生产香紫苏醇的方法_3

文档序号:8523894阅读:来源:国知局
少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优 选至少85%,优选至少90%,更优选至少95%,甚至更优选至少98 %同一,性的氨基酸序列 以及与SEQ ID N0:3有至少55%,优选至少60%,优选至少65%,优选至少70%,优选至 少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %,甚至更优选至少 98%同一性的氨基酸序列组成。
[0096]根据另一个特别优选的实施方案,在前述任一实施方案中使用的融合多肽或者 由前述任一实施方案的核酸编码的融合多肽包含与SEQ ID N0:88有至少50%、优选至少 55 %,优选至少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优选至 少85%,优选至少90%,更优选至少95%,最优选至少98 %同一,性的氨基酸序列。根据一 个更优选的实施方案,该融合多肽包含氨基酸序列SEQ ID N0:88。根据一个更加优选的实 施方案,该融合多肽由SEQ ID N0:88组成。
[0097] 根据本发明的又一个特别的实施方案,具有本发明方法任一实施方案中所需的 LPP合酶活性的多肽是这样一种多肽,该多肽包含与SEQ ID N0:36~39 (它们是SEQ ID N0:1的截短形式)中的任一条序列有至少50%同一性的氨基酸序列。最好,所述多肽包含 与SEQ ID N0:36~39中的任一条序列有至少55%,优选至少60%,优选至少65%,优选至 少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %, 最优选至少98%同一性的氨基酸序列。根据一个更优选的实施方案,所述多肽包含SEQ ID N0:36~39中的任一条序列。根据一个更加优选的实施方案,所述多肽由SEQ ID N0:36~ 39中的任一条序列组成。
[0098] 根据本发明的另一个特别的实施方案,具有本发明方法任一实施方案中所需的香 紫苏醇合酶活性的多肽是这样一种多肽,该多肽包含与SEQ ID N0:74 (它是SEQ ID N0:3 的截短形式)有至少50%同一性的氨基酸序列。最好,所述多肽包含与SEQ ID N0:74有至 少55 %,优选至少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优 选至少85%,优选至少90%,更优选至少95%,最优选至少98 %同一性的氨基酸序列。根 据一个更优选的实施方案,所述多肽包含SEQ ID N0:74。根据一个更加优选的实施方案,所 述多肽由SEQ ID N0:74组成。
[0099] 根据另一个特别的实施方案,在前述任一实施方案中使用的融合多肽或者由前述 任一实施方案的核酸编码的融合多肽包含与SEQ ID N0:36~39中的任一条序列有至少 50 %、优选至少55 %,优选至少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至 少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %,甚至更优选至少98 %同一,性的氨 基酸序列。在一个更加优选的实施方案中,其包含SEQ ID N0:36~39中的任一条序列。
[0100] 根据另一个特别的实施方案,在前述任一实施方案中使用的融合多肽或者由前述 任一实施方案的核酸编码的融合多肽包含与SEQ ID N0:74有至少50%、优选至少55%, 优选至少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优选至少 85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %,甚至更优选至少98 %同一,性的氨基酸序列。在一个 更加优选的实施方案中,其包含SEQ ID N0:74。
[0101] 在一个更加优选的实施方案中,在前述任一实施方案中使用的融合多肽或者由前 述任一实施方案的核酸编码的融合多肽由SEQ ID N0:36~39中的任一条序列以及与SEQ ID N0:74有至少50%、优选至少55%,优选至少60%,优选至少65%,优选至少70%,优 选至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %,甚至更优选 至少98%同一性的氨基酸序列组成。或者,在前述任一实施方案中使用的融合多肽或者由 前述任一实施方案的核酸编码的融合多肽由SEQ ID N0:74以及与SEQ ID N0:36~39中 的任一条序列有至少50 %、优选至少55 %,优选至少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %, 优选至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %,甚至更优 选至少98%同一性的氨基酸序列组成。或者,该融合多肽由与SEQ ID N0:36~39中的任 一条序列有至少50 %、优选至少55 %,优选至少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选 至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %,甚至更优选至 少98%同一性的氨基酸序列以及与SEQ ID N0:77有至少50%、优选至少55%,优选至少 60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优选至 少90%,更优选至少95%,甚至更优选至少98%同一性的氨基酸序列组成。在一个最优选 的实施方案中,在前述任一实施方案中使用的融合多肽或者由前述任一实施方案的核酸编 码的融合多肽由SEQ ID NO:36~39中的任一条序列以及SEQ ID NO:74组成。
[0102] 根据又一个实施方案,在前述任一实施方案中使用的编码LPP合酶的核酸包含与 SEQ ID N0:28~31 (它们是SEQ ID N0:4的截短形式)中的任一条序列或其补体有至少 50%同一性的核苷酸序列。最好,所述核酸包含与SEQ ID N0:28~31中的任一条序列或 其补体有至少55 %,优选至少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至 少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %,最优选至少98 %同一性的核苷酸 序列。根据一个更优选的实施方案,所述核酸包含SEQ ID N0:28~31中的任一条序列或 其补体。根据一个更加优选的实施方案,所述核酸由SEQ ID N0:28~31中的任一条序列 或其补体组成。
[0103] 根据本发明的另一个特别的实施方案,在前述任一实施方案中使用的编码香紫苏 醇合酶的核酸包含与SEQ ID N0:73(它是SEQ ID N0:6的截短形式)或其补体有至少50% 同一性的核苷酸序列。最好,所述核酸包含与SEQ ID N0:73或其补体有至少55%,优选至 少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优 选至少90 %,更优选至少95 %,最优选至少98 %同一性的核苷酸序列。根据一个更优选的 实施方案,所述核酸包含SEQ ID N0:73或其补体。根据一个更加优选的实施方案,所述核 酸由SEQ ID N0:73或其补体组成。
[0104] 根据另一个特别的实施方案,在前述任一实施方案中使用的编码融合多肽的核酸 包含与SEQ ID N0:28~31中的任一条序列或其补体有至少50%,优选至少55%,优选至 少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优 选至少90%,更优选至少95%,甚至更优选至少98%同一,性的核苷酸序列。在一个更加优 选的实施方案中,其包含SEQ ID N0:28~31中的任一条核苷酸序列或其补体。
[0105]根据另一个特别的实施方案,在前述任一实施方案中使用的编码融合多肽的核酸 包含与SEQ ID N0:73或其补体有至少50%,优选至少55%,优选至少60%,优选至少65%, 优选至少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少 95%,甚至更优选至少98%同一性的核苷酸序列。在一个更加优选的实施方案中,其包含 SEQ ID N0:73的核苷酸序列或其补体。
[0106] 在一个更加优选的实施方案中,在前述任一实施方案中使用的编码融合多肽的核 酸由SEQ ID N0:28~31中的任一条序列或其补体以及与SEQ ID N0:73或其补体有至少 50 %,优选至少55 %,优选至少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选 至少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %,甚至更优选至少98 %同一性 的核苷酸序列组成。或者,在前述任一实施方案中使用的编码融合多肽的核酸由SEQ ID N0:73或其补体以及与SEQ ID N0:28~31中的任一条序列或其补体有至少50%,优选至 少55 %,优选至少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优 选至少85%,优选至少90%,更优选至少95%,甚至更优选至少98 %同一性的核苷酸序列 组成。或者,该编码融合多肽的核酸由与SEQ ID N0:28~31中的任一条序列或其补体有 至少50 %,优选至少55 %,优选至少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %, 优选至少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %,甚至更优选至少98 %同 一性的核苷酸序列以及与SEQ ID N0:73或其补体有至少50%,优选至少55%,优选至少 60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优选至 少90%,更优选至少95%,甚至更优选至少98%同一性的核苷酸序列组成。在一个最优选 的实施方案中,在前述任一实施方案中使用的编码融合多肽的核酸由SEQ ID NO:73或其补 体以及SEQ ID NO:28~31中的任一条序列或其补体组成。
[0107] 根据另一个优选的实施方案,在前述任一实施方案中使用的该多肽或该核酸源自 快乐鼠尾草(Salvia sclarea)。
[0108] 实施本发明方法的一个重要工具是融合多肽本身。因此,能催化GGPP至香紫苏醇 的转化并包含与SEQ ID NO: 1或SEQ ID N0:2有至少50%同一性的氨基酸序列以及与SEQ ID N0:3有至少50%同一性的氨基酸序列的融合多肽是本发明的另一目的。
[0109] 根据一个优选的实施方案,该融合多肽包含与SEQ ID NO: 1或SEQ ID N0:2有至 少55 %,优选至少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优 选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %,甚至更优选至少98 %同一,性的氨基酸序列。 根据一个更优选的实施方案,该融合多肽包含氨基酸序列SEQ ID N0:1或SEQ ID N0:2。
[0110] 根据另一个优选的实施方案,该融合多肽包含与SEQ ID NO: 3有至少55%,优选至 少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优 选至少90%,更优选至少95%,甚至更优选至少98%同一,性的氨基酸序列。根据一个更优 选的实施方案,所述融合多肽包含氨基酸序列SEQ ID N0:3。
[0111] 在一个更加有效的实施方案中,该融合多肽由SEQ ID NO: 1或SEQ ID N0:2以及与 SEQ ID NO:3有至少50%,优选至少55%,优选至少60%,优选至少65%,优选至少70%, 优选至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %,甚至更优 选至少98%同一性的氨基酸序列组成。或者,该融合多肽由SEQ ID N0:3以及与SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2有至少50%,优选至少55%,优选至少60%,优选至少65%,优选至 少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %, 甚至更优选至少98%同一性的氨基酸序列组成。在一个最优选的实施方案中,该融合多肽 由 SEQ ID N0:1 或 SEQ ID N0:2 以及 SEQ ID N0:3 组成。
[0112] 根据本发明的一个特别的实施方案,该融合多肽包含SEQ ID NO: 1的截短形式的 序列(例如SEQ ID N0:36~39)和/或SEQ ID N0:3的截短形式的序列(例如SEQ ID N0:74)。
[0113] 因此,根据本发明的一个特别的实施方案,该融合多肽包含与SEQ ID N0:36~ 39中的任一条序列有至少50%、优选至少55%,优选至少60%,优选至少65%,优选至少 70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %,甚 至更优选至少98%同一性的氨基酸序列。在一个更加优选的实施方案中,其包含SEQ ID NO:36~39中的任一条序列。
[0114] 根据另一个特别的实施方案,该融合多肽包含与SEQ ID N0:74有至少50%、优选 至少55 %,优选至少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %, 优选至少85%,优选至少90%,更优选至少95%,甚至更优选至少98%同一,性的氨基酸序 列。在一个更加优选的实施方案中,其包含SEQ ID N0:74。
[0115] 在一个更加优选的实施方案中,该融合多肽由SEQ ID NO: 36~39中的任一条序 列以及与SEQ ID N0:74有至少50%、优选至少55%,优选至少60%,优选至少65%,优选至 少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选至少95 %, 甚至更优选至少98%同一性的氨基酸序列组成。或者,该融合多肽由SEQ ID NO:74以及与 SEQ ID NO:36~39中的任一条序列有至少50%、优选至少55%,优选至少60%,优选至少 65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至少80 %,优选至少85 %,优选至少90 %,更优选 至少95%,甚至更优选至少98%同一性的氨基酸序列组成。在一个最优选的实施方案中, 该融合多肽由SEQ ID NO:36~39中的任一条序列以及SEQ ID NO:74组成。
[0116] 根据另一个特别优选的实施方案,本发明的融合多肽包含与SEQ ID NO: 88有至少 50 %、优选至少55 %,优选至少60 %,优选至少65 %,优选至少70 %,优选至少75 %,优选至 少80%,优选至少85%,优选至少90%,更优选至少95%,最优选至少98%同一性的氨基酸 序列。根据一个更优选的实施方案,该融合多肽包含氨基酸序列SEQ ID N0:88。根据一个 更加优选的实施方案,该融合多肽由SEQ ID N0:88组成。
[0117] 在此使用的多肽指的是包含于此标明的氨基酸序列的多肽或肽片段,以及截短的 或变体多肽,条件是它们要保持如上定义的它们的活性,并且它们与SEQ ID NO: 1、SEQ ID N0:2或SEQ ID N0:3的相应片段有至少所定义百分比的同一性。
[0118] 变体多肽的例子为天然产生的蛋白质,其由选择性mRNA拼接产生,或者由在此描 述的多肽的蛋白酶剪切产生。归因于蛋白水解的变体例如包括:由于从本发明多肽上一个 或多个末端氨基酸的蛋白水解移除而产生的在不同类型宿主细胞中表达时N末端或C末端 的差异。如此后描述的由本发明的核酸的天然或人工突变获得的核酸所编码的多肽同样包 括在本发明之内。
[0119] 如上所述,本发明的编码融合多肽的核酸是在体内实施该方法时修饰将要使用的 非人宿主生物体或细胞的有用工具。
[0120] 因此,编码上述任一实施方案的融合多肽的核酸也是本发明的一个目的。
[0121] 根据一个优选的实施方案,该核酸包含与SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5或它们的补 体有至少55 %,优选至少60 %,优
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