用于癌转移的诊断、预后和治疗的方法

用于癌转移的诊断、预后和治疗的方法
【专利说明】用于癌转移的诊断、预后和治疗的方法
[0001] 本发明的目的
[0002] 本发明除了用于产生用于患有癌症，特别是乳腺癌、结肠癌、肺癌、肾癌或甲状腺 癌的受试者的定制疗法的方法外，还涉及确定受试者患癌症，特别是乳腺癌、结肠癌、肺癌、 肾癌或甲状腺癌，将发展转移癌的可能性的方法。此类方法由测定一组其表达与c-MAF基因 表达相关的基因的表达水平组成。本发明还包括PTHLH和P0DXL抑制剂以及RERG激活剂在治 疗和/或预防的转移癌，特别是乳腺癌、结肠癌、肺癌、肾癌或甲状腺癌中的用途。
[0003] 发明背景
[0004] 乳腺癌是是全世界第二大癌症类型（10.4% ;排在肺癌之后)和第五大癌症引起的 死亡原因（排在肺癌、胃癌、肝癌和结肠癌后）。乳腺癌是妇女最常见的死亡原因吗？在2005 年，乳腺癌在全世界导致502，000例死亡（7 %的癌症相关死亡;几乎1 %的所有死亡人数）。 全球病例的数目从1970年代以来显著增加，这种现象部分地归咎于西方世界的现代生活方 式。
[0005] 所有细胞在其表面上、细胞质和细胞核中具有受体。某些化学信使诸如激素结合 这些受体，并且这导致细胞的变化。3个主要受体可影响乳腺癌细胞:雌激素受体(ER)、孕酮 受体(PR)和HER2/neu。为了命名含有这些受体之一的细胞，当受体存在时使用正号，当其不 存在时使用负号：ER阳性(ER+)、ER阴性(ER-)、PR+ (阳性）、PR阴性(PR-)、HER2+(阳性）和 HER2阴性(HER2)。受体状态已成为所有乳腺癌形式的重要评估，因为其决定特定治疗诸如 他莫昔芬或曲妥珠单抗的使用适合性。雌激素受体(ER)的α同种型在约65%的经诊断的乳 腺癌病例中过表达。该类型的乳腺癌被称为"ER-阳性"（ER+)。在该病例中，雌激素与ER的结 合促进癌细胞哺乳动物细胞的增殖。癌性ER+细胞高度依赖于该刺激来扩散，这是ER目前用 作治疗靶的原因。
[0006] 具有实体瘤的癌症患者的大多数死亡是由晚期转移引起的事实使得理解使得肿 瘤能够转移的分子和细胞机制至关重要。最近的公开案除了举例说明转移性细胞类型如何 展示对某些器官的向性以外，还举例说明转移是如何由对其知之甚少的复杂机制引起的。 这些组织特异性转移细胞具有一系列获得的功能，所述功能使得它们能够定殖在特定器官 中。
[0007] 专利申请ΕΡ1961825-Α1描述了用于预测转移性乳腺癌至骨、肺、肝和脑中出现的 方法，其由确定相对于对照样品中的对应表达水平癌性组织样品中一个或多个标志物(包 括c-MAF)的表达水平组成。此外，该文献要求同时确定几个基因以确定乳腺癌患者的存活 期，并且基因标签预测无骨转移存活期的能力之间的关系在统计上是不显著的。
[0008] Bos，P. D .，等人[Nature，2009，459:1005-1009]描述参与乳腺癌至脑转移的基因。 [0009]专利申请US2005/0181375描述用于基于许多在转移性肿瘤(特别是转移至脑的肿 瘤）中被上调或下调的基因的表达水平的检测来检测转移性乳腺癌的方法。
[0010]国际专利申请W02010/000907描述了用作乳腺癌患者的远处转移的基因组预测者 的遗传标志。
[0011]然而，存在对诊断和/或预测患有特定乳腺癌诸如ER-或ER+乳腺癌的患者是否将 发生转移，从而允许对患有所述癌症的受试者使用适当疗法的遗传标志物的现有技术水平 需要。新的预后因子的鉴定将用作选择最适当的治疗的指导。
[0012] 发明概述
[0013] 本发明的作者已鉴定了其表达因 c-MAF基因的表达的变化而在乳腺癌样品中增加 或减少的一组基因。通过功能获得实验和相关临床数据，作者已确认了这些基因基因的作 用，特别是其表达与c-MAF的表达反相关的RERG基因的作用，以及其表达与c-MAF表达直接 相关的PTHLH和P0DXL基因的作用，诸如ER+乳腺癌转移至骨的预后标志物。
[0014] 因此，在第一方面，本发明涉及用于预测受试者的转移癌，特别是乳腺癌、结肠癌、 肺癌、肾癌和甲状腺癌，尤其是乳腺癌的体外方法，其由测定一个或多个其表达响应所述肿 瘤的C-MAF表达水平的升高而被调节的基因在癌组织样品中的表达水平组成，其中相对于 标准值的上述一个或多个基因的改变的表达水平是发生转移癌的高风险的指征。
[0015] 本发明的第二方面涉及用于产生用于患有癌症，特别是乳腺癌、结肠癌、肺癌、肾 癌或甲状腺癌，尤其是乳腺癌的受试者的定制疗法的体外方法，其由测定一个或多个其表 达响应所述肿瘤的c-MAF表达水平的升高而被调节的基因在癌组织样品中的表达水平组 成，其中上述一个或多个基因相对于标准值的改变的表达水平是所述受试者容易接受旨在 防止转移的疗法的高风险的指征。
[0016] 本发明的第三方面涉及抑制基因的表达或该基因的表达产物的活性的试剂用于 制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防转移癌，特别是乳腺癌、结肠癌、肺癌、肾癌 或甲状腺癌，尤其是乳腺癌，其中所述基因的特点在于其在肿瘤性细胞(特别是乳腺癌细 胞、结肠癌细胞、肺癌细胞、肾癌细胞和甲状腺细胞，尤其是乳腺癌细胞）中的表达响应这些 细胞中的c-MAF表达水平的升高而增加，或响应这些细胞中的c-MAF表达水平的降低而减少 的事实。
[0017] 本发明的第四方面涉及刺激刺激基因的表达或该基因的表达产物的活性的试剂 用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防转移癌，特别是乳腺癌、结肠癌、肺癌、 肾癌和甲状腺癌，尤其是乳腺癌，其中所述基因的特征在于其在肿瘤性细胞(特别是乳腺癌 细胞、结肠癌细胞、肺癌细胞、肾癌细胞和甲状腺细胞，尤其是乳腺癌细胞）中的表达响应这 些细胞中的c-MAF表达水平的升高而增加，或响应这些细胞中的c-MAF表达水平的降低而减 少的事实。
[0018] 本发明的最终方面涉及用于鉴定患有癌症，特别是乳腺癌、结肠癌、肺癌、肾癌或 甲状腺癌，尤其是乳腺癌的受试者中的标志基因的体外方法，所述方法包括：
[0019] ⑴原发癌(特别是乳腺癌)肿瘤样品中的候选者和c-MAF基因的表达水平的测定， 和
[0020] (ii)测定癌细胞，特别是乳腺癌细胞的群体中的所述候选基因的表达水平响应C- MAF基因表达的调节的变化
[0021] 其中所述基因的表达水平与原发癌(特别是乳腺癌)肿瘤样品中的c-MAF表达在统 计上显著相关，并且响应c-MAF基因表达的调节的表达的变化与所述基因的水平的变化在 统计上显著相关，是所述基因为受试者发生转移的倾向性的标志物的指征。
[0022] 附图简述
[0023]图1.(A)增加的（左)或减少的（右)MBP基因与ER+乳腺癌患者中的骨转移的表型的 关联性（"GSEA"算法）。(B)增加的（左)或减少的（右)MBP基因与源自原发性乳腺癌肿瘤的一 系列至骨、肺、肝和脑的转移中的骨转移的表型的关联性（"GSEA"算法）。对于至肺、脑和肝 的转移已进行相同的对增加的基因的逼近。
[0024] 图2. (A)使用适度转移的（亲代)ER+、MCF7乳腺癌细胞以及对骨是高度转移的其衍 生物(B〇M2)在异种移植类型的实验性小鼠模型中进行的转移病灶的Ki-67表达水平、增殖 标志物的分析。（B)使用定量RT-PCR进行的MAF表达与RERG基因之间的关系的验证。（C)使用 具有或不具有MAF的B〇M2细胞在小鼠中进行的骨转移。通过免疫组织化学定量Ki-67信号和 半胱天冬酶-3活性。（D)在对骨是高度转移的细胞中诱导了增加的RERG。将具有RERG表达的 细胞衍生物注射进小鼠的左心室，并使用生物发光成像技术现场和实时分析骨的定殖以验 证在MAF存在的情况下RERG在ER+乳腺癌转移至骨中的贡献。
[0025] 图3. (A)使用X射线对用表征不同MAF水平的不同细胞类型注射的小鼠中的溶骨性 骨转移的数目的定量。(B)由表征不同MAF水平的细胞引起的损伤的转移性病灶的周边上的 TRAP(抗酒石酸碱性磷酸酶)细胞、破骨细胞标志物的数目的定量。（C)使用定量RT-PCR对 MAF表达与PTHLH基因之间的关系的验证。（D)使用干细胞对体外破骨细胞的分化进行的实 验。在RANK配体、G-CSF和来自不同群体的培养基存在的情况下进行分化过程。亲代细胞、表 达短的和长的MAF同种型的亲代细胞以及在中和PTHLH功能的肽存在的情况下后者细胞。 (E)小鼠的实验性转移模型中的骨转移实验。注射具有或不具有c-MAF表达的细胞，并且在 后一种情况下，每日2次向小鼠的左心室接种腹膜内拮抗剂PTHLH肽（12微克/小鼠/日）的 组，由此定量病灶的外观和至骨的生长。左边的图举例说明终点信号的强度。右边的图指定 每一个组中的溶骨性病变的数目。(F)在左边，图框显示X射线图像（白色区域显示溶骨性病 变、缺失骨)和代表(E)中描述的组的骨的TRAP+染色(破骨细胞标志物）。白色三角形表示破 骨细胞。在右边，图框显示通过周长标准化的TRAP信号的面积。
[0026]图4.(A)通过荧光定量结合于一层骨髓来源的细胞(BMSC)的表达高（shControl) 或降低的（shMAF)c-MAF基因水平的细胞的数目。（B)通过荧光定量结合于一层细胞外肺基 质蛋白诸如纤连蛋白的的表达高（811(：〇11廿〇1)或降低的（此1^?#1或#2)(3-獻?基因水平的细 胞的数目。该情况显示相反的对骨髓细胞的结合的作用。（C)其表达随c-MAF表达的变化而 变化并且已通过RT-PCR验证的基因的小组。其中之一是P0DXL，能够参与短暂微弱的细胞间 结合过程的来自选择蛋白家族(糖蛋白）的蛋白的基因。（D)P0DXL基因负责表达c-MAF的癌 性乳腺细胞与骨髓细胞结合的功能验证。与整联蛋白介导的附着的中性(RGES)或阻断性 (RGDS)肽的竞争效应的比较。该过程是特异性，因为其在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中未重 现。
[0027]发明详述
[0028] 一般表达和术语的定义
[0029]如本发明中所用，"c-MAF抑制剂"是指能够部分或完全抑制c-MAF基因表达，阻止 所述基因的表达发生(破坏c-MAF基因的转录和/或阻断mRNA从c-MAF基因表达的翻译)和直 接抑制c-MAF蛋白活性的任何分子。c-MAF基因表达抑制剂可使用方法来鉴定，所述方法基 于假定的抑制剂阻断c-MAF促进体外细胞增殖的能力（如在国际专利申请W02005/046731中 举例说明的）、基于假定的抑制剂在表达c-MAF的细胞中阻断在细胞周期蛋白D2启动子和含 有c-MAF应答区域(MARE或c-MAF应答元件）的启动子控制下的报告基因的转录能力的能力 (如W02008098351中描述的），或基于假定的抑制剂在表达NFATc2和c-MAF的细胞中阻断在 响应利用PMA/离子霉素的刺激的IL-4启动子控制下的基因表达的能力（如US2009048117A 中描述的）。
[0030]在本发明的说明书中，"抑制剂抗体"意指能够以特定方式结合表达产物并且抑制 该蛋白的更多功能之一的抗体。
[0031 ] 术语"小干扰RNA" ( "siRNA"）是指诱导RNA干扰的小RNA抑制剂的双链体。这些分子 在长度上可变化(通常为18-30个碱基对)并且在反义链含有不同程度的与其祀mRNA的互补 性。某些(但非全部)siRNA以在有义链和/或反义链的5'或3'末端上的凸出未配对碱基为特 征。术语"siRNA"包括两个分开链的双链体。如本文中所用的，siRNA分子不限于RNA分子，而 且还包括具有一个或多个经化学修饰的核苷酸诸如吗啉类的核酸。
[0032]如本文中所用的，术语"shRNA"或"短发夹RNA"是指其中两条链通过链结合而不破 坏链的3 '末端与另一条链的5 '末端之间形成双链体结构的核苷酸的dsRNA。
[0033] 术语"增加的基因表达"是指基因的表达水平相对于标准或对照值(其对应于相同 基因在对照样品中的表达水平)较高的事实。根据本发明，当患者的样品的水平被升高至少 5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35 %、至少40%、至少45%、 至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80% :至少85%、至少 90%、至少95%、至少100%、至少110%、至少120%、至少130%、至少140%、至少150%或更 多时，基因的表达水平被认为相对于标准值较高。
[0034] 如本发明中所用，"c-MAF"是指也称为"v-maf肌腱纤维肉瘤癌基因同源物"（禽 类）、MAF或MGC71685)的基因，其为含有起同二聚体或异二聚体作用的亮氨酸拉链的转录因 子。取决于DNA结合位点，编码的蛋白质可以是转录激活物或阻遏物。编码c-MAF的DNA序列 在登录号NG_016440下描述于NCBI数据库（对应于2011年12月18日的NCBI的版本）中。前述 DNA序列后跟2个信使RNA的转录，其每一个将让位于c-MAF蛋白同种型，同种型α或1(对应于 长的c-MAF同种型）和同种型β或2(对应于短的c-MAF同种型）之一。每一个前述同种型的互 补DNA序列分别在登录号ΝΜ_005360.4和ΝΜ_001031804.2下描述于NCBI数据库(对应于2011 年12月18日的NCBI的版本）中。
[0035] 术语"癌症"或"癌"或"肿瘤"是指特征在于由能够侵入邻近组织并扩散至远端器 官的异常细胞的不受控制的增殖的疾病。该术语包括，但不限于乳腺、心脏、小肠、结肠、脾、 肾、膀胱、头、颈、卵巢、前列腺、脑、胰腺、皮肤、骨、骨髓、血液、胸腺、子宫、睾丸、肝胆系统和 肝脏的癌症;此外还有肿瘤诸如，但不限于腺瘤、血管肉瘤、星形细胞瘤、上皮癌、生殖细胞 瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、血管内皮瘤、血管肉瘤、血肿、肝母细胞瘤、白血病、淋巴瘤、 髓母细胞瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤、肝胆癌、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤 和畸胎瘤。此外、该术语包括肢端雀斑痣样黑素瘤、光化性角化病腺癌、腺样囊性癌、腺瘤、 腺肉瘤、腺鳞状细胞癌、星形细胞瘤、前庭大腺癌、基底细胞癌、支气管腺癌、毛细血管类癌、 癌、癌肉瘤、胆管管型肝癌、囊腺瘤、内胚窦瘤、子宫内膜增生、子宫内膜间质肉瘤、子宫内膜 样腺癌、室管膜肉瘤、尤因肉瘤、局灶性结节性增生、生殖细胞肿瘤、成胶质细胞瘤、胰高血 糖素瘤、血管母细胞瘤、血管内皮瘤、血管瘤、肝腺瘤、肝腺瘤病(hepatic adenomastosis)、 肝细胞癌、肝胆癌、胰岛瘤、上皮内赘瘤、鳞状细胞上皮内赘瘤、侵袭性鳞状细胞癌、大细胞 癌、平滑肌肉瘤、黑色素瘤、恶性黑色素瘤、恶性间皮肿瘤、髓母细胞瘤、髓上皮瘤、粘液表皮 样癌、神经母细胞瘤、神经上皮腺癌、结节性黑素瘤、骨肉瘤、乳头状浆液性腺癌、垂体瘤、浆 细胞瘤、假性肉瘤、肺母细胞瘤、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤、浆液性癌、 小细胞癌、软组织癌、生长抑素分泌肿瘤、鳞状细胞癌、鳞状细胞癌、未分化癌、眼色素层黑 素瘤、疣状癌、胰腺瘤、Wi lm瘤、脑内癌、头颈癌、直肠癌、星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、小细胞 癌和非小细胞癌、转移性黑素瘤、雄激素非依赖性转移性前列腺癌、雄激素依赖性转移性前 列腺癌和乳腺癌。关于本具体发明，癌症是指乳腺癌、结肠癌、肺癌、肾癌或甲状腺癌，尤其 是乳腺癌。
[0036] 表达"结肠癌"是指结肠、直肠和阑尾细胞的任何恶性增殖性疾病。术语结肠癌包 括任何下列疾病的分期：
[0037] -第0期:肠的最内层中的隐蔽性癌 [0038]-第1期:肠的内层中的癌症
[0039]-第2期：已通过结肠的肌肉壁扩散的癌症 [0040]-第3期：已扩散至淋巴结的癌症 [0041]-第4期：已扩散至其它器官的癌症。
[0042]表达"乳腺癌"、"乳房癌"或"胸部癌(bosom cancer)"是指在乳房组织中产生的癌 症的类型。术语"乳腺癌"包括在根据TM系统的分期下的分类的癌症。预后与分期的分类结 果密切相关，并且分期的分类也用于在临床试验和医学实践中分配患者治疗。与分期的分 类相关的信息如下：
[0043] · TX:不能评估原发肿瘤:T0:没有原发肿瘤的证据。TIVE原位癌，非侵袭性T1:月中 瘤为2.0cm或更小。T2:肿瘤大于2cm但不大于5cm。T3:肿瘤大于5cm。T4:在胸壁或皮肤上生 长的任何尺寸的肿瘤，炎症性乳腺癌。
[0044] · NX:不能评估相邻淋巴结。N0:癌症还未扩散至淋巴结。N1:癌症已扩散至1至3个 腋淋巴结或1个内乳淋巴结。N2:癌症已扩散至4至9个腋淋巴结或多个内乳淋巴结。N3:适用 于下面的一项：
[0045] 癌症已扩散至10个或更多个腋淋巴结，或癌症已扩散至锁骨下方的淋巴结，或 癌症已扩散至锁骨上方的淋巴结，或癌症正影响腋淋巴结并且已扩散至内乳淋巴结，或癌 症影响4个或更多个腋淋巴结，并且在内乳淋巴结中或在前哨淋巴结活检组织中发现最少 量的癌症。
[0046] · Max:不能评估远端扩展(转移）的存在。M0:不存在远端扩展。Ml:至远端器官的 扩展已发生，但不包括锁骨上淋巴结。
[0047] 表达"肺癌"或"肺的癌症"或"肺肿瘤"是指肺的任何癌，包括但不限于非小细胞肺 癌、非小红细胞肺癌(11〇11-111；[(31'0071:;[(3肺癌）(吧(^0和小细胞肺癌。
[0048] 表达"肾癌"或"肾脏癌"或"肾肿瘤"是指肾细胞的任何恶生增殖性障碍。
[0049] 表达"甲状腺癌症"或"甲状腺癌"是指甲状腺的任何增殖性疾病，包括，但不限于 乳头状甲状腺癌和滤泡性甲状腺癌。
[0050] 如本文中针对两个事件(修饰基因的表达水平和C-MAF基因的表达水平)所用，"塗 计上显著的相关性"意指存在这些事件相关并且变化不是随机的高度可能性。
[0051 ]表达"测定转移癌在患有癌症(特别是乳腺癌、结肠癌、肺癌、肾癌或甲状腺癌）的 受试者，优选地在患有乳腺癌的受试者中发生的可能"，是指使用证据确定影响所述受试者 的癌症是否会在将来发生转移。在本发明的说明书中，指数是其表达响应c-MAF表达水平相 对于标准值的升高而被调节的一个或多个基因的表达水平的变化。"基因的表达水平的变 化"是指相对于标准值的基因的表达水平的向上或向下变化。因此，患有癌症，特别是乳腺 癌、结肠癌、肺癌、肾癌或甲状腺癌，尤其是乳腺癌的受试者中转移发生的"高"或"增加的" 或"增强的"可能性归因于其表达水平响应c-MAF表达水平相对于标准值的升高而被调节的 一个或多个基因的表达水平的变化。
[0052] 术语"减少的基因表达"是指当基因的表达水平相对于标准或对照值(其对应于相 同基因在对照样品中的表达水平)下降或降低时。为了本发明的目的，当患者样品中的水平 下降至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至 少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少 85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少110%、至少120%、至少130%、至少140%、至少 150%或更多时，基因相对于标准值的表达水平被认为是减少。
[0053] 如本发明中所用，术语"标志基因"或"信息基因"是指以差异方式在具有不同表型 的群体表达其本身并且其差异表达(单独地或与其它基因组合地）与特定表型的相关性达 到比随机预期的大的程度的基因。
[0054] "P0DXL基因 "，也称为足糖萼蛋白样，是指编码形成唾液粘蛋白家族的部分，并且 为肾小球上皮足突细胞的重要组分的蛋白质的基因。足细胞是具有覆盖肾小球基底膜的外 表面的指状组合型突起的高度分化的上皮细胞。引起该蛋白编码的其它生物活性包括:膜- 蛋白复合物中的所述蛋白与细胞内细胞骨架元件的Na+/H+交换体的调节因子的结合以及 其对L-选择蛋白的结合。两种转录P0DXL变体的说明已在登录号ΝΜ_001018111.2 (变体1)和 NM_005397.3(变体2)下提供于NCBI数据库（2013年3月3日版）中。由P0DXL基因编码的蛋白 质的序列于登录号NP_001018121.1(同种型1)和NP_005388.2(同种型2)下提交于NCBI数据 库（2013年3月3日版）中。
[0055] "PTHLH"（甲状旁腺激素样激素基因）位于人12号染色体中，并且编码属于称为 PTHrP(甲状旁腺激素相关蛋白）的属于甲状旁腺激素家族的蛋白质。该蛋白除在乳腺和牙 形成过程中调节上皮与间充质之间的相互作用外，还调节软骨内骨发育。该激素的受体称 为PTHR1。与PTHLH相关的DNA序列在登录号NG_023197下提交于NCBI数据库中（2011年11月6 日版）。4种PTHLH转录物变体的说明在登录号NM_198965.1 (变体1)、NM_002820.2(变体2)、 NM_198964.1 (变体3)和NM_198966.1 (变体4)下提交于NCBI数据库(2011年11月20日）中。同 样地，由PTHLH基因编码的蛋白质序列在登录号AAA60360.1 (形式A)、AAA60358.1 (形式B)和 AAA60359.1 (形式C)下提供于NCBI数据库（1995年1月10日版）中。
[0056] "RERG基因 "，也称为受Ras样雌激素调节的生长抑制剂，是指编码形成RAS GTP酶 超家族的部分蛋白，并且用作抗细胞增殖和肿瘤形成的抑制剂的基因。已将两种转录RERG 变体的说明在登录号NM_〇32918.2(变体1)和NM_001190726.1(变体2)下提交于NCBI数据库 (2011年11月28日版）中。已将由RERG基因编码的蛋白质的序列在登录号NP_116307(同种型 1)和NP_001177655(同种型2)下提供于NCBI数据库（（2011年11月28)中。
[0057] "转移"是癌源从所述癌症的初始位置至另一个器官的扩散。这通常通过血液或淋 巴系统发生。当癌细胞扩散并引起新的肿瘤时，这称为继发性肿瘤或转移瘤。形成第二肿瘤 的癌细胞与原始肿瘤中的那些癌细胞很相像。例如，如果乳腺癌扩散(转移)至肺，则第二肿 瘤包含恶性乳腺癌细胞。肺中的疾病称为转移性乳腺癌(非肺癌）。在本特定发明的情况下， 转移是已扩散(转移)至骨的乳腺癌、结肠癌、肺癌、肾癌或甲状腺癌。对于本发明的甚至更 具体的方面，转移是已扩散(转移)至骨的ER+