基，tBu叔了基，ht是H苯基 甲基，DMF是N，N-二甲基醜亚胺，TBTU是0-苯并Η氮哇-N，N，Ν'，Ν' -四甲基脈四氣测酸， HOBt是1-居基苯并Η氮哇，DIC是二异丙基碳二亚胺，EDT是1，2-己二硫醇，MPS是琉基 己醇。
[0018] 下面结合具体实施例对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释 性，不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。
[001引 实施例1 ;Fmoc-Gly-RinkAmide树脂的合成 在反应柱中加入20克RinkAmide树脂（l.OOmmol/g)，加入DMF溶胀30分钟；溶胀 完后，用比例为2/10/88的DBU/六氨化巧/DMF溶液脱保护两次，分别为5min和8min, 然后用DMF洗六次。将Fmoc-Gly-0H(17.8g，60mmol)，册Bt(8.2g，60mmol)和Die(7.6g， 60mmol)用适量DMF溶解后加入至上述反应柱中，室温下反应120min。反应完成，真空抽 去反应液，用DMF洗六次，得到Fmoc-Gly-RinkAmide树脂。
[0020]实施例2 : Fmoc-Gly-切S(T;rt)-Tyr(tBu) -Phe-Gln(Trt)-Asn(T;rt)-切S(Trt) -Pro-Lys(Boc) -G1y-RinkAmide树脂的合成 取上述实施例1中制备得到的Fmoc-Gly-RinkAmide树脂，加入用比例为2/10/88的DBU/六氨化巧/DMF溶液脱保护两次，分别为5min和8min,然后用DMF洗六次。将 Fmoc-Lys度oc)-〇H(28. 1g，60mmol)，H0Bt(8.2g，60mmol)和DIC(7.6g，60mmol)用适量 DMF溶解后加入上述反应柱中，室温下反应120min。反应完成，真空抽去反应液，用DMF洗 六次，得到Fmoc-Lys(Boc) -Gly-RinkAmide树脂。
[002"同法依次将Fmoc-Pro-OH、Fmoc-切s (Trt)-OH、Fmoc-Asn (T;rt)-OH、Fmoc-Gln (T;rt) -OH、Fmoc-Phe-0H、Fmoc-Tyr (tBu) -OH、Fmoc-切s (T;rt) -OH、Fmoc-Gly-0H连 接到Fmoc-Lys (Boc) -Gly-RinkAmide树脂上，获得Fmoc-Gly-切s (T;rt) -TyrUBu)-Phe-Gl n (Trt) -Asn (T;rt)-切s (Trt) -Pro-Lys (Boc) -Gly-RinkAmide树脂，其中，氨基酸、HOBt、DIC 的投料比为树脂替代度Η倍。
[002引实施例3 : Boc-Gly-Gly-Gly-切S (T;rt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (T;rt) -Asn (T;rt)-切S (Trt) -Pro-Lys(Boc) -Gly-树脂的合成 取上述实施例2中制备得到的中间体 Fmoc-Gly-切S(T;rt)-Tyr(1:Bu) -Phe-Gln(T;rt)-Asn(T;rt)-切S(Trt) -Pro-Lys(Boc) -G1y-RinkAmide树脂，加入用比例为2/10/88的DBU/六氨化巧/DMF溶液脱保护两次，分别 为 5min和 8min,然后用DMF洗六次。将Boc-Gly-Gly-0H(14. 0g，60mmol)，H0Bt(8. 2邑， eOmmol)和Die(7.6g，60mmol)用适量DMF溶解后加入上述反应柱中，室温下反应120 min。反应完成，真空抽去反应液，用DMF洗六次，再用甲醇收缩Η次，真空干燥至恒重，获得 Boc-Gly-Gly-Gly-切S(T;rt)-TyrUBu) -Phe-Gln(Trt)-Asn(T;rt)-切S(Trt) -Pro-Lys度OC) -Gly-树脂。
[002引实施例4 ;线性特利加压素的制备 取实施例3中的特利加压素全肤树脂Boc-Gly-Gly-Gly-切s(T;rt)-Ty;r(1:Bu)-Phe-Gl η灯rt)-Asn(ht)-切S灯rt) -Pro-Lys度OC) -G1厂树脂，加入到裂解试剂[TFA/MPS/邸T/水 =85 : 5 : 5:5 (V/V)]( 10ml裂解试剂/克树脂）中，均匀揽拌反应2h，过滤除去树脂， 取滤液加入己離(滤液/己離体积比为1:6)沉淀，离必取沉淀反复用己離洗涂5次，抽干得 到线性特利加压素粗肤25. 7邑。
[0024]实施例5 ;特利加压素粗肤的制备 取实施例4制得的线性特利加压素粗品用纯水溶解并制成约2mg/ml的溶液，揽拌下 滴加10%的双氧水，揽拌反应90minEllman试剂检测无琉基反应后加TFA调抑至2. 5， 获得特利加压素粗肤溶液，检测特利加压素纯度为97. 2%，含目的肤18. 9g。
[00巧]实施例6 ;特利加压素粗肤的纯化 取实施例5获得的特利加压素溶液，过滤后采用反相液相色谱法进行纯化，80mm*250mm的C18反相色谱柱，检测波长设定为230nm，流动相系统为0. 1 %醋酸水溶液-己腊 溶液，梯度洗脱，分段收取纯度为99%的目的物，测定特利加压素目的肤17. 4g，总收率为 71%，蒸去己腊后，冷冻干燥获得特利加压素产品。
[0026]HPLC测定特利加压素产品的纯度为99. 5%，水分含量为3. 5%，醋酸含量为7. 6%，目 的肤含量100. 5%，质谱检测MS=1228 (M+)，工艺总收率为71%。
[0027]W上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来 说，在不脱离本发明原理的前提下，还可w做出若干改进和润饰，送些改进和润饰也应视为 本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种特利加压素的制备方法，包括如下步骤： 步骤1:获得中间体Ii: Fmoc-Gly-切S(T;rt)-TyrUBu) -Phe-Gln(Trt)-Asn(T;rt)-切S(Trt) -Pro-Lys(Boc)-GIy-树脂 步骤2;获得中间体Il : Boc-Gly-Gly-Gly-切S(T;rt)-Tyr(tBu) -Phe-Gln(Trt)-Asn(T;rt)-切S(Trt) -Pro-Lys(Boc)-Gl厂树脂 步骤3 ;中间体途裂解、环化获得特利加压素粗肤：步骤4 ;粗肤经分离纯化获得特利加压素纯品。2. 权利要求1所述的特利加压素的制备方法，其特征在于：所述步骤1和2采 用固相合成法，首先按照特利加压素的肤序，由C端到N端，依次将Fmoc-Gly-OH、 Fmoc-LyS(Boc)-〇H>Fmoc-Pr〇-〇H>Fmoc-Cys(Trt)-〇H>Fmoc-Asn(Trt)-〇H> Fmoc-Gln(T;rt) -OH、Fmoc-Phe-〇H、Fmoc-Tyr(tBu) -OH、Fmoc-切S(T;rt) -OH、Fmoc-Gly-OH联 接到固相树脂上，获得中间体：^;;再将8〇(3-617-617-地片段联接到脱去保护基团8〇(3的中间 体控上，获得中间体II。3. 权利要求2所述的特利加压素的制备方法，其特征在于：所述固相树脂为化nk Amide树脂、RinkAmide-MBHA树脂、RinkAmide-BHA树脂；脱保护试剂为DBU/ 脈巧/DMF 溶液，其中DBU占0. 5%~15%，脈巧占0. 5%~20%，溶于DMF中；偶联缩合试剂使用TBTU或 HOBt或皿TU，活化试剂使用DIC或DIEA。4. 权利要求1所述的特利加压素的制备方法，其特征在于：所述步骤3中，裂解试剂使 用混合酸试剂，混合酸试剂为TFA、水和其它捕获试剂混合物，捕获试剂选择邸T、MPS、苯酪 中的至少一种，TFA比例为80%~85%，捕获试剂比例为10%~15%，其余为水。5. 权利要求1所述的特利加压素的制备方法，其特征在于：所述步骤4中，环化过程用 弱碱调节环化液pH至7. 2^10. 0,加入双氧水或贿等氧化试剂环化，反应广3h，获得特利加 压素粗肤。
【专利摘要】本发明涉及一种特利加压素的制备方法，属于多肽合成技术领域，该方法采用片段缩合法合成特利加压素肽树脂，固相法合成3-12片段，将1-2片段联接到3-12固相氨基酸树脂上得到全肽树脂，裂解环化后得到特利加压素。由于采用Boc-Gly-Gly-OH为原料，降低了缺失甘氨酸杂质的产生，并减少了N末端脱除甘氨酸保护基团的操作步骤，产品纯度提高，总成本明显降低。
【IPC分类】C07K7/16, C07K1/04, C07K1/06, C07K1/20
【公开号】CN105367627
【申请号】CN201410434586
【发明人】陈阿娜, 刘标
【申请人】安徽工程大学
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2014年8月29日