?12倍，乙醇第二次加入量为柿子体积的8?10倍，乙醇第三次加入量为柿子体积的6?9倍。本发明进行3次回流提取，可以最大限度提取柿单宁成分。
[0014]为保证柿单宁的性能稳定，优选地，本发明步骤(5)中，柱温设定为15?25°C。
[0015]本发明的友谊效果在于:
[0016]1、本发明用乙醇进行3次回流提取，可以最大限度提取柿单宁所需成分。
[0017]2、本发明采用高速逆流色谱法进行分离纯化，所需设备低廉，分析成本低，易于操作，制备得到的产品纯度高、性能稳定。
[0018]3、本发明采用醇提和高速逆流色谱法进行分离纯化工艺，工艺简单，可操作性强。
【具体实施方式】
[0019]以下结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
[0020]实施例1
[0021](I)先将未成熟而色青味涩的鲜柿子洗净，破碎后备用；
[0022](2)加入体积浓度为7%的乙醇回流提取3次，乙醇第一次加入量为柿子体积的12倍，乙醇第二次加入量为柿子体积的10倍，乙醇第三次加入量为柿子体积的9倍每次提取时间为150min，每次的提取温度为85°C，合并提取液，蒸干，得到柿单宁粗品；
[0023](3)将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比5:1:1:6混合，摇匀，静置分层，平衡分层后，溶液分为上下相，下相作为固定相，上相作为流动相；
[0024](4)取步骤(3)得到的柿单宁粗品溶解于15倍体积的流动相中，得到样品溶液；
[0025](5)将固定相以20ml/min流速装满色谱分离柱，并设定柱温为15°C，以590rpm转速开启逆流色谱仪主机，将流动相以5ml/min流速泵入色谱柱内，待流动相平衡后，取样品溶液通过进样阀进样，然后根据紫外色谱图，在215nm波长下，收集目的组分，分别减压蒸干，乙醇重结晶，得到高纯度柿单宁。
[0026]经检测，产品的纯度为95.2%。
[0027]实施例2
[0028](I)先将未成熟而色青味涩的鲜柿子洗净，破碎后备用；
[0029](2)加入体积浓度为75%的乙醇回流提取3次，乙醇第一次加入量为柿子体积的11倍，乙醇第二次加入量为柿子体积的9倍，乙醇第三次加入量为柿子体积的8倍每次提取时间为140min，每次的提取温度为90°C，合并提取液，蒸干，得到柿单宁粗品；
[0030](3)将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比5:1:1:6混合，摇匀，静置分层，平衡分层后，溶液分为上下相，下相作为固定相，上相作为流动相；
[0031](4)取步骤(3)得到的柿单宁粗品溶解于16倍体积的流动相中，得到样品溶液；
[0032](5)将固定相以21ml/min流速装满色谱分离柱，并设定柱温为18°C，以61rpm转速开启逆流色谱仪主机，将流动相以6ml/min流速泵入色谱柱内，待流动相平衡后，取样品溶液通过进样阀进样，然后根据紫外色谱图，在215nm波长下，收集目的组分，分别减压蒸干，乙醇重结晶，得到高纯度柿单宁。
[0033]经检测，产品的纯度为96.5%。
[0034]实施例3
[0035](I)先将未成熟而色青味涩的鲜柿子洗净，破碎后备用；
[0036](2)加入体积浓度为80%的乙醇回流提取3次，乙醇第一次加入量为柿子体积的11倍，乙醇第二次加入量为柿子体积的9倍，乙醇第三次加入量为柿子体积的7倍每次提取时间为125min，每次的提取温度为90°C，合并提取液，蒸干，得到柿单宁粗品；
[0037](3)将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比5:1:1:6混合，摇匀，静置分层，平衡分层后，溶液分为上下相，下相作为固定相，上相作为流动相；
[0038](4)取步骤(3)得到的柿单宁粗品溶解于18倍体积的流动相中，得到样品溶液；
[0039](5)将固定相以23ml/min流速装满色谱分离柱，并设定柱温为20°C，以630rpm转速开启逆流色谱仪主机，将流动相以6ml/min流速泵入色谱柱内，待流动相平衡后，取样品溶液通过进样阀进样，然后根据紫外色谱图，在215nm波长下，收集目的组分，分别减压蒸干，乙醇重结晶，得到高纯度柿单宁。
[0040]经检测，产品的纯度为98.9 %。
[0041]实施例4
[0042](I)先将未成熟而色青味涩的鲜柿子洗净，破碎后备用；
[0043](2)加入体积浓度为85%的乙醇回流提取3次，乙醇第一次加入量为柿子体积的10倍，乙醇第二次加入量为柿子体积的8倍，乙醇第三次加入量为柿子体积的6倍每次提取时间为llOmin，每次的提取温度为95°C，合并提取液，蒸干，得到柿单宁粗品；
[0044](3)将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比5:1:1:6混合，摇匀，静置分层，平衡分层后，溶液分为上下相，下相作为固定相，上相作为流动相；
[0045](4)取步骤(3)得到的柿单宁粗品溶解于19倍体积的流动相中，得到样品溶液；
[0046](5)将固定相以24ml/min流速装满色谱分离柱，并设定柱温为23°C，以650rpm转速开启逆流色谱仪主机，将流动相以7ml/min流速泵入色谱柱内，待流动相平衡后，取样品溶液通过进样阀进样，然后根据紫外色谱图，在215nm波长下，收集目的组分，分别减压蒸干，乙醇重结晶，得到高纯度柿单宁。
[0047]经检测，产品的纯度为94.9 %。
[0048]实施例5
[0049](I)先将未成熟而色青味涩的鲜柿子洗净，破碎后备用；
[0050](2)加入体积浓度为90%的乙醇回流提取3次，乙醇第一次加入量为柿子体积的10倍，乙醇第二次加入量为柿子体积的10倍，乙醇第三次加入量为柿子体积的8倍每次提取时间为lOOmin，每次的提取温度为90°C，合并提取液，蒸干，得到柿单宁粗品；
[0051](3)将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比5:1:1:6混合，摇勾，静置分层，平衡分层后，溶液分为上下相，下相作为固定相，上相作为流动相；
[0052](4)取步骤(3)得到的柿单宁粗品溶解于20倍体积的流动相中，得到样品溶液；
[0053](5)将固定相以25ml/min流速装满色谱分离柱，并设定柱温为25°C，以670rpm转速开启逆流色谱仪主机，将流动相以6ml/min流速泵入色谱柱内，待流动相平衡后，取样品溶液通过进样阀进样，然后根据紫外色谱图，在215nm波长下，收集目的组分，分别减压蒸干，乙醇重结晶，得到高纯度柿单宁。
[0054]经检测，产品的纯度为97.8%。
【主权项】
1.一种从柿子中提取高纯度柿单宁的方法，其特征在于，包括以下制备步骤: (1)先将未成熟而色青味涩的鲜柿子洗净，破碎后备用； (2)加入体积浓度为70?90%的乙醇回流提取3次，每次提取时间为100?150min，每次的提取温度为85?95°C，合并提取液，蒸干，得到柿单宁粗品； (3)将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比5:1:1:6混合，摇匀，静置分层，平衡分层后，溶液分为上下相，下相作为固定相，上相作为流动相； (4)取步骤(3)得到的柿单宁粗品溶解于15?20倍体积的流动相中，得到样品溶液； (5)将固定相以20?25ml/min流速装满色谱分离柱，以590?670rpm转速开启逆流色谱仪主机，将流动相以5?7ml/min流速泵入色谱柱内，待流动相平衡后，取样品溶液通过进样阀进样，然后根据紫外色谱图，在215nm波长下，收集目的组分，分别减压蒸干，乙醇重结晶，得到高纯度柿单宁。
2.根据权利要求1所述的从柿子中提取高纯度柿单宁的方法，其特征在于:步骤(2)中，回流提取时，乙醇第一次加入量为柿子体积的10?12倍，乙醇第二次加入量为柿子体积的8?10倍，乙醇第三次加入量为柿子体积的6?9倍。
3.根据权利要求1所述的从柿子中提取高纯度柿单宁的方法，其特征在于:步骤(5)中，柱温设定为15?25 °C。
【专利摘要】本发明属于柿单宁制备的技术领域，特别涉及一种从柿子中提取高纯度柿单宁的方法，该方法先将柿子洗净，破碎，然后用乙醇回流提取，再以体积比5:1:1:6的正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水作为两相溶剂体系在高速逆流色谱仪上进行液-液色谱分离纯化，制得高纯度柿单宁。本发明方法工艺简单，易于操作，分析成本低，制备得到的柿单宁纯度高。
【IPC分类】C07H1-08, C07H13-08
【公开号】CN104530145
【申请号】CN201410840699
【发明人】刘小峰, 何明茜, 罗知颂, 李京生, 刘二伟
【申请人】桂林得坤生物科技股份有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月30日