胨20 g/L，pH6.8;配制 固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0021] 培养液成份为：葡萄糖44 g/L，木糖8g/L，玉米胚芽粉12 g/L，酵母提取物5 g/L， (NH4) 2H P04 15 g/L，KH2P0 4 7.5 g/L. MgS04 .7H20 0.8 g/L，NaCl 0.1 g/L; pH6.8。
[0022] 湿酵母细胞制备过程如下：近平滑假丝酵母ATCC 20008经斜面、摇瓶培养，得到 种子液。5L发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至30°C，将近平滑假丝酵母 种子液接种至发酵罐，接种比例为6. 5%，通气比为0. 7VAV分钟），30°C培养47小时，用过 滤式离心机离心得到湿酵母细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0023] 生物催化转化：5L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 6,加入底 物4-氯苯甲酰乙酸甲酯，使浓度为90 g/L，麦芽浸膏22 g，平平加0 (PerogolO, 15个单 位的氧乙烯与油醇的缩合物）20g/L，木糖50g/L、蔗糖25g/L、异丙醇5%V/V(体积浓度）， 121°C高压灭菌30分钟；冷却至30°C时，加入湿酵母细胞使浓度为92g/L，通气比为0. 16V/ (V分钟)，进行生物催化反应，反应时间为82小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取 反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-3-(4-氯苯基）-3-羟基丙酸甲酯，反应转化率98 %， 产品收率96 %，对映体过量率99 %。
[0024] 实施例3 种子培养基成份为：酵母提取物10 g/L，葡萄糖20 g/L，蛋白胨20 g/L，pH6.8;配制 固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0025] 培养液成份为：葡萄糖40 g/L，木糖7. 5g/L，玉米胚芽粉11 g/L，酵母提取物 4. 5 g/L, (NH4) 2H P04 13 g/L, KH2P0 4 7 g/L. MgS04 . 7H20 0. 75 g/L, NaCl 0. 09 g/ L; pH6. 8。
[0026] 湿酵母细胞制备过程如下：近平滑假丝酵母ATCC 20008经斜面、摇瓶培养，得到 种子液。10L发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至30°C，将近平滑假丝酵母 种子液接种至发酵罐，接种比例为6. 3 %，通气比为0. 6VA V分钟），30 °C培养48小时，用过 滤式离心机离心得到湿酵母细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0027] 生物催化转化：10L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 6,加入 底物 4-氯苯甲酰乙酸甲酯，使浓度为85g/L，麦芽浸膏22 g，平平加0 (PerogolO, 15个 单位的氧乙烯与油醇的缩合物）19. 5g/L，木糖48g/L、蔗糖27g/L、异丙醇5. 5%V/V(体积浓 度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至30°C时，加入湿酵母细胞使浓度为91g/L，通气比为 0. 16V/ (V分钟），进行生物催化反应，反应时间为80小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸 乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-3-(4-氯苯基）-3_羟基丙酸甲酯，反应转 化率98. 5%，产品收率96. 5%，对映体过量率99%。
[0028] 实施例4 种子培养基成份为：酵母提取物10 g/L，葡萄糖20 g/L，蛋白胨20 g/L，pH6.8;配制 固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0029] 培养液成份为：葡萄糖42 g/L，木糖8g/L，玉米胚芽粉12 g/L，酵母提取物5 g/ L, (NH4) 2H P04 15 g/L, KH2P0 4 7.5 g/L. MgS04 . 7H20 0.75 g/L, NaCl 0.1 g/L; pH6. 8〇
[0030] 湿酵母细胞制备过程如下：近平滑假丝酵母ATCC 20008经斜面、摇瓶培养，得到 种子液。10L发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至29°C，将近平滑假丝酵母 种子液接种至发酵罐，接种比例为6. 5%，通气比为0. 7VAV分钟），29°C培养45小时，用过 滤式离心机离心得到湿酵母细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0031] 生物催化转化：20L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 6,加入底 物4-氯苯甲酰乙酸甲酯，使浓度为86 g/L，麦芽浸膏22 g，平平加0 (PerogolO, 15个单 位的氧乙烯与油醇的缩合物）20g/L，木糖49g/L、蔗糖26g/L、异丙醇6%V/V(体积浓度）， 121°C高压灭菌30分钟；冷却至29°C时，加入湿酵母细胞使浓度为91g/L，通气比为0. 15V/ (V分钟)，进行生物催化反应，反应时间为81小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取 反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-3-(4-氯苯基）-3-羟基丙酸甲酯，反应转化率99 %， 产品收率96. 5 %，对映体过量率99 %。
【主权项】
1. 一种近平滑假丝酵母细胞生物催化制备（S)-3-(4-氯苯基）-3-羟基丙酸甲酯的方 法，其特征在于反应罐中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 6,加入底物4-氯苯甲酰乙酸甲酯，使 底物4-氯苯甲酰乙酸甲酯添加量为80-90 g/L，麦芽浸膏22-26 g，平平加O 19-20g/L，木 糖45-50g/L、蔗糖25-28g/L、异丙醇5-6%V/V，121°C高压灭菌30分钟；冷却至29-30°C时， 加入湿酵母细胞使浓度为89-92g/L，通气比为0. 15-0. 16V/ (V分钟），进行生物催化反应， 反应时间为78-82小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得 到产物（S) -3-(4-氯苯基）-3-羟基丙酸甲酯，反应转化率98-99 %，产品收率96-97 %，对 映体过量率98. 5-99%。2. 权利要求1所述的方法，其特征在于湿酵母细胞制备过程如下：近平滑假丝酵母 ATCC 20008,经斜面、摇瓶、种子罐培养得到种子液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌 30分钟，冷却至29-30°C，将近平滑假丝酵母种子液接种至发酵罐，接种比例为6-6. 5%，通 气比为0. 5-0. 7V/ (V分钟)，29-30°C培养44-48小时，用过滤式离心机离心得到湿酵母细 胞，用作生物催化反应催化剂；发酵罐中培养液成份为：葡萄糖37-44 g/L，木糖7-8g/L， 玉米胚芽粉 10-12 g/L，酵母提取物 4-5 g/L，（NH4) 2H PO4 12-15 g/L，KH2PO4 6.5-7.5 g/L. MgSO4 .7H20 0.7-0.8 g/L，NaCl 0.08-0.1 g/L; pH6. 8。
【专利摘要】一种近平滑假丝酵母细胞生物催化制备？(S)-3-(4-氯苯基)-3-羟基丙酸甲酯的方法，反应罐中加入磷酸盐缓冲液，用近平滑假丝酵母细胞进行生物催化反应，产品收率高，对映体过量率高，解决了现有方法生产的困难。
【IPC分类】C12R1/72, C12P7/62
【公开号】CN105039436
【申请号】CN201510560580
【发明人】刘均洪, 刘 文
【申请人】青岛科技大学
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年9月7日