于生药量30g)，加入2. 0g、2. 5g、 3g、3. 5g、4. 0g活性炭粉末，相当于溶液量0. 4%、0. 5%、0. 6%、0. 7%、0. 8%，回流脱色1小 时，冷却后观察脱色液颜色并测定穿心莲内酯含量，计算穿心莲内酯减失量。结果见表13。
[0129] 表13活性炭加入量考察（n = 3)
[0130]
[0131] " + "表示颜色最浅，表示颜色较浅"+++"表示颜色较深，"++++"表示颜色最 深
[0132] 由表13可见，加入溶液量0. 4%~0. 5%活性炭回流脱色1小时穿心莲内含量无 明显降低，且无脱色液中无明显可见绿色，当活性炭加入量大于溶液量0.5%时穿心莲内酯 含量明显降低，故活性炭用量取药材量〇. 5 %即可。
[0133] 3. 3.3. 1脱色时间考察
[0134]取3. 3. 2中穿心莲提取液4份，每份500ml (相当于生药量30g)，加入2. 5g活性炭 粉末，回流脱色〇、〇. 5、1、2、3小时，过滤，冷却后观察脱色液颜色并测定穿心莲内酯含量， 计算穿心莲内酯减失量。结果见表14。
[0135] 表14活性炭加入量考察（n = 3)
[0136]
[0137] "++"颜色最深；" + "颜色较浅
[0138] 由表14可见，随回流时间延长穿心莲内酯有少量降低，温度过高会破坏穿心莲内 酯，若脱色时间太短，则未能达到脱色目的，故回流脱色时间选择1小时即可。
[0139] 3. 3. 4浓缩体积考察
[0140] 取穿心莲药材粉末500g，按上述操作后得穿心莲脱色液，取穿心莲脱色5份，每份 500ml (相当于生药 31g)，减压浓缩至 11111/^、21111/^、31111/^、51111/^、81111/^、1〇1111/^，静置过夜 后测定滤液中穿心莲内酯含量。结果见图11。
[0141] 由图11可见当浓缩至lml/g时穿心莲内酯有大量析出，及穿心莲脱色液浓缩至 lml/g时即可。
[0142] 3. 3. 5醇洗涤沉淀考察
[0143] 在前期预示试验中发现，3. 3. 4中沉淀为深黄色，经后续纯化、结晶操作得到穿心 莲内酯结晶为黄色片状或针状结晶，且纯度仅能达到87%。通过预示发现使用少量乙醇洗 涤沉淀后，沉淀颜色变为类白色，且通过纯化结晶后，结晶为物色片状或针状，纯度达95% 以上，达到《中国药典》2010年版1部穿心莲内酯项下纯度的相关规定。
[0144] 故考察了乙醇洗涤沉淀时乙醇浓度、乙醇用量对洗涤效果的影响。具体试验方法 及结果如下。
[0145] 3. 3. 5.1乙醇用量
[0146] 取3. 3. 4中沉淀4份，每份lg，分别置布氏漏斗中，加入0、3、5、8ml (0、3、5、8 倍）95 %乙醇洗涤，50°C减压干燥后观察沉淀颜色，并测定穿心莲内酯含量，计算穿心莲内 酯减失量，结果见表15。
[0147] 表15乙醇用量考察
[0148]
[0149] 注：" + "表示沉淀颜色为黄色，表示沉淀颜色为类白色
[0150] 由表15可知，当乙醇加入量小于沉淀量5倍时，沉淀颜色为黄色，当乙醇加入量大 于5倍时，沉淀颜色为类白色，故选择使用5倍量乙醇洗涤即可。
[0151] 3. 3. 5. 2乙醇浓度考察
[0152] 取3. 3. 4中沉淀4份，每份lg，分别置布氏漏斗中，加5ml 65%、80%、95%乙醇洗 涤，另一份不加乙醇洗涤，50°C减压干燥后观察沉淀颜色，并测定穿心莲内酯含量，计算穿 心莲内酯减失量，结果见表16。
[0153] 表16乙醇浓度考察
[0154]
[0155] 注：" + "表示沉淀颜色为黄色，表示沉淀颜色为类白色
[0156] 由表16可知，当乙醇浓度小于80%时，虽然穿心莲内酯损失量较少，但沉淀颜色 为黄色，当乙醇浓度大于80 %时，沉淀颜色为类白色，故选择使用80 %乙醇洗涤即可。
[0157] 在后续的验证试验中发现，使用5倍量80%乙醇洗涤沉淀时，穿心莲内酯的损失 量较大，可达到20%以上。因此，使用乙醇洗涤时，洗至沉淀颜色为类白色即可，再加少量水 洗涤，洗至水溶液无色即可。
[0158] 3. 3. 6三氯甲烷纯化考察
[0159] 参考文献[9，利用脱水穿心莲内酯易溶于三氯甲烧，而穿心莲内酯不溶于三氯 甲烷的性质，采用三氯甲烷静置的方式除去上述沉淀中脱水穿心莲内酯。考虑到三氯甲烷 用量、静置时间及静置次数对除杂效果的影响，设计如下3个单因素试验，选择最佳试验方 案。具体试验方法及结果如下。
[0160] 3. 3. 6. 1三氯甲烷用量考察
[0161] 取穿心莲药材粉末200g，按上述操作后得穿心莲内酯粗晶，干燥后取穿心莲内酯 粗晶6份，每份1 g，分别加入5、10、20、30、40、50ml三氯甲烷（相当于沉淀量5、10、20、30、 40、50倍）静置1小时，过滤，干燥得精制穿心莲内酯粉末，分别测定其脱水穿心莲内酯含 量，并计算脱水穿心莲内酯减失量。结果见表17。
[0162] 表17三氯甲烷用量考察
[0163]
[0164] 由表17可见，当三氯甲烷使用量大于沉淀量10倍时，脱水穿心莲内酯含量无显著 降低，考虑到三氯甲烷残留及成本，选择10倍量三氯甲烷静置即可。
[0165] 3. 3. 6. 1三氯甲烷静置时间考察
[0166] 取穿心莲药材粉末200g，按上述操作后得穿心莲内酯沉淀，干燥后取穿心莲内酯 沉淀4份，每份lg，加入10ml三氯甲烷，分别静置0. 5、1、2、3小时，过滤，干燥得精制穿心莲 内酯粉末，分别测定其脱水穿心莲内酯含量，并计算脱水穿心莲内酯减失量。结果见表18。
[0167] 表18三氯甲烷用量考察
[0168]
[0169] 由表18可见，静置0. 5小时，脱水穿心莲内酯减失量比例较小，静置1、2、3小时脱 水穿心莲内酯减失量比例无明显变化，故选择静置1小时静置即可。
[0170] 3. 3. 6. 1三氯甲烷静置次数考察
[0171] 取穿心莲药材粉末200g，按上述操作后得穿心莲内酯沉淀，干燥后取穿心莲内酯 沉淀3份，每份lg，加入10ml三氯甲烷，分别静置1、2、3次，每次1小时，过滤，干燥得精制 穿心莲内酯粉末，分别测定其脱水穿心莲内酯含量。结果见表19。
[0172] 表19三氯甲烷用量考察
[0173]
[0174] 由表19可见，静置次数对精制效果影响较大，静置3次后即可达到除去大量脱水 穿心莲内酯的目的，选择静置3次即可。
[0175] 3. 4结晶
[0176] 参考文献[9 1(：]，穿心莲内酯粗晶重结晶的方式主要为采用乙醇加热溶解，回收溶 剂，静置析晶的方式纯化穿心莲内酯。
[0177] 取精制穿心莲内酯粉末4g，加入200ml 95 %加热使溶解，过滤，减压回收溶剂至 半量，4°C静置过夜，过滤，得穿心莲内酯结晶。母液再次浓缩至半量，重复上述操作，得穿心 莲内酯结晶，合并两次穿心莲内酯结晶，50°C减压干燥，得穿心莲内酯结晶。结果见表20。
[0178] 表20结晶结果
[0179]
[0180] 由表20可见，根据上述结晶方法，经两次浓缩结晶制得穿心莲内酯结晶纯度均大 于95%，符合《中国药典》要求。
[0181] 3. 5工艺验证
[0182] 取穿心莲药材粗粉200g，按工艺流程操作，结果见表21。
[0183] 表21工艺验证
[0184]
[0185] 结果显示穿心莲内酯平均得率1. 09,平均纯度为97. 88 %，得率及纯度RSD均小于 5%，表明方法稳定可行。
[0186] 3. 6小结
[0187] 最终确定穿心莲内酯提取、纯化工艺为：取穿心莲粗粉200g，加入1. 5倍量95%乙 醇，浸润30分钟，再加入4倍量95%乙醇，加热回流提取3次，每次2小时，过滤，合并3次 滤液。滤液加蒸馏水调节乙醇浓度至65%，室温静置36h，过滤，滤液加0. 5%活性炭粉末， 加热回流脱色1小时，过滤，滤液减压回收乙醇至lg/ml (药材量/浓缩液体积），4°C静置 36小时，过滤，得穿心莲内酯沉淀。穿心莲内酯沉淀加少量80%乙醇洗涤（洗涤沉淀至类 白色），再加少量水洗涤（洗涤至水溶液无色），得穿心莲内酯白色粉末，穿心莲内酯白色粉 末加10倍量三氯甲烷静置3次，每次1小时，过