快速检测动物源性核酸的方法、引物对及试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物检测技术领域，特别是涉及一种快速检测动物源性核酸的方法、 引物对及试剂盒。
【背景技术】
[0002] 物种识别技术是现今的DNA条形码技术（DNA Barcoding)。DNA条形码是指生物 体内能够代表该物种的DNA片段，具有通用稳定、不易变异、易扩增且相对较短等特点。DNA 条形码技术有效地补充了传统物种鉴定方法，不但对物种鉴定和分类学等基础研究具有重 要意义，而且在环境和食品等领域也已发挥广泛的应用价值。
[0003] 目前，一系列DNA条形码计划正在世界各地进行。在加拿大丘吉尔的北极圈附近 地区，科学家对6000种物种进行编目，包括数量惊人的昆虫；在新几内亚，DNA条形码用于 了解蝴蝶的进化。这些DNA条形码技术研究热点主要集中在进化树最底层的物种分辨。
[0004] 但是，上述研究理念对物种区分精度较高，合格DNA条形码序列并不易寻找；在实 际环境和食品检测应用中，对物种的精度时常并无具体要求，只需区分进化树上较大分支 (如动物与植物、细菌与真菌等）即可；因此上述研究无法实现快速检测样本中是否含有进 化树上较大分支的物种。
【发明内容】
[0005] 本发明主要解决的技术问题是提供一种快速检测动物源性核酸的方法、引物对及 试剂盒，能够快速检测样本中是否含有动物源性成分。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种快速检测动物源 性核酸的方法，包括：通过引物对，对样本的DNA序列进行PCR反应，获得PCR反应产物，其 中，所述引物对是根据四条动物源性DNA序列中的一条或一条以上进行设计的，所述四条 动物源性DNA序列分别是：SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:4;对所述PCR反应产物进行电泳检 测；根据所述电泳检测的结果，预测所述样本中是否含有动物源性核酸。
[0007] 其中，所述引物对包括第一正向引物和第一反向引物，所述第一正向引物是 5' TTCTCCAGGGTACTGTACACGC3'，所述第一反向引物是 5' CTCAAAAGAGGGCAGACGCA3'。
[0008] 其中，所述引物对包括第二正向引物和第二反向引物，所述第二正向引物是 5' GAAGTCTGTTCTGCTCAAGC3'，所述第二反向引物是 5' GGATGCATGAAAACCACTTG3'。
[0009] 其中，所述引物对包括第三正向引物和第三反向引物，所述第三正向引物是 5' CAAAAAGTCCAGTCCCCCCAGC3'，所述第三反向引物是 5' AAGGTAAAAAGCAGGAACGC3'。
[0010] 其中，所述引物对包括第四正向引物和第四反向引物，所述第四正向引物是 5' ATGCTGITTAAGAAAAGGGGGA3'，所述第四反向引物是 5' TGCCACTGCCTGAAGATAAC3'。
[0011] 其中，所述通过引物对，对样本的DNA序列进行PCR反应，获得PCR反应产物的步 骤之前，包括：通过文献资料收集动物固有且保守的DNA序列，获得第一 DNA序列集合；利 用植物基因数据库筛查所述第一 DNA序列集合，获得第二DNA序列集合，其中，所述第二DNA 序列集合与所述植物基因数据库中的DNA序列完全不匹配；利用动物基因数据库筛查所述 第二DNA序列集合，获得第三DNA序列集合，所述第三DNA序列集合与所述动物基因数据库 中的DNA序列完全匹配；对所述第三DNA序列进行引物设计并经过验证试验，获得第四DNA 序列集合，所述第四DNA序列集合即为包括所述四条动物源性DNA序列中的一条或一条以 上的DNA序列；根据所述四条动物源性DNA序列中的一条或一条以上动物源性DNA序列，进 行引物对的设计。
[0012] 其中，所述动物源性DNA序列所对应的物种至少为猪、牛、鸡或鸭。
[0013] 为解决上述技术问题，本发明采用的另一个技术方案是：提供一种引物对，所述引 物对是如上所述任一项所述的引物对。
[0014] 为解决上述技术问题，本发明采用的又一个技术方案是：提供一种快速检测动物 源性核酸的试剂盒，所述试剂盒包括如上所述任一项所述的引物对。
[0015] 本发明的有益效果是：区别于现有技术的情况，本发明通过根据四条动物源性 DNA序列中的一条或一条以上进行设计的引物对，对样本的DNA序列进行PCR反应；对PCR 反应产物进行电泳检测；根据电泳检测的结果，确定样本中是否含有动物源性核酸。由于引 物对是根据四条动物源性DNA序列中的一条或一条以上进行设计的，通过这种方式，能够 快速检测样本中是否含有动物源性成分。
【附图说明】
[0016] 图1是本发明快速检测动物源性核酸的方法一实施方式的流程图；
[0017] 图2是本发明快速检测动物源性核酸的方法另一实施方式的流程图；
[0018] 图3是本发明快速检测动物源性核酸的方法质控组电泳检测图；
[0019]图4是本发明快速检测动物源性核酸的方法第一引物对PCR反应后产物的电泳检 测图；
[0020]图5是本发明快速检测动物源性核酸的方法第二引物对PCR反应后产物的电泳检 测图；
[0021]图6是本发明快速检测动物源性核酸的方法第三引物对PCR反应后产物的电泳检 测图；
[0022] 图7是本发明快速检测动物源性核酸的方法第四引物对PCR反应后产物的电泳检 测图；
[0023] 图8是本发明快速检测动物源性核酸的方法第五引物对PCR反应后产物的电泳检 测图；
[0024] 图9是本发明快速检测动物源性核酸的方法第六引物对PCR反应后产物的电泳检 测图；
[0025] 图10是本发明快速检测动物源性核酸的方法第七引物对PCR反应后产物的电泳 检测图；
[0026] 图11是本发明快速检测动物源性核酸的方法第八引物对PCR反应后产物的电泳 检测图。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合附图和实施方式对本发明进行详细说明。
[0028] 参阅图1，图1是本发明快速检测动物源性核酸的方法一实施方式的流程图，包 括：
[0029] 步骤S101 :通过引物对，对样本的DNA序列进行PCR反应，获得PCR反应产物，其 中，引物对是根据四条动物源性DNA序列中的一条或一条以上进行设计的，四条动物源性 DNA 序列分别是：SEQ ID N0 :1 至 SEQ ID N0 :4。
[0030]弓丨物是一小段单链DNA或RNA，是DNA或RNA复制的起始点。一对引物对包括正向 引物和反向引物，正向引物和反向引物分别和DNA双链的正向链和反向链结合。
[0031] 四条动物源性DNA序列SEQ ID N0 :1至SEQ ID N0 :4是经过多重筛选验证过的、 植物中没有且是动物固有保守的序列。引物对根据四条动物源性DNA序列中的一条或一条 以上进行设计，即可以根据一条动物源性DNA序列设计一对引物对，可以根据两条动物源 性DNA序列设计两对引物对，可以根据三条动物源性DNA序列设计三对引物对，可以根据四 条动物源性DNA序列设计四对引物对，因此引物对可以是一对或一对以上，利用该一对或 一对以上引物对与样本的DNA序列进行PCR反应，通过检测该PCR反应产物，即可预测样本 中是否含有动物源性核酸。
[0032] SEQ ID N0 :1 至 SEQ ID N0 :4 的 DNA 序列如下：
[0033] SEQ ID NO：1
[0034] tcactgtgcc attttttcat gtgtttctcc agggtactgt acacgctaaa aggcatctta60
[0035] caaatttcac atttgtaaac gtccttcccc acctggccat gcgttttcat gtgcctggtgl20
[0036] agcttgctac tctgggcaca ggcatagttg cacagctcgc atttataagg cctttcgcccl80
[0037] gtgtggcttc tcctgtggac agtgagattg ctacagttct tgaagacttt cccacagtac240
[0038] tcacaagtgt cgctgcgtct gccctctttt gagctgggcc tgcccgggcc cggaccacta300
[0039] atatggggcg tgctccctcc acttcc326
[0040] SEQ ID NO ：2
[0041] tctctgaatg gcagaagtct gttctgctca agcacaaagt atacacagat gtctatatta60
[0042] cattcttata ggtttgacag caactgcatg ttgtatctat aaactgtcct ttagcagtgal20
[0043] cacttcctca atgatgataa gctaatttat gcaactaaat ctcctttgtg cagaaatgaal80
[0044] agctaattga gtcattacaa agtaattcag gaaggaatac cttgtataaa ttggcttact240
[0045] ttataaatcc ttctcaagtg gttttcatgc atcctaaatg ggactaagca g291
[0046] SEQ ID NO ：3
[0047] cgagatgaaa ttgagacatg gaagaattta ttgcccagaa aattccattc tgctatctga60
[0048] ttcaaaaagt ccagtccccc cagcttcgga aaatctattt tccacatttt aataccctgcl20
[0049] agaacagtcc tcataactca tccgagtgtg ttaagcacag ttttattaga tctgaaacaal80
[0050] attttggtgg ggagatacta taggtcatta accatggagt aattttatcc ttgtttccct240
[0051] aatgatgcca taatggcgag cgaatttctt aactaaagac caaagaacat tttgaaggtc300
[0052] agtttcatct gtgagctcct tcaagcgctt ctcagagaag attggaaaac