从沙煲暗罗中分离生物碱类化合物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然植物有效成分的分离技术领域，具体涉及一种从沙煲暗罗中分离 生物碱类化合物的方法。
【背景技术】
[0002] 沙M暗罗（Polyalthiaoblique)是番蒸枝科（Annonaceae)暗罗属植物。暗罗属 植物全世界约120种，主要分布于东半球的热带及亚热带地区，包括马来西亚、菲律宾、印 度、斯里兰卡等地区。在我国，暗罗属植物有17种，主要分布于热带及亚热带地区，包括云 南、广东、广西，海南及台湾，其中沙煲暗罗为我国特有种，仅分布于海南。
[0003] 汪刘凯，《海南师范大学》，2014年，公开了沙煲暗罗枝与叶的化学成分及药理活性 研究，该文献采用的分离方法如下：将干燥的沙煲暗罗枝与叶粉碎后，用乙醇浸泡、回流提 取、减压蒸馏得到乙醇总浸膏；然后将乙醇总浸膏均匀分散于蒸馏水中，依次用石油醚、乙 酸乙酯进行萃取，得到石油醚部位浸膏和乙酸乙酯部位浸膏；然后分别从石油醚部位浸膏 和乙酸乙酯部位浸膏中分离得到30种化合物。
[0004] 其中，四种生物碱类化合物(化合物14~16、30)是从乙酸乙酯部位浸膏中分离得 至IJ，以14kg的沙煲暗罗枝与叶计，分离出的化合物14~16、30分别为5. 5mg、7. 2mg、4.Omg 以及3.Omg。
[0005] 上述分离方法的不足在于：（1)分离得到的化合物类型没有固定规律，不具备系 统性；（2)重复劳动量大，耗时长，溶剂消耗较大；（3)分离得到的化合物量较少，造成浪费。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于解决上述问题，提供一种从沙煲暗罗中分离生物碱类化合物的 方法。
[0007] 实现本发明上述目的的技术方案是：一种从沙煲暗罗中分离生物碱类化合物的方 法，具有以下步骤： ① 将沙煲暗罗枝与叶用乙醇回流提取，并依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，得到石 油醚部位浸膏和乙酸乙酯部位浸膏； ② 将步骤①中得到的石油醚部位浸膏采用硅胶柱色谱分离，采用石油醚-乙酸乙酯进 行梯度洗脱，收集、浓缩、合并相同流分； 同时，将步骤①中得到的乙酸乙酯部位浸膏采用硅胶柱色谱分离，采用石油醚-乙酸 乙酯进行梯度洗脱，收集、浓缩、合并相同流分； ③ 将步骤②中石油醚部位浸膏采用石油醚：乙酸乙酯=4 : 1得到的流分与乙酸乙酯 部位浸膏采用石油醚：乙酸乙酯=4 : 1得到的流分再进行合并，然后采用SephadexLH-20 进行分离，再通过正相硅胶、薄层色谱走板得到生物碱类化合物。
[0008] 上述步骤③中SephadexLH-20分离使用的溶剂体系为氯仿：甲醇=1 : 2;正相 硅胶和薄层色谱走板使用的溶剂体系为氯仿：乙酸乙酯=4 : 1或者石油醚：乙酸乙酯 =4 : 1或者氯仿：甲醇=15 : 1。
[0009] 本发明具有的积极效果：本发明的方法一方面能够对化合物进行系统分离，从而 得到相近分子量的同一类型化合物；另一方面还能够富集得到更多量的目标化合物，避免 了目标化合物的浪费。
【具体实施方式】
[0010] (实施例1) 本实施例的从沙煲暗罗中分离生物碱类化合物的方法具有以下步骤： ①将14kg自然风干的沙煲暗罗枝和叶粉碎后，用体积分数为95%的乙醇浸泡，回流提 取4次，每次7天，将收集到的回流液合并、减压蒸馏，得到1143g的乙醇总浸膏1143g，然后 将上述乙醇总浸膏均匀分散于1143g的蒸馏水中，依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，反 复进行萃取4次，将得到的萃取液合并、减压蒸馏，分别得到760g石油醚部位浸膏和180g 乙酸乙酯部位浸膏。
[0011] ②将步骤①中得到的760g石油醚部位浸膏与等量的硅胶搅拌均匀，装柱，采用硅 胶柱色谱分离，采用石油醚-乙酸乙酯溶剂体系，按照100 : 0~0 : 100 (V/V)的梯度进 行洗脱，每lOOOrnL收集流分，浓缩流分，通过TLC检测，合并相同流分。
[0012] 同时，将步骤①中得到的180g乙酸乙酯部位浸膏与等量的硅胶搅拌均匀，装柱， 采用硅胶柱色谱分离，采用石油醚-乙酸乙酯溶剂体系，按照100 : 0~0 : 100 (V/V)的 梯度进行洗脱，每500mL收集流分，浓缩流分，通过TLC检测，合并相同流分。
[0013] ③将步骤②中石油醚部位浸膏采用石油醚：乙酸乙酯=4 : 1得到的流分与乙酸 乙酯部位浸膏采用石油醚：乙酸乙酯=4 : 1得到的流分再进行合并，然后通过S印hadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析(其溶剂体系为氯仿：甲醇=1 : 2)，再通过正相硅胶和薄层色谱 走板进行分离（其溶剂体系为氯仿：乙酸乙酯=4 : 1或者石油醚：乙酸乙酯=5 : 1或者 氯仿：甲醇=20 : 1)，得到生物碱类化合物1、11、111、1￥，其重量分别为171^、211^、8 1^、 12mg〇
[0014] 〇
【主权项】
1. 一种从沙煲暗罗中分离生物碱类化合物的方法，具有以下步骤： ① 将沙煲暗罗枝与叶用乙醇回流提取，并依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，得到石 油醚部位浸膏和乙酸乙酯部位浸膏； ② 将步骤①中得到的石油醚部位浸膏采用硅胶柱色谱分离，采用石油醚-乙酸乙酯进 行梯度洗脱，收集、浓缩、合并相同流分； 同时，将步骤①中得到的乙酸乙酯部位浸膏采用硅胶柱色谱分离，采用石油醚-乙酸 乙酯进行梯度洗脱，收集、浓缩、合并相同流分； 其特征在于： ③ 将步骤②中石油醚部位浸膏采用石油醚：乙酸乙酯=4 : 1得到的流分与乙酸乙酯 部位浸膏采用石油醚：乙酸乙酯=4 : 1得到的流分再进行合并，然后采用Sephadex LH-20 进行分离，再通过正相硅胶、薄层色谱走板得到生物碱类化合物。2. 根据权利要求1所述的从沙煲暗罗中分离生物碱类化合物的方法，其特征在于：步 骤③中Sephadex LH-20分离使用的溶剂体系为氯仿：甲醇=1 : 2;正相硅胶和薄层色谱 走板使用的溶剂体系为氯仿：乙酸乙酯=4 : 1或者石油醚：乙酸乙酯=4 : 1或者氯仿： 甲醇=15 : 1。
【专利摘要】本发明公开了一种从沙煲暗罗中分离生物碱类化合物的方法，具有以下步骤：①将沙煲暗罗枝与叶用乙醇回流提取，并依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，得到石油醚部位浸膏和乙酸乙酯部位浸膏；②分别对石油醚部位浸膏和乙酸乙酯部位浸膏采用硅胶柱色谱分离，采用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，收集、浓缩、合并相同流分；③将石油醚部位浸膏和乙酸乙酯部位浸膏采用石油醚∶乙酸乙酯=4∶1得到的流分再进行合并，然后采用Sephadex？LH-20进行分离，再通过正相硅胶、薄层色谱走板得到生物碱类化合物。本发明的方法一方面能够对化合物进行系统分离，从而得到相近分子量的同一类型化合物；另一方面还能够富集得到更多量的生物碱类化合物。
【IPC分类】C07D221/16
【公开号】CN105037267
【申请号】CN201510367788
【发明人】宋小平, 陈光英, 韩长日, 邵泰明, 吴梨君, 李小宝
【申请人】海南师范大学, 海南科技职业学院
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年6月29日