测666 nm处发射荧光强度分别为115，55，27 ;向1 41核酸银溶液中以摩尔比0嫩出54=1:1加入85六溶液，可得BSA-DNA-Ag NCs 稳定体系。
[0014]实施例2:
将CCCACCCACCCTGAGCTC小分子DNA溶解于柠檬酸缓冲液(pH 7，10 mM)中，DNA浓度为
6.4μ Μ ;将DNA溶液水浴加热，慢慢升温至45 °C，加入硝酸银溶液，Ag+的浓度为100 μ Μ ;将上述溶液混合均匀后继续升温至DNA序列的Tm值75 V，在该温度下稳定3分钟，缓慢降至室温，降温时间为3小时，向上述溶液中加入NaBH4溶液，NaBH4的浓度为100 μ Μ，混合均匀后于室温避光保存24 h即得核酸银产物(标记为DNA-Ag NCs);配制2 μ M、1 μ Μ、0.5μ Μ DNA-AgNCs (溶剂为柠檬酸缓冲液)溶液，用600 nm红光激发，未检测到荧光发射。
[0015]实施例3:
将CCCACCCACCCTGAGCTC小分子DNA溶解于柠檬酸缓冲液(pH 7，10 mM)中，DNA浓度为
6.4μ Μ ;将DNA溶液水浴加热，慢慢升温至70 °C，加入硝酸银溶液，Ag+的浓度为300 μ Μ ;将上述溶液混合均匀后继续升温至DNA序列的Tm值75 V，在该温度下稳定3分钟，缓慢降至室温，降温时间为3小时，向上述溶液中加入NaBH4溶液，NaBH4的浓度为100 μ Μ，混合均匀后于室温避光保存24 h即得核酸银产物(标记为DNA-Ag NCs);配制2 μ M、1 μ Μ、0.5μ Μ DNA-AgNCs (溶剂为柠檬酸缓冲液)溶液，用600 nm红光激发，未检测到荧光发射。
[0016]实施例4:
将CCCACCCACCCTGAGCTC小分子DNA溶解于柠檬酸缓冲液(pH 7，10 mM)中，DNA浓度为
6.4μ Μ ;将DNA溶液水浴加热，慢慢升温至60 °C，加入硝酸银溶液，Ag+的浓度为200 μ Μ ;将上述溶液混合均匀后继续升温至DNA序列的Tm值75 V，在该温度下稳定1分钟，缓慢降至室温，降温时间为3小时，向上述溶液中加入NaBH4溶液，NaBH 4的浓度为300 μ M，混合均匀后于室温避光保存24 h即得核酸银产物(标记为DNA-Ag NCs);配制2 μ M、1 μ Μ、0.5μ Μ DNA-AgNCs (溶剂为柠檬酸缓冲液)溶液，测666 nm处发射荧光强度分别为50，23，7。
[0017]实施例5:
将CCCACCCACCCTGAGCTC小分子DNA溶解于柠檬酸缓冲液(pH 7，10 mM)中，DNA浓度为
6.4μ Μ ;将DNA溶液水浴加热，慢慢升温至60 °C，加入硝酸银溶液，Ag+的浓度为200 μ Μ ;将上述溶液混合均匀后继续升温至DNA序列的Tm值75 V，在该温度下稳定10分钟，缓慢降至室温，降温时间为3小时，向上述溶液中加入NaBH4溶液，NaBH4的浓度为100 μ Μ，混合均匀后于室温避光保存24 h即得核酸银产物(标记为DNA-Ag NCs);配制2 μ M、1 μ Μ、0.5μ Μ DNA-AgNCs (溶剂为柠檬酸缓冲液)溶液，用600 nm红光激发，未检测到荧光发射。
[0018]铁离子含量的检测:以实施例1得到的化合物为受试化合物
选择浓度为 1 y M BSA-DNA-AgNCs ( λ ex=600 nm, λ em=666 nm)，用 Fe (N03) 3进行滴定，随着Fe(N03)3浓度的增加，荧光强度降低(如图1)。
[0019]牛奶中铁离子含量的检测:以实施例1得到的化合物为受试化合物
选择浓度为1 μ M DNA-AgNCs ( λ ex=600 nm, λ em=666 nm)，用含有铁离子的某品牌奶粉进行滴定，记录随着铁含量的增加荧光强度的变化。(如图2)。
【主权项】
1.一种荧光核酸银，其特征在于:所述的荧光核酸银为荧光DNA纳米银簇，标记为DNA-AgNCs ;纳米银簇的大小为3 nm ;在柠檬酸缓冲液中显示淡黄色，用600 nm红光激发，666 nm处有较强的荧光发射，以联吡啶钌为对照，荧光量子产率为0.2。2.如权利要求1所述的一种荧光核酸银的制备方法，其特征在于制备方法按照下述步骤进行:以一种CCCACCCACCCTGAGCTC小分子核酸为模版，将CCC ACCCACCCTGAGCTC小分子DNA溶解于柠檬酸缓冲液中，将DNA溶液水浴加热，慢慢升温至45~70 °C，加入硝酸银溶液，混合均匀后继续升温至DNA序列的Tm值75 °C并在该温度下稳定1~10分钟，缓慢降至室温，向上述溶液中加入NaBH4溶液，混合均匀后于室温避光保存24 h即得核酸银产物。3.如权利要求2所述的一种荧光核酸银的制备方法，其特征在于:所述的柠檬酸缓冲液，pH值为7，浓度10 mM。4.如权利要求2所述的一种荧光核酸银的制备方法，其特征在于:所述小分子核酸与八区+的浓度分别为6.4 μΜ和100~300 μΜο5.如权利要求4所述的一种荧光核酸银的制备方法，其特征在于:所述Ag+的浓度为200 μΜο6.如权利要求2所述的一种荧光核酸银的制备方法，其特征在于:所述升温的温度为60 °C ;所述稳定时间为3min ;所述降温时间为3小时。7.如权利要求2所述的一种荧光核酸银的制备方法，其特征在于:所述NaBH4S液的浓度为100~300 μ Μ ;所述避光保存的时间为24小时。8.如权利要求7所述的一种荧光核酸银的制备方法，其特征在于:所述NaBH4S液的浓度为200 μΜο9.以如权利要求1所述的荧光核酸银和牛血清白蛋白组装形成的BSA-DNA- AgNCs体系，其特征在于:将荧光核酸银和柠檬酸缓冲液混合得到核酸银溶液，核酸银溶液中以摩尔比DNA:BSA=1:1加入BSA溶液，可得BSA_DNA_Ag NCs稳定荧光体系。10.如权利要求9所述的BSA-DNA-AgNCs体系用于定性和定量分析奶粉中铁元素的含量。
【专利摘要】本发明属于核酸试剂制备和食品质量检测领域，特指一种荧光核酸银及其制备方法和应用。所述的荧光核酸银为荧光DNA纳米银簇，标记为DNA-AgNCs；纳米银簇的大小为3nm；在柠檬酸缓冲液中显示淡黄色，用600nm红光激发，666nm处有较强的荧光发射，以联吡啶钌为对照，荧光量子产率为0.2。将荧光核酸银和柠檬酸缓冲液混合得到核酸银溶液，核酸银溶液中以摩尔比DNA:BSA=1:1加入BSA溶液，可得BSA-DNA-Ag？NCs稳定荧光体系，可用于定性和定量分析奶粉中铁元素的含量的用途。
【IPC分类】G01N21/64, C09K11/06, C12N15/11
【公开号】CN105400780
【申请号】CN201510686946
【发明人】陈秋云, 朱海涛, 陈甜甜
【申请人】江苏大学
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年10月22日