rativeinstillation)。下列为一些本发明的 组合物的实例。
[0064] 于口服递送，所述赋形剂或载剂调配物可包含惰性惯用的成分或载剂，例如 巧樣酸钢或憐酸氨巧（dicalcium地OS地ate)及（a)结合剂，例如，簇甲基纤维素 (carboxymethylcellulose)、海藻酸（ali即ates)、明胶（gelatin)、聚乙締R比咯晚酬 (polyvinylpyrrolidone)、薦糖及阿拉伯胶（acacia);化）保湿剂化umectant)，例如，甘 油；（C)崩解剂，例如，琼脂-琼脂、碳酸觀洋芋或树馨淀粉、海藻酸（aliginicacid)、特 定复合娃酸盐（certaincomplexsilicates)及碳酸钢；（d)润湿剂（wettingagents)， 例如，十六醇（cet}dalcohol)及单硬脂酸甘油（glycerolmonostearate) ;(e)吸附剂 (adsorbents),例如，高岭± (^kaolin)及皂 ± 〇3entonite);讯填充剂（fillers),例如， 乳糖、淀粉、醋类、薦糖、葡萄糖、甘露醇（mannitol),娃酸；W及（g)润滑剂（lubricants), 例如，硬脂酸儀（ma即esiumstearate)，滑石粉，硬脂酸巧（calciumstearate)，固体 阳Gs(solidpolyeth}deneglycols),十二烷基硫酸钢（sodiumlau;rylsulfate)或其 混合物。运些和其他适合的医药上可接受的赋形剂描述于Remington's化armaceutical Sciences与HandbookofPharmaceuticalExcipients, 3.sup.rdedition,Ed.Arthur H.Kibbe(AmericanPharmaceuticalAssociation,Washington,D.C. 1999)。
[0065]于非经肠投药（parentala血inistration)，可使用于芝麻或花生油、水性 阳Gs(aqueouspolyethyleneglycols)或消毒水溶液中的本发明的寡核巧酸或其修饰序 列、载体、宿主与医药组合物的溶液。如果需要，此水溶液应适当地被缓冲，且所述液体稀释 剂W充足的食盐水或葡萄糖使其等渗。此等特定的水溶液特别适合作为静脉施用、肌内施 用、皮下施用与腹腔内施用。在此方面，通过所属领域中具有通常知识者所习知的标准技 术，可容易取得使用的无菌液态介质。在静脉注射，化合物可溶解于适当的静脉输送介质， 所述介质含有生理上可兼容的物质，例如，具有与生理环境兼容的缓冲酸碱值的无菌氯化 钢，如食盐水。使用适当的液态载剂、悬浮剂及其相似物的情况下，制备可注射的悬浮液。
[0066] 于局部递送，制备乳膏（creams)、凝胶（gels)、软膏（ointments)或气化喷雾软膏 (aerosolsointments)通常可通过油脂性基底，例如含有非挥发性油（fixedoil)或碳氨 化合物化y化ocarbons)，如白凡±林（whitepetrolatum)或矿物油，或吸收基底，例如，含 有无水吸收物质如无水羊毛脂（anhy化OUSlanolin)。在基底形成后，加入所欲浓度的活性 物质。
[0067] 乳膏一般包含油层（内在层），其油层通常含有非挥发性油、碳氨化合物及其相似 物，例如蜡、凡±林、矿物油及其相似物，W及水层（连续层），其水层含有水及任何水溶物 质，例如添加用盐（addedsalts)所述二层利用乳化剂来稳定，举例来说，接口活性剂，例如 十二烷基硫酸钢；亲水性胶体，例如阿拉伯胶±(acaciacolloidalclays)、蜂胶化eegum) 及其相似物。在乳化形成后，立即w所欲的浓度加入活性物质。
[006引凝胶包含选自下列的基底：油脂性基底、水或乳化悬浮液基底 (emulsion-suspensionbase),如前所述。在基底中添加在基底中形成基质（matrix)的胶 化剂，从而增加基底的黏性至半固态稠度（semisolidconsistency)。胶化剂的实例有径丙 甲纤维素化y化oxypropylcellulose),丙締酸聚合物（ac巧lieacidpolymers),及其相 似物。活性物质在加入胶化剂前，W所欲的浓度加入配方。
[0069] 于直肠输送，合适的药物组合物是，例如，局部制剂，栓剂或灌肠剂。栓剂有利地由 脂肪乳化剂或悬浮液来制备。
[0070] 在又一态样中，本发明设及一种专一性地分裂EGFR突变mRNA的方法，其包含使本 发明的寡核巧酸或其修饰序列在容许所述分子分裂所述mRNA的条件下接触所述mRNA。在 一实施例中，本发明设及一种专一性地分裂EGFRT790M突变mRNA的方法，其包含使本发明 的寡核巧酸或其修饰序列在容许所述分子分裂所述mRNA的条件下接触所述mRNA。在另一 实施例中，本发明设及一种专一性地分裂EGFRE746-A750缺失mRNA的方法，其包含使本发 明的寡核巧酸或其修饰序列在容许所述分子分裂所述mRNA的条件下接触所述mRNA。在又 一实施例中，本发明设及一种专一性地分裂EGFRL858R突变mRNA的方法，其包含使本发明 的寡核巧酸或其修饰序列在容许所述分子分裂所述mRNA的条件下接触所述mRNA。上述条 件为所属技术领域所熟知，且其包含生理条件。本发明更提供一种在细胞中专一性地分裂 EGFRT790M突变mRNA的方法，其包含使本发明的寡核巧酸或其修饰序列接触所述mRNA,从 而在细胞中专一性地分裂EGFRT790M突变mRNA。所述含有EGFRT790M突变mRNA的细胞 可W是，例如自然存在的细胞或转殖基因细胞。
[007。 本发明更提供一种在表达EGFR突变蛋白的细胞中专一性地抑制EGFR突变mRNA 表达的方法，其包含使本发明的寡核巧酸或其修饰序列接触所述细胞，从而在细胞中专一 性地抑制EGFR突变蛋白的表达。在一实施例中，本发明设及一种在表达EGFRT790M蛋白 的细胞中专一性地分裂EGFRT790M蛋白表达的方法，其包含使本发明的寡核巧酸或其修 饰序列接触所述细胞，从而在细胞中专一性地抑制EGFRT790M蛋白的表达。在另一实施 例中，本发明设及一种在表达EGFRT790M蛋白的细胞中专一性地抑制EGFRE746-A750缺 失mRNA表达的方法，其包含使本发明的寡核巧酸或其修饰序列接触所述细胞，从而在细胞 中专一性地抑制EGFRE746-A750缺失蛋白的表达。在另一实施例中，本发明设及一种在表 达EGFRT790M蛋白的细胞中专一性地抑制EGFRL858R突变mRNA表达的方法，其包含使本 发明的寡核巧酸或其修饰序列接触所述细胞，从而在细胞中专一性地抑制EGFRL858R蛋白 的表达。本发明更提供一种在个体细胞中专一性地抑制EGFRT790M蛋白表达的方法，其包 含对个体施用一量的本发明任一寡核巧酸，其有效地在所述个体细胞中专一性地抑制EGFR T790M蛋白的表达。
[0072] 在又一态样中，本发明提供一种在个体中治疗EGFR-依赖性癌症的方法，其包含 对个体施用有效量的本发明的寡核巧酸或其修饰序列。本发明更提供一种在个体中治疗EGFR-依赖性癌症的方法，其包含对个体施用TKI抑制剂或EGFR专一性抗体，W及本发明的 寡核巧酸。依据本发明，所述TKI抑制剂或EGFR专一性抗体，W及本发明的寡核巧酸可W 同时地、依序地或分别地施用。在一实施例中，所述EGFR-依赖性癌症为肺癌，较佳地为非 小细胞肺癌。依据本发明，本发明的寡核巧酸能作为手术后、放射线或化学治疗后的辅助性 疗法（曰djuventther曰py)。
[0073] 标祀疗法已被证实为有效且有前景的癌症治疗方式。数种惯常的致癌路径 (addictiveoncogenicpathway)设及突变基因，例如EGFR或KRAS。脱氧核糖核酸酶能作 用在任何基因，从而静默所述基因的表达至不同程度。除此之外，脱氧核糖核酸酶通过其 mRNA序列专一性，使其能够减量突变mRNA的表达同时维持其他mRNA的完整性。在此情况 下，对偶基因专一性的脱氧核糖核酸酶可攻击癌症细胞但不对正常细胞造成副作用。此外， 多种研究指出基因转录子变异体（transcriptvarients)可能扮演相反的角色，W及替代 性剪接（alternativesplicing)已知悉为癌症恶化的关键因子。例如，与细胞存活/调亡 相关的Bcl-x具有2种同功异构体（iso化rms)，Bcl-xL与Bd-xS。所述较长的Bd-xL同 功异构体作为细胞调亡抑制剂，然而较短的Bd-xS同功异构体作为细胞调亡活化剂。抗特 定剪接变异体的脱氧核糖核酸酶可专一的引发细胞调亡而非活化细胞存活路径。再者，脱 氧核糖核酸酶在siRNA难静默的mRNA表达上，其可作为抗mRNA核酸剂中的补充物。最近 研究显示，mRNA减量效率是根据mRNA在一特定细胞的衰变速率。换言之，短的转录子较难 被SiRNA静默。根据受质序列及其可接近性，8-17脱氧核糖核酸酶所观察的反应速率常数 能高达9. 2min1，然而，RISC的速率常数能高达1.Imin1。基于其快速的动力学反应，脱氧 核糖核酸酶可成为SiRNA的取代物。
[0074] 本发明的对偶基因专一性的脱氧核糖核酸酶通过其mRNA序列专一性，使突变 mRNA的表达减量同时维持其他mRNA的完整性。此对偶基因专一性的脱氧核糖核酸酶临床 上相较于传统酪胺酸激酶抑制剂更为有效且更耐受。本发明提供的抗EGFRT790M突变的 对偶基因专一性的脱氧核糖核酸酶，使EGFRT790MmRNA的表达减量同时维持EGFR野生 型mRNA的完整性。因此，此抗EGFRT790M突变的对偶基因专一性的脱氧核糖核酸酶可克 服T790M驱动的TKI抗药性并且伴随降低在非小细胞肺癌病患的正常细胞中不希望的副作 用。
[00巧]通过参考下述的实例能更了解本发明，但所属技术领域者应了解此详述的特定实 验仅为本发明的举例说明，W完整描述其后的申请专利范围。
【附图说明】
[0076] 图1显示抗EGFRT790M突变的对偶基因专一性的脱氧核糖核酸酶。
[0077] 图2显示抗EGFRT790M突变的对偶基因专一性的脱氧核糖核酸酶，在带有EGFR T790M的细胞中专一性地衰减EGFRmRNA表达量。
[0078] 图3显示抗EGFRT790M突变的对偶基因专一性的脱氧核糖核酸酶，在带有EGFR T790M的细胞中抑制EGFR总表达及EGFR下游讯息。
[0079] 图4显示抗EGFRT790M突变的对偶基因专一性的脱氧核糖核酸酶，在带有EGFR T790M的细胞中诱发细胞调亡。
[0080] 图5显示抗EGFRT790M突变的对偶基因专一性的脱氧核糖核酸酶，于活体内（in vivo)抑制带有EGFRT790M的肿瘤成长。
[0081] 图6显示胆固醇-TEG修饰的对偶基因专一性的脱氧核糖核酸酶的结构。
[0082] 图7显示对偶基因专一性的脱氧核糖核酸酶与Ahtinib的组合治疗。
[0083] 图8显示抗EGFRE746-A750缺失突变的对偶基因专一性的脱氧核糖核酸酶，在带 有EGFRE746-A750缺失的细胞中诱发细胞调亡。
[0084]图9显示抗EGFRL858R突变的对偶基因专一性的脱氧核糖核酸酶，在带有EGFR L858R的细胞中诱发细胞调亡。
[00财 图10显示DzT在T790M突变的细胞中，保有其对EGFRT790M表达与下游讯息的 抑止力。lOOnMDzC或DzT转染后72小时收获细胞。收获溶胞产物（lysate)的前15分 钟，添加10化g/mlEGF。溶胞产物W所示的一级抗体通过免疫墨点来分析。
[0086] 图11显示cDzT在EGF处理后的H1975TM/LR中，保有其对EGFRT790M表达与下 游讯息的抑止力。lOOnMcDzC或cDzT转染后72小时收获细胞。收获溶胞产物（lysate) 的前15分钟，添加10化g/mlEGF。溶胞产物W所示的一级抗体通过免疫墨点来分析。
[0087] 图12显示cDzT与BIBW-2992的组合处理显着地抑止化97TM/GA细胞中，STAT3、 AKT及E服的憐酸化。有或没有经BIBW-2992培养的cDzC或cDzT巧OnM)处理后的化97TM/ GA细胞的免疫墨点分析。
[0088] 图13显示cDzT与BIBW-2992的组合处理在带有EGFRT790M的细胞中，对细胞存 活率发挥加成抑制效果。cDzC或cDzT(25nM)处理及组合BIBW-299225nM( · )，50nM( )，7 5nM(★)，lOOnM(▲)，150nM( ▼)，or250nM( ?)处理的H1975TM/LR细胞（a,b)或化97TM/ GA细胞（c，d)的MIT分析（n= 3)。所述数据W平均值±标准偏差的方式呈现。所述结 果经Student'St-检定及CI计算分析。星号注记有统计上显着的差异。
[0089] 图14显示cDzT与BIBW-2992的加成效果。（a-c)组合处理静默EGFR讯息、引