糖尿病、心血 管疾病，尤其是高脂血症和动脉粥样硬化所致的冠心病，日益严重威胁着人类的健康，在美 国、欧洲和许多亚洲国家（包括中国），它已成为居民死亡的主要原因。
[0017] 引起动脉粥样硬化、心血管疾病的危险因素相当广泛，其中，高血脂、高血压、糖尿 病、低水平的高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-c)、高 水平的低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein chofesterol，LDL_c)等是主要诱 因。大量研宄显示，氧化应激的增强在动脉粥样硬化的起始阶段起着关键性作用，自由基和 脂质过氧化是其主要原因。
[0018] 一般条件下，抗氧化防御体系可以通过酶（如过氧化物岐化酶和谷胱甘肽过氧化 物酶）和非酶抗氧化剂（如抗氧化维生素、微量元素、辅酶和辅酶因子）清除反应物质。然 而，在一定条件下，内源性防御系统不能防御自身产生的自由基，进而不能保护机体不受损 伤。这就产生了氧化应激，氧化应激是指机体内高活性分子如活性氧簇（R0S)和活性氮 簇（RNS)产生过多或消除减少，从而导致组织损伤。R0S包括超氧阴离子（0 2〇、羟自由基 (0H ?)、过氧化氢（H202)等，RNS包括一氧化氮（NO)、二氧化氮（N02)、过氧亚硝酸基阴离子 (0N0CT)等。在正常状态下机体可产生少量R0S参与正常代谢，同时体内存在清除、抑制自 由基反应的体系，使得过多的自由基被清除或使自由基减少，保持自由基的产生和清除的 平衡；但在某些病理状态下，这一机制遭到破坏，体内自由基产生过多或清除过慢，体内自 由基显著增加。自由基很不稳定，能与体内各种物质发生反应，如引发不饱和脂肪酸发生脂 质过氧化反应，损伤膜的结构，它们还进攻碳水化合物、蛋白质、脂类、核酸等物质，从而导 致细胞或组织损伤和死亡。为了保持自由基的产生和清除之间的平衡，适当的清除自由基 和活性氧是预防生物体多种疾病的最有效的方法之一。
[0019] 脂质氧化也是食品工业和消费者所关心的焦点，因为脂质氧化可以产生许多有毒 气体和毒性物质。尤其，在食品中脂质过氧化反应影响食品的营养价值，可能产生一些有害 物质。空气污染物和烟草中的氧化剂在皮肤里可以引起一些有害的反应，或者被血液循环 所吸收，引起副反应。另外，紫外辐射能促进一系列氧化剂的产生。
[0020] 因此，在过去的十几年里，人类营养学和生物化学研宄的焦点是从食物成分中寻 找抗氧化剂，以便延缓脂质过氧化反应。自由基清除剂就是一类预防性抗氧化剂。因此，抗 氧化剂对防止氧化应激保护机体起到了重要作用。比较好的抗氧化剂被用来保存食品，延 缓因氧化反应而产生的食品变色和变质。合成的抗氧化剂高效，但是有一定的毒性和危害。 在人体营养和生物化学领域中，食物来源的天然抗氧化剂因其高效、毒性小而成为研宄的 热点。人们宁愿选择天然抗氧化剂也不愿选用合成的抗氧化剂。
[0021] 抗氧化剂具有清除自由基和延缓脂质过氧化反应的发生。抗氧化剂近些年来在国 内外发展很快，用途也越来越广。自从Harman提出自由基理论以来，人们认识到人体内氧 化产生的自由基与人的衰老和许多疾病有关。因此抗氧化剂不仅用于含脂肪食品的抗氧 化，而且作为功能因子用于保健食品及化妆品等的开发。抗氧化剂的种类很多，化学合成的 抗氧化剂，如丁羟基茴香醚（BHA)、丁羟甲苯（BHT)、叔丁基对苯二酚（TBHQ)和没食子酸丙 酯（PG)，都被用来防止食品中自由基的形成，从而延缓脂类氧化。然而，合成抗氧化剂由于 其毒副作用，各国政府纷纷控制其添加量，防止过量添加。于是人们把目光逐步转向从各种 植物、动物组织中提取天然抗氧化剂，寻找高效、低毒的抗氧化剂一直是近年来研宄者们关 注的课题，特别是寻找食物来源的天然氧化剂具有非常重要的意义。
[0022] 自从Marcuse首次报道抗氧化多肽后，已经从食物蛋白中分离到一些具有抗氧化 能力的多肽，并且它们的抗氧化活性广泛的被研宄。和酶抗氧化剂相比，抗氧化多肽有一些 优势。那就是在不同的条件下，抗氧化肽结构简单、比较稳定没有毒副作用。而且，它们不 仅具有抗氧化活性，还具有营养价值和功能特性。
[0023] 本发明通过研宄发现，鹰嘴豆豆瓣中含有丰富的多肽类成分，提取鹰嘴豆瓣中多 肽，结合鹰嘴豆丰富的营养成分开发具有抗微生物功能的鹰嘴豆多肽粉是很有现实意义。
【发明内容】
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[0024] 本发明目的在于，提供一种鹰嘴豆多肽部位的制备方法及其应用，该方法中的 原料为鹰嘴豆发芽除牙之后的豆瓣或干燥的有机溶剂提取小分子化合物后的鹰嘴豆渣， 采用粉碎先粉粹脱脂，利用乙醇提取，C18反相柱层析纯化，最后由超滤膜技术制备总多 肽部位，再利用现代喷雾干燥技术或冷冻干燥精制而成的鹰嘴豆多肽粉。该鹰嘴豆多肽 粉主要由分子量为：4002. 5, 4151. 3, 4037. 43Da、4191. 8Da, 4276. 8Da, 4249. 63Da，4346. 2 Da，4426. 8Da，4459. 3Da，4531. 55. 8Da、4614. 15D4a、5100. 29Da、5168. 98Da、5383. 8. 2Da、 5485. 2Da，5876. 8Da，6267. 6Da，6403. IDa，7023. 8Da、7923. 5. 57Da，7934. 21Da 和 7604. 3Da 等20的多种多肽密集共存的部位，该鹰嘴豆多肽部位被验证其抗细菌和真菌活性，不但是 具有广泛的抗微生物活性，而且具有一定的抗氧化和降血糖活性，同时具有增强体液免疫 及全身免疫的功能，富含人体易消化和吸收的纯天然植物来源多肽和蛋白质。该鹰嘴豆多 肽粉部位的特点是既保留了鹰嘴都多肽蛋白质的同时还实现变废为宝和资源充分利用的 目的；该鹰嘴豆多肽粉作为天然抗菌剂、食品添剂或药物，可用于食品和医药行业。
[0025] 本发明所述的一种鹰嘴豆多肽部位的制备方法，该方法中的原料为鹰嘴豆发芽除 牙之后的豆瓣或干燥的有机溶剂提取小分子化合物后的鹰嘴豆渣，具体操作按下列步骤进 行：
[0026] a、取鹰嘴豆发芽除牙之后的豆瓣或干燥的有机溶剂提取小分子化合物后的鹰嘴 豆渣，粉碎后，按料液重量比为1 : 5加入石油醚，在室温下搅拌1一2小时，反复提取3-4 次至未有油脂提取出来为止，抽滤，合并沉淀，自然干燥至未有石油醚溶剂残留为止，得到 脱脂的鹰嘴豆粉；
[0027] b、将步骤a中充分脱脂的鹰嘴豆粉中加入50%乙醇，料液重量比为1 : 5,在室温 下搅拌提取2-3小时，每次提取3-4次，减压抽滤，合并提取液，分离杂物，得到多肽粗提取 溶液备用；
[0028] c、将步骤b中得到的多肽粗提取溶液，利用蒸馏水稀释至乙醇浓度为10% -20%， 稀释的提取溶液，上已用10 % -20 %的乙醇，流速为3毫升/MIN，在UV-280NM下进行洗脱平 衡好的反相C18硅胶柱，并用浓度为50% -80%乙醇洗脱，得到粗多肽部位：
[0029] d、将步骤c得到的粗多肽部位利用旋转蒸发仪浓缩至无乙醇溶液残留后，采用截 留分子量为lKDa的再生纤维素平板膜，浓缩过程中压力0. 15MPa，温度25°C，流速35m/s，浓 缩倍数为5-10倍，得到鹰嘴豆多肽浓缩物，依次经过离心，喷雾干燥或冷冻干燥，过筛，紫 外灭菌，包装，即可得到鹰嘴豆多肽粉。
[0030] 所述方法获得的鹰嘴豆多肽粉在制备抗细菌、抗真菌生物活性的药物中的用途。
[0031] 所述方法获得的鹰嘴豆多肽粉在制备食品添加剂中的用途。
[0032] 本发明所述的一种鹰嘴豆多肽部位的制备方法及其应用，该鹰嘴豆多肽粉的原料 是由鹰嘴豆发芽除牙之后的豆瓣或干燥的有机溶剂提取小分子化合物后的鹰嘴豆渣，结合 多肽类化合物的物理化学性质、结合现代反相柱层析和超滤膜技术工艺制成的多肽密集共 存的粉。通过本发明所述的方法获得的鹰嘴豆多肽部位是来自鹰嘴豆原料中的游离多肽， 与其它制备多肽的方法比较具有尽少使用化学试剂，不需要复杂的提取分离流程，设备简 单，易于放大制备等优点；该鹰嘴豆多肽粉被验证其抗细菌和真菌活性，该鹰嘴豆多肽部位 不但是具有广泛的抗微生物活性，而且具有一定的抗氧化和降血糖活性，同时具有增强体 液免疫及全身免疫的功能，富含人体易消化和吸收的纯天然植物来源多肽和蛋白质，既保 留了鹰嘴都多肽蛋白质的同时还实现变废为宝和资源充分利用。
【附图说明