实施例2 种子培养基成份为：酵母提取物10g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，pH自然；配 制固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0020] 培养液成份为：葡萄糖25-30g/L，甘油25-30g/L，玉米胚芽粉30-40g/L， KH2P04 9-11g/L，MgS04. 7H20 0? 3-0. 4g/L，pH值为 6. 0。
[0021] 湿酵母细胞制备过程如下：挪威假丝酵母ATCC60365经斜面、摇瓶培养，得到种 子液。5L发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至31°C，将挪威假丝酵母种子 液接种至发酵罐，接种比例为6. 5%，通气比为0. 6-0. 8VAV分钟），31°C培养50小时，用过 滤式离心机离心得到湿酵母细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0022] 生物催化转化：5L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 4,加入底 物对苯丙酮甲磺酸酯，使浓度为90g/L，葡萄糖30g/L，吐温80 6g/L，木糖24g/L、麦芽糖 12g/L、异丙醇10%V/V(体积浓度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至31°C时，加入湿酵母细 胞使浓度为92g/L，通气比为0. 12V/(V分钟)，进行生物催化反应，反应时间为72小时；反 应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-4-(l-羟乙基） 苯甲磺酸酯，反应转化率98 %，产品收率96 %，对映体过量率99 %。
[0023] 实施例3 种子培养基成份为：酵母提取物10g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，pH自然；配 制固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0024] 培养液成份为：葡萄糖25-30g/L，甘油25-30g/L，玉米胚芽粉30-40g/L， KH2P04 9-11g/L，MgS04. 7H20 0? 3-0. 4g/L，pH值为 6. 0。
[0025] 湿酵母细胞制备过程如下：挪威假丝酵母ATCC60365经斜面、摇瓶培养，得到种 子液。IOL发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至30°C，将挪威假丝酵母种子 液接种至发酵罐，接种比例为6. 3%，通气比为0. 6-0. 8VAV分钟），30°C培养48小时，用过 滤式离心机离心得到湿酵母细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0026] 生物催化转化：IOL底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6.4,加入 底物对苯丙酮甲磺酸酯，使浓度为84g/L，葡萄糖28g/L，吐温80 7g/L，木糖22g/L、麦芽糖 13g/L、异丙醇9%V/V(体积浓度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至30°C时，加入湿酵母细 胞使浓度为90g/L，通气比为0. 13V/(V分钟)，进行生物催化反应，反应时间为70小时；反 应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-4-(l-羟乙基） 苯甲磺酸酯，反应转化率98. 5%，产品收率96. 5%，对映体过量率99%。
[0027] 实施例4 种子培养基成份为：酵母提取物10g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，pH自然；配 制固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0028] 培养液成份为：葡萄糖25-30g/L，甘油25-30g/L，玉米胚芽粉30-40g/L， KH2P04 9-11g/L，MgS04. 7H20 0? 3-0. 4g/L，pH值为 6. 0。
[0029] 湿酵母细胞制备过程如下：挪威假丝酵母ATCC60365经斜面、摇瓶培养，得到种 子液。IOL发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至31°C，将挪威假丝酵母种子 液接种至发酵罐，接种比例为6. 5 %，通气比为0. 6-0. 8VAV分钟），31°C培养49小时，用过 滤式离心机离心得到湿酵母细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0030] 生物催化转化：20L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 4,加入底 物对苯丙酮甲磺酸酯，使浓度为86g/L，葡萄糖29g/L，吐温80 8g/L，木糖23g/L、麦芽糖 14g/L、异丙醇9%V/V(体积浓度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至31°C时，加入湿酵母细 胞使浓度为91g/L，通气比为0. 13V/ (V分钟)，进行生物催化反应，反应时间为71小时；反 应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-4-(l-羟乙基） 苯甲磺酸酯，反应转化率99 %，产品收率96. 5 %，对映体过量率99 %。
【主权项】
1. 一种挪威假丝酵母细胞生物催化制备（S)-4-(1-羟乙基）苯甲磺酸酯的方法，其 特征在于反应罐中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 4,加入底物对苯丙酮甲磺酸酯，使底物对 苯丙酮甲磺酸酯添加量为80-90 g/L，葡萄糖26-30g/L，吐温80 6_8g/L，木糖20_24g/L、 麦芽糖12-15g/L、异丙醇8-10%V/V，121°C高压灭菌30分钟；冷却至30-31°C时，加入湿酵 母细胞使浓度为89-92g/L，通气比为0. 11-0. 13V/ (V分钟)，进行生物催化反应，反应时 间为69-72小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物 (S)-4-(l-羟乙基）苯甲磺酸酯，反应转化率98-99%，产品收率96-97%，对映体过量率 98.5-99 %〇2. 权利要求1所述的方法，其特征在于湿酵母细胞制备过程如下：挪威假丝酵母ATCC 60365,经斜面、摇瓶、种子罐培养得到种子液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分 钟，冷却至30-31°C，将挪威假丝酵母种子液接种至发酵罐，接种比例为6-6. 5 %，通气比为 0. 6-0. 8V/ (V分钟），30-31°C培养47-50小时，用过滤式离心机离心得到湿酵母细胞，用作 生物催化反应催化剂；发酵罐中培养液成份为：葡萄糖25-30 g/L，甘油25-30 g/L，玉米胚 芽粉 30-40 g/L，KH2P04 9-11 g/L，MgS04.7H20 0.3-0.4 g/L，pH 值为 6.0。
【专利摘要】一种挪威假丝酵母细胞生物催化制备？(S)-4-(1-羟乙基)苯甲磺酸酯的方法，反应罐中加入磷酸盐缓冲液，用挪威假丝酵母细胞进行生物催化反应，产品收率高，对映体过量率高，解决了现有方法生产的困难。
【IPC分类】C12R1/72, C12P11/00
【公开号】CN105087697
【申请号】CN201510561265
【发明人】张媛媛, 王露露, 刘均洪
【申请人】青岛科技大学
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年9月7日