，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0024]实施例1:菌种的筛选
(1)筛选样本腐烂花生壳
(2)培养基每1 L所述富集培养基含有:香豆素lg，(NH4)2S04 5g，NaCl 8.5g，所述富集培养基pH自然；
每 1 L所述初筛培养基含有:香豆素 lg，(NH4)2S04 5g，KH2P04 2.5g, MgS04 lg, NaH2P04.12H20 0.5g, FeS04.7H 20 0.lg, CaCl2 0.lg,琼脂 20g，所述初筛培养基 ρΗ6.0-6.5 ；
每1 L所述斜面培养基含有:马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，所述斜面培养基pH自夕犬.JWS ，
每1 L所述种子培养基含有:马铃薯200g，葡萄糖20g，Tween 80 l.0mL，所述种子培养基pH自然;
每 1 L 所述复筛培养基含有:蔗糖 30g，NaN03 2.0g，Κ2ΗΡ04.3Η20 1.0g，KCl 0.5g，MgS040.5g，FeS04.7H20 0.0lg，pH 自然;
(3)试验中所用到的溶液 ①黄曲霉毒素匕贮备液
5mg黄曲霉毒素匕溶于甲醇(色谱纯)，50ml容量瓶定容，得黄曲霉毒素B i浓度lOOug/ml溶液，密封后避光_20°C保存。
[0025]②黄曲霉毒素匕工作液
取一定量的黄曲霉毒素贮备液，然后加入一定比例的甲醇稀释至20ug/mL。
[0026](4)种子培养
斜面种子活化5天后，接入装有50 mL种子培养基的250 mL三角瓶中培养34h，即得种子液。培养温度28°C，转速180r/min。
[0027](5)发酵培养
将种子液接入50 mL/250mL摇瓶中，接种量10% (V: V)，在28°C、转速180r/min的条件下培养48h。
[0028](6)发酵上清液与黄曲霉毒素匕反应
发酵48h后取发酵液于离心管，10000r/min离心lOmin。离心完后取上清液950 μ L和AFB1工作液50 μ LAFB1甲醇溶液(毒素溶液浓度20ug/mL)于灭菌的7ml离心管中，使AFB1终浓度为lug/mL，封口膜封住管口，然后在恒温培养箱中37°C反应24h。以灭菌发酵培养基加等量AFB1甲醇溶液做空白对照。做3次平行。
[0029](7)HPLC法测定残留黄曲霉毒素匕含量
反应混合液用等体积(lml)的二氯甲烷旋涡振荡萃取3次每次30秒，取下层二氯甲烷于另一 7ml离心管中，真空干燥箱50°C除去二氯甲烷层，用lml甲醇(色谱纯)溶解残余物，经有机相滤膜(0.22um)过滤，混匀进样。岛津LCsolut1n计算残余黄曲霉毒素B1含量。
[0030](8)黄曲霉毒素匕降解率计算
分别测算初筛菌株的酶活，Cladosporium uredinicolaHSK8菌株的酶活最高为443U。经鉴定，该株菌为夏孢生枝孢(Cladosporium uredinicolaHSK8)，专利保藏编号:CCTCCΝ0:Μ 2015181。将该菌株作为以后的试验菌株。
[0031]实例2:CCTCCN0: Μ 2015181的的培养条件优化
(1)菌株:CCTCCΝ0:Μ 2015181
(2)方法步骤
发酵培养基为初始培养基(g/L):蔗糖 30，NaN03 2.0，K2HP04.3H20 1.0，KC1 0.5，MgS04 0.5，FeS04.7H20 0.01。初始发酵条件为:白然pH，接种量10%，装液量50 ml/250ml, 28 °C，摇床转速180r/min，发酵周期48h。
[0032]采用单因素试验考察CCTCC Ν0:Μ 2015181的发酵温度、初始pH、发酵周期、接种量、装液量对AFB1降解率的影响。
[0033]a.发酵温度的优选试验
依图1可知，25-34° C条件下AFB1降解率变化并不大，只是对生物量影响较大，37° C和40° C条件下微生物不能生长。在不严重影响微生物生长的情况下，选择降解率最高(40.68%)的28° C作为发酵培养温度。
[0034]b.装液量对HSK8降解AFB1的影响
由图2可知，装液量25mL/250mL对应的AFB1降解率最高(44.36%)，但经过3天的发酵，菌体都黏在瓶底，剩余可流动的液体很少，这不利于以后活性物质的提取。75mL/250mL时所对应的降解率与25mL/250mL的相差不多，综合考虑，把75mL/250mL作为发酵装液量。其中125mL/250mL装液量所对应的发酵液粘稠，严重影响萃取过程，也阻碍了对降解AFB1的活性物质的进一步分析，所以该组数据不作考虑。
[0035]c.接种量对AFB1降解率的影响
如图3所示接种量对AFB1降解率的影响是很明显的，6%、12%和15%相对较高，且相差不多。其中以15%的接种量对应的降解率最高，为43.14%，故将15%选为发酵的接种量。
[0036]d.发酵周期对AFB1降解率的影响
如图4所示，发酵周期对AFB1的降解率影响并不大，且在3-6天的时候发酵液变得特别粘稠，萃取时出现轻微的乳化现象。为了考虑到乳化现象对AFB1萃取的影响，对3天后的实验结果不予考虑，同时对发酵周期进行更细化的优化。其结果如图5，结果显示发酵36h时对AFB1降解效果最好，达到70.31%。
[0037]e.初始pH对AFB1降解率的影响
如图6所示，在不同初始pH条件下，当pH=8.0(不调节pH)时AFB1降解率达到最高69%，与上文结果类似。依图还可以看出，无论初始pH高低，发酵液完毕的发酵液pH都约为
7.5，可见微生物对环境有很强的适应性。
[0038]实例3:CCTCC NO: Μ 2015181 培养基优化
a.碳源的优化
CCTCC Ν0:Μ 2015181发酵培养基碳源优化结果如图7所示。可见大部分碳源所对应的AFB1降解率都是很可观的，达到80%以上，其中糖蜜、玉米芯粉、玉米粉对应的AFB1降解率接近100%，只是玉米芯粉组在萃取阶段有一定的乳化现象，为了实验的严谨性，暂且对该组数据不做考虑。降解率最低的为橙皮粉组50%。
[0039]CCTCC NO: Μ 2015181在糖蜜、羧甲基纤维素钠、玉米芯粉、橙皮粉组发酵培养基中都能很好地生长，这一方面说明CCTCC NO: Μ 2015181能利用这些工农副产品或废弃物，另一方面说明CCTCC Ν0:Μ 2015181能利用这些廉价的碳源产AFB1降解酶，一举两得。
b.碳源添加量的优化
上述试验的到最优碳源糖蜜，培养基中其添加量的优化结果见图8，结果显示在添加量在多2.5%的条件下，AFB1的降解率都是接近100%的，为了进一步节省成本，选择2.5%作为碳源的添加量。
【主权项】
1.一种产黄曲霉毒素B1降解酶微生物为夏孢生枝孢Cladosporiwn uredinicolaHSK8，其保藏编号为 CCTCC NO: Μ 2015181。2.根据权利要求1所述的一种产黄曲霉毒素Β1降解酶微生物，其特征在于，夏孢生枝孢 Cladosporium uredinicola HSK8 发酵培养的初始培养基为鹿糖 30g/L，NaN03 2.0g/L,Κ2ΗΡ04.3H20 1.0g/L，KC1 0.5g/L，MgS04 0.5g/L，FeS04.7H20 0.01g/L。3.根据权利要求1所述的一种产黄曲霉毒素B1降解酶微生物，其特征在于，夏孢生枝孢 Cladosporiuni uredinicola HSK8 的发酵条件为:发酵温度 25-40 °C、180r/min 发酵24-144h、接种量为与培养基1-15%的体积比接种、装液量25-125ml/250ml、pH5.0-9.0。4.根据权利要求3所述的一种产黄曲霉毒素B1降解酶微生物，其特征在于，夏孢生枝I Cladosporium uredinicola HSK8 的发酵条件为:发酵温度为 28 °C、180r/min 发酵 36h、接种量 15%、装液量 75ml/250ml、ρΗ7.5。5.根据权利要求1所述的一种产黄曲霉毒素Β1降解酶微生物，其特征在于，夏孢生枝孢Cladosporium uredinicola HSK8的发酵培养基的碳源为鹿糖，葡萄糖，α -乳糖，糖蜜，可溶性淀粉，D-甘露醇，羧甲基纤维素钠，玉米芯粉，玉米粉，橙皮粉，D-山梨醇的一种。6.根据权利要求1所述的一种产黄曲霉毒素Β1降解酶微生物，其特征在于，夏孢生枝孢Cladosporium uredinicola HSK8的发酵培养基的氮源添加量为0.5-3.5%。7.根据权利要求5所述的一种产黄曲霉毒素B1降解酶微生物，其特征在于，夏孢生枝孢Cladosporium uredinicola HSK8的发酵培养基的氮源添加量为2.5%。8.根据权利要求1所述的一种产黄曲霉毒素B1降解酶微生物的应用，其特征在于，夏孢生枝孢Cladosporiwn uredinicola HSK8在利用工农副产物或废弃物糖蜜、玉米芯粉和橙皮粉生产黄曲霉毒素降解酶的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种能降解黄曲霉毒素B1（AFB1）的微生物夏孢生枝孢<i>Cladosporium？uredinicola</i>HSK8。该微生物已于2015年3月31日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC？NO:M？2015181。不仅如此，该株菌还能利用工农副产物或废弃物糖蜜、玉米芯粉和橙皮粉发酵产黄曲霉毒素B1降解酶，因此也大大节约了成本。CCTCC NO：M 201518120150331
【IPC分类】C12N1/14, C12N9/00, C12R1/645
【公开号】CN105255739
【申请号】CN201510546944
【发明人】蔡俊, 邵帅, 王常高, 杜馨, 林建国
【申请人】湖北工业大学
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年8月31日