（Candida albicans)、粘性丝抱酵母（Trichosporon mucoides)、季也蒙假丝酵母（Candida guillermondii)。提起装置的顶部膜，并且将lmL的种菌添加（通过吸移管）至底部膜上 的培养基中。替换顶部膜，并且通过使用3M PETRIFILM平板涂布器（3M PETRIFILM Flat Spreader)施加向下的压力来使所述样本均勾地涂布到圆形开口的边缘。针对每个样本制 备两个薄膜培养装置。将经接种的装置在25°C下温育60至72小时。
[0195] 在48小时以及在温育期结束（60-72小时的时间点）时通过目视检查对每一样本 的菌落进行计数。菌落的颜色是白色或蓝色。在每一时间点，对各个装置的cfu计数取平 均值，并且所述平均计数值被用来计算原始未稀释样本中每毫升的菌落形成单位数（Cfu/ mL)的数量。将在48小时时间点时针对每一样本所计算的cfu/mL值和菌落颜色（白色或 蓝色），连同针对实例3-6获得的结果一起记录在表15中。
[0196]实例 3
[0197] 按照如实例2所述的相同实验条件和过程，不同的是薄膜培养装置是使用培养基 配方F (表7中所述）而非培养基配方E (表6中所述）制备的。
[0198]实例 4
[0199] 按照如实例2所述的相同实验条件和过程，不同的是薄膜培养装置是使用培养基 配方G (表8中所述）而非培养基配方E (表6中所述）制备的。
[0200]实例 5
[0201] 按照如实例2所述的相同实验条件和过程，不同的是薄膜培养装置是使用培养基 配方H(表9中所述）而非培养基配方E (表6中所述）制备的。
[0202] 实例 6
[0203] 按照如实例2所述的相同实验条件和过程，不同的是薄膜培养装置是使用培养基 配方1(表10中所述）而非培养基配方E (表6中所述）制备的。
[0204]实例 7
[0205] 按照如实例2所述的相同实验条件和过程，不同的是薄膜培养装置是使用培养基 配方J(表11中所述）而非培养基配方E (表6中所述）制备的。
[0206]表 15.
[0208]实例 8
[0209]制备如实例2所述的薄膜培养装置，但是有两个不同点。第一，薄膜培养装置是使 用培养基配方H(表9中所述）而非培养基配方E(表6中所述）制备的。第二，装置的薄 膜覆盖片涂覆有指示剂涂层配方A，而非指示剂涂层配方B。
[0210]用单种酵母或霉菌样本接种薄膜培养装置，该酵母或霉菌样本选自拟青霉属物种 (Paecilomyces spp.)、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)、灰霉菌属物种（Botrytis spp.)、异常汉逊酵母（Hansenuela anomala)、白假丝酵母（Candida albicans)、产黄青 霉（Penicillium chrysogenum)、黑曲霉（Aspergillus niger)。提起装置的顶部膜，并且 将lmL的种菌添加（通过吸移管）至底部膜上的培养基中。替换顶部膜，并且通过使用3M PETRIFILM平板涂布器（3M PETRIFILM Flat Spreader)施加向下的压力来使样本均匀地涂 布到圆形开口的边缘。针对每个样本制备两个薄膜培养装置。将经接种的装置在25°C下温 育48至60小时。
[0211] 在48小时或60小时的时间点处通过目视检查对每一样本的菌落进行计数。对各 个装置的cfu计数取平均值，并且所述平均计数值被用来计算原始未稀释样本中每毫升的 菌落形成单位数（cfu/mL)的数量。在表16和表17中，示出了针对每一样本在48小时或 60小时的时间点处所计算的cfu/mL值。
[0212] 实例 9
[0213] 按照如实例8所述的相同实验条件和过程，不同的是装置的薄膜覆盖片涂覆有指 示剂涂层配方B，而非指示剂涂层配方A。结果示于表16和表17。
[0214] 实例 10
[0215] 按照如实例8所述的相同实验条件和过程，不同的是装置的薄膜覆盖片涂覆有指 示剂涂层配方C，而非指示剂涂层配方A。结果示于表16和表17。
[0216]表16.淵育48小时后的菌落计数
[0218]表17.温育48小时或60小时（按照指定）后的菌落计数。
[0220] (a)温育48小时后计数的菌落。
[0221] (b)温育60小时后计数的菌落。
[0222]实例 11
[0223]制备如在实例8中所述的相同的薄膜培养装置，不同的是装置的薄膜覆盖片涂覆 有指示剂涂层配方D，而非指示剂涂层配方A。
[0224] 选择了六种食物进行测试（玉米谷粒、胡萝卜块、番茄酱、青椒酱、肉酱意粉、以及 调味鸡粉）。对每种食物进行单独测试。将食物样本的llg部分添加至包含99mL的0. 1% 蛋白胨水的塑料富集袋（plastic enrichment bag)中，并且摇动该塑料富集袋。将食物样 本各自用〇. 1 %蛋白胨水逐级稀释以获得多种浓度，该浓度提供对在薄膜培养装置的计数 范围内的菌落形成单位数（cfu)的计数（每装置约15-lOOcfu)。通过提升透明膜覆盖片， 将lmL的经稀释的样本吸移到经涂覆的底部膜的中心，并且替换覆盖片，来接种薄膜装置。 通过使用3M PETRIFILM平板涂布器（3M PETRIFILM Flat Spreader)施加向下的压力来使 样本均匀地涂布到圆形开口的边缘。针对每个样本制备两个薄膜培养装置。将经接种的装 置在25°C下温育60至72小时。
[0225] 在48小时以及在温育期结束（60-72小时的时间点）时通过目视检查来对每一样 本的酵母和霉菌菌落的总数进行计数。在每一时间点，对各个装置的cfu计数取平均值，并 且所述平均计数值被用来计算原始未稀释样本中每毫升的菌落形成单位数（cfu/mL)的数 量。以如针对薄膜培养装置所述的相同方式对参照DRBC平板上的菌落进行计数。在48小 时的时间点处针对每一样本所计算的cfu/mL值示于表18中。对DRBC参照平板的cfu计 数是在温育5天后进行的。
[0226]表 18.
[0228] 本文引用的所有专利、专利申请、出版物和电子文献的全部公开内容以引用方式 并入。在本专利申请的公开内容和以引用方式并入本文的任何文件的公开内容之间存在任 何矛盾的情况下，应以本专利申请的公开内容为准。给出上述详细说明及实例仅为清楚地 理解本发明。这些说明和实例不应被理解成对本发明进行不必要的限制。而且，本发明并 不局限于本文所显示及所描述的具体细节，本发明的各种变化对于本领域技术人员来说是 显而易见的，这些变化都包括在本发明由权利要求书所限定的范围内。
[0229] 所有的标题是为了阅读者方便，而不应该被用于限制该标题后面的正文的含义， 除非是这么规定的。
[0230] 在不脱离本发明的实质和范围的前提下，可以进行各种修改。这些和其它实施例 均在以下权利要求书的范围内。
【主权项】
1. 一种培养装置，所述培养装置包括： 包含自支承基材的主体，所述基材具有第一主表面和第二主表面； 第一粘合剂组合物，所述第一粘合剂组合物设置在所述基材的所述第一主表面的一部 分上； 基本上干燥的、冷水可溶的第一水凝胶形成组合物，所述第一水凝胶形成组合物附着 到所述第一粘合剂组合物；和 多种指示剂，所述多种指示剂包括： 用于检测不同糖苷酶酶活的三种指示剂； 用于检测烷基酯酶酶活的指示剂； 用于检测磷酸酶酶活的指示剂； 其中所述多种指示剂中的每一种包含可检测的报告基团。2. 根据权利要求1所述的培养装置，其还包括附接到主体构件的覆盖片。3. 根据权利要求2所述的培养装置，其中所述覆盖片包括第一主表面，所述第一主表 面面向所述主体构件；其中所述培养装置还包括设置在所述覆盖片的所述第一主表面的一 部分上的第二粘合剂组合物，以及基本上干燥的、冷水可溶的第二水凝胶形成组合物，所述 第二水凝胶形成组合物附着到所述第二粘合剂组合物。4. 根据前述权利要求中任一项所述的培养装置，其中所述多种指示剂中的至少一种设 置在所述第一粘合剂组合物、所述第二粘合剂组合物、所述第一水凝胶形成组合物、和/或 所述第二水凝胶形成组合物中。5. 根据权利要求4所述的培养装置，其中所述多种指示剂中的至少三种设置在所述第 一粘合剂组合物和/或所述第二粘合剂组合物中。6. 根据前述权利要求中任一项所述的培养装置，其还包括设置在所述基材和所述第一 水凝胶形成组合物之间的透气膜。7. 根据前述权利要求中任一项所述的培养装置，其中所述用于检测不同糖苷酶酶活的 至少三种指示剂包括用于检测a-葡糖苷酶酶活的化合物、用于检测0-葡糖苷酶酶活的 化合物、以及用于检测半乳糖苷酶酶活的化合物。8. 根据前述权利要求中任一项所述的培养装置，其中所述用于检测不同糖苷酶酶活 的至少三种指示剂包括5-溴-4-氯-3-吲哚-0 -D-吡喃半乳糖苷、5-溴-4-氯-3-吲 哚-a-D-吡喃葡萄糖苷、以及5-溴-4-氯-3-吲哚-0 -D-吡喃葡萄糖苷。9. 根据前述权利要求中任一项所述的培养装置，其中所述用于检测烷基酯酶酶活的指 示剂包括3-吲哚乙酸酯。10. 根据前述权利要求中任一项所述的培养装置，其中所述用于检测磷酸酶酶活的指 不剂包括5_漠_4_氣_3_H引噪憐酸盐。11. 根据前述权利要求中任一项所述的培养装置，其还包括具有孔的水不溶性的隔离 物，所述隔离物附接到所述主体构件或所述覆盖片，并且整个所述孔定位在所述主体构件 和所述覆盖片之间。12. 根据前述权利要求中任一项所述的培养装置，其还包括设置在所述主体构件和所 述覆盖片之间的预定体积的含水液体，其中所述含水液体和胶凝剂形成水凝胶。13. 根据前述权利要求中任一项所述的培养装置，其中所述第一水凝胶形成组合物或 第二水凝胶形成组合物还包含用于使酵母或霉菌微生物生长的至少一种营养物质。14. 根据权利要求13所述的培养装置，其中所述至少一种营养物质包括麦芽提取物。15. 根据权利要求13或权利要求14所述的培养装置，其中所述至少一种营养物质选 自：肉胃蛋白酶消化物、酵母提取物、右旋糖、磷酸钾、柠檬酸铁铵、硫酸镁、氯化锰、碳酸钠、 硫酸锌、或者前述营养物质中任意两种或更多种的组合。16. 根据从属于权利要求10的权利要求11所述的培养装置，其中所述隔离物包括限定 生长区域和厚度尺寸的周边，其中所述厚度尺寸被选择成阻止水凝胶和所述覆盖片在所述 生长区域中的接触。17. -种检测样本中的酵母和霉菌的方法，所述方法包括： 使样本和含水液体与设置在根据权利要求1至18中任一项所述的培养装置的所述第 一粘合剂组合物或第二粘合剂组合物上的所述胶凝剂接触，以形成经接种的培养装置； 将所述经接种的培养装置温育一段时间；以及 检测所述培养装置中的酵母或霉菌菌落。18. 根据权利要求17所述的方法，其中使样本与设置在所述培养装置的所述第一粘合 剂组合物或第二粘合剂组合物上的所述胶凝剂接触包括将所述样本放置成与所述至少一 种营养物质流体连通。19. 根据权利要求17或权利要求18所述的方法，其中将所述经接种的培养装置温育一 段时间包括将所述经接种的培养装置温育至多约72小时。20. 根据权利要求17至19中任一项所述的方法，该方法还包括在温育所述经接种的培 养装置之后，对存在于所述经接种的培养装置中的酵母或霉菌菌落进行计数。
【专利摘要】本发明提供了一种用于检测样本中的酵母和霉菌微生物的薄膜培养装置。该培养装置包括含有自支承基材的主体，所述基材具有第一主表面和第二主表面；第一粘合剂组合物，所述第一粘合剂组合物设置在所述基材的所述第一主表面的一部分上；基本上干燥的、冷水可溶的第一水凝胶形成组合物，所述第一水凝胶形成组合物附着到所述第一粘合剂组合物；以及多种指示剂。所述多种指示剂包括：用于检测不同糖苷酶酶活的三种指示剂、用于检测烷基酯酶酶活的指示剂、以及用于检测磷酸酶酶活的指示剂，其中所述多种指示剂中的每一种包含可检测的报告基团。本发明还提供了使用所述培养装置的方法。
【IPC分类】C12M1/12, C12M1/00, G01N33/52, C12Q1/04
【公开号】CN104968778
【申请号】CN201480007414
【发明人】塞拉嘉·常德拉帕蒂, 特拉·M·诺德比
【申请人】3M创新有限公司
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2014年2月4日
【公告号】CA2900089A1, EP2951279A1, US8921067, US20140220610, WO2014121243A1