[0030]称取聚碳硅烷固体1000g，研磨成粉末后，加入到盛有800g 二乙烯基苯的旋转蒸发瓶中，在水浴60°C下旋转溶解形成乳液。在烧杯中先加入300g的乙二醇，再加入30g的溴化十烷基三甲基铵，搅拌均匀后，将300g的纳米钴粉(粒径为30nm以下)加入到烧杯中，搅拌10分钟，形成悬浮液。将制备的悬浮液缓慢加入到制备的乳液中，搅拌均匀，得到混合液。在收集容器中加入100g去离子水，并加入10g的N，N-亚甲基双丙烯酰胺，加热到60°C。在收集容器上方设置微孔膜，微孔膜的孔径为30 μ m。将混合液通过微孔膜滴入到收集容器中。利用减压蒸馏手段将收集容器中的水分和有机溶剂去除，得到聚碳硅烷包覆磁性粉体的固体微球。将固体微球放到热处理炉中，通入氩气保护，以0.2°C /min的升温速率升到1000°C，保温I小时后，自然降温，得到表面多孔的固体微球。利用磁铁吸出具有磁性的磁性微球，得到324g合格的成品磁性微球。
[0031]将制得的成品磁性微球与氢氧化钾和氨基苯基硼酸以1:5:10的质量比配置成水溶液，保持PH值为12.5，温度为60°C下，搅拌反应10小时，冷却，经磁性分离、洗涤，得到表面带有亲和基团的磁性微球。
[0032]将活化后的磁性微球与异硫氰酸酯、盐酸胍、碘化钠、EDTA、十二烷基氨基酸配置成提取液，其中异硫氰酸酯的浓度为5M，盐酸胍的浓度为2.5M，碘化钠的浓度为2.0M, EDTA的浓度为30mM，十二烷基氨基酸的浓度为80mM，磁性微球的质量浓度为15%。
[0033]实施例3
[0034]称取聚碳娃烧固体1000g，研磨成粉末后，加入到盛有100g 二甲苯的旋转蒸发瓶中，在水浴50°C下旋转溶解形成乳液。在烧杯中先加入300g的乙醇，再加入45g的十烷基硫酸钠，搅拌均匀后，将300g的纳米？6304粉(粒径为30nm以下)加入到烧杯中，搅拌10分钟，形成悬浮液。将制备的悬浮液缓慢加入到制备的乳液中，搅拌均匀，得到混合液。在收集容器中加入100g去离子水，并加入10g的氨丙啶，加热到80°C。在收集容器上方设置微孔膜，微孔膜的孔径为50 μ m。将混合液通过微孔膜滴入到收集容器中。利用减压蒸馏手段将收集容器中的水分和有机溶剂去除，得到聚碳硅烷包覆磁性粉体的固体微球。将固体微球放到热处理炉中，通入氮气保护，以1°C /min的升温速率升到600°C，保温I小时后，自然降温，得到表面多孔的固体微球。利用磁铁吸出具有磁性的磁性微球，得到331g合格的成品磁性微球。
[0035]将制得的成品磁性微球、氢氧化钠和氨基苯甲脒以1:2.5:6的质量比配制成水溶液，保持PH值为11.2，温度为80°C下，搅拌反应10小时，冷却，经磁性分离、洗涤，得到表面带有亲和基团的磁性微球。
[0036]将活化后的磁性微球与异硫氰酸酯、盐酸胍、碘化钠、EDTA、十二烷基氨基酸配置成提取液，其中异硫氰酸酯的浓度为5M，盐酸胍的浓度为2.8M，碘化钠的浓度为2.1M，EDTA的浓度为25mM，十二烷基氨基酸的浓度为75mM，磁性微球的质量浓度为12%。
[0037]实施例4
[0038]称取聚碳娃烧固体1000g，研磨成粉末后，加入到盛有100g 二甲苯的旋转蒸发瓶中，在水浴50°C下旋转溶解形成乳液。在烧杯中先加入300g的乙二醇，再加入40g的溴化十烷基铵，搅拌均匀后，将500g的纳米镍粉(粒径为30nm以下)加入到烧杯中，搅拌10分钟，形成悬浮液。将制备的悬浮液缓慢加入到制备的乳液中，搅拌均匀，得到混合液。在收集容器中加入100g去离子水，并加入10g的氨丙啶，加热到80°C。在收集容器上方设置微孔膜，微孔膜的孔径为40 μ m。将混合液通过微孔膜滴入到收集容器中。利用减压蒸馏手段将收集容器中的水分和有机溶剂去除，得到聚碳硅烷包覆磁性粉体的固体微球。将固体微球放到热处理炉中，通入氩气保护，以0.10C /min的升温速率升到600°C，保温2小时后，自然降温，得到表面多孔的固体微球。利用磁铁吸出具有磁性的磁性微球，得到538g合格的成品磁性微球。
[0039]将制得的成品磁性微球、氢氧化钾和氨基苯基硼酸以1:2:5的质量比配置成水溶液，保持PH值为11.5，温度为60°C下，搅拌反应8小时，冷却，经磁性分离、洗涤，得到表面带有亲和基团的磁性微球。
[0040]将活化后的磁性微球与异硫氰酸酯、盐酸胍、碘化钠、EDTA、十二烷基氨基酸配置成提取液，其中异硫氰酸酯的浓度为4.2M，盐酸胍的浓度为2.5M，碘化钠的浓度为1.5M，EDTA的浓度为15mM，十二烷基氨基酸的浓度为lOOmM，磁性微球的质量浓度为10%。
【主权项】
1.一种动物组织核酸提取液的制备方法，包括以下步骤: (一)磁性微球的制备 (1)将聚碳硅烷固体溶解到有机苯类溶剂中，形成乳液；将纳米级磁性粉体加入到含有表面活性剂的有机醇类溶剂中，搅拌均匀形成悬浮液；将悬浮液加入到乳液中，搅拌均匀，得到混合液；其中聚碳硅烷与磁性粉体的质量比为2-5:1; (2)将混合液通过微孔膜滴入到含有交联剂的温水溶液中，水温保持在60-80°C;使得混合液中聚碳硅烷交联固化在磁性粉体表面；利用减压蒸馏手段将水分和有机溶剂去除，得到聚碳硅烷包覆磁性粉体的固体微球； (3)将固体微球在500-1000°C下、氮气或惰性气体保护下进行保温1-2小时，聚碳硅烷裂解后形成表面多孔的固体微球； (4)将热处理后的固体微球通过磁分离手段进行筛选，筛选出合格的成品磁性微球； (二)磁性微球的活化 将(一)中制得的成品磁性微球与催化剂、氨基试剂以1:1-20:5-30的质量比混合，保持pH值为10-13，温度为50-80°C下，搅拌反应5_10小时，冷却，经磁性分离、洗涤，得到表面带有亲和基团的磁性微球；其中催化剂选自氢氧化钠或氢氧化钾，氨基试剂选自氨基苯甲脒或氨基苯基硼酸； (三)提取液的配制 将步骤(二)中活化后的磁性微球与异硫氰酸酯、盐酸胍、碘化钠、EDTA、十二烷基氨基酸配置成提取液，其中异硫氰酸酯的浓度为3.5-5M,盐酸胍的浓度为1.5-3M,碘化钠的浓度为1.2-2.5M, EDTA的浓度为15_30mM，十二烷基氨基酸的浓度为60_100mM ;磁性微球的质量浓度为10-15%。2.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(I)中，有机苯类溶剂选自甲苯、二甲苯和二乙烯基苯中的一种或几种组合。3.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(I)中，其中有机醇类溶剂选自乙醇或乙二醇。4.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(I)中，其中表面活性剂选自二辛基琥珀酸磺酸钠、十烷基硫酸钠、溴化十烷基三甲基铵或溴化十烷基铵。5.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(2)中，其中交联剂选自N，N-亚甲基双丙烯酰胺或氨丙啶。6.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(I)中，其中纳米级磁性粉体的粒径为lnm-30nm。7.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(I)中，其中磁性粉体为铁、钴、镍或它们的合金。8.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(I)中，其中磁性粉体为Fe3O4。9.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(2)中，其中微孔膜的孔径为1-50 μm。10.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(2)中，其中微孔膜的孔径为10-30 μ m。
【专利摘要】一种动物组织核酸提取液的制备方法，该方法包括磁性微球的制备和表面活化以及最终提取液的配置。其中磁性微球先通过聚碳硅烷包覆纳米级磁性粉体，再通过热处理和磁选手段制得。根据本发明的制备方法所制得的提取液，能够对动物组织进行快速解离并高效分离提纯DNA，能够广泛应用到动物疫病检测领域。
【IPC分类】C12N15/10, B01J20/30, B01J20/28, B01J20/26
【公开号】CN105112404
【申请号】CN201510610935
【发明人】赵林萍, 贾松涛, 董瑞静, 李梦雨, 张娟, 张丹鹤
【申请人】河南中标检测服务有限公司
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年9月23日