若培养基中出现微生物菌落，则说明细胞样本中含有微生物，该细胞样品已被微生物污染， 不能再用于细胞治疗;若培养基中未出现微生物菌落，则说明细胞样本中不含有微生物，该 细胞样品可用于细胞治疗。本发明对所述细胞样本在所述培养基中的培养方式和培养条件 没有特别限定，本领域技术人员根据实际培养的细胞，选择合适培养方式和培养条件即可。
[0031] 为更清楚起见，下面通过以下实施例进行详细说明。
[0032] 实施例1
[0033] 制备微生物培养基
[0034] a)、先准确称量35g琼脂干燥粉末（购于广东环凯微生物科技有限公司），lg氯化 钠，3g酵母膏(购于广东环凯微生物科技有限公司）溶于1000ml蒸馏水中，搅拌均匀，封口于 121°C中高压灭菌30min;
[0035] b)、灭菌结束后待培养基温度降至50°C，在超净工作台中加入过筛除菌后的5g葡 萄糖、3ηι1β-内酰胺诘抗剂(购于广东环凯微生物科技有限公司）、3ml氨基糖苷类诘抗剂(购 于广东环凯微生物科技有限公司）和300yL酚红，搅拌均匀；
[0036] c)、待培养基温度降到40°C，再加入5ml小牛血清、1.5g B族维生素、1.5g维生素 D、 lmL非必需氨基酸(购于英潍捷基贸易有限公司），搅拌均匀，得到微生物培养基；
[0037] d)、调节制得的微生物培养基的pH值至7.3,将培养基倾倒至9cm平板，待完全凝 固，转移至4°C保存。
[0038] 实施例2 [0039]制备微生物培养基
[0040] a)、先准确称量25g琼脂干燥粉末（购于广东环凯微生物科技有限公司），3g氯化 钠，lg酵母膏(购于广东环凯微生物科技有限公司）溶于lOOOrnl蒸馏水中，搅拌均匀，封口于 121°C中高压灭菌30min;
[0041] b)、灭菌结束后待培养基温度降至50°C，在超净工作台中加入过筛除菌后的10g葡 萄糖、Ιηι?β-内酰胺诘抗剂(购于广东环凯微生物科技有限公司）、5ml氨基糖苷类诘抗剂(购 于广东环凯微生物科技有限公司）和500yL酚红，搅拌均匀；
[0042] c)、待培养基温度降到40°C，再加入lml小牛血清、3g B族维生素、lg维生素 D、5mL 非必需氨基酸(购于英潍捷基贸易有限公司），搅拌均匀，得到微生物培养基；
[0043] d)、调节制得的微生物培养基的pH值至7.3,将培养基倾倒至9cm平板，待完全凝 固，转移至4°C保存。
[0044] 实施例3
[0045] 制备微生物培养基
[0046] a)、先准确称量40g琼脂干燥粉末(购于广东环凯微生物科技有限公司），0.5g氯化 钠，5g酵母膏(购于广东环凯微生物科技有限公司）溶于1000ml蒸馏水中，搅拌均匀，封口于 121°C中高压灭菌30min;
[0047] b)、灭菌结束后待培养基温度降至50°C，在超净工作台中加入过筛除菌后的lg葡 萄糖、5ηι1β-内酰胺诘抗剂(购于广东环凯微生物科技有限公司）、lml氨基糖苷类诘抗剂(购 于广东环凯微生物科技有限公司）和200yL酚红，搅拌均匀；
[0048] c)、待培养基温度降到40°C，再加入7ml小牛血清、lg B族维生素、3g维生素 D、 0.5mL非必需氨基酸(购于英潍捷基贸易有限公司），搅拌均匀，得到微生物培养基；
[0049] d)、调节制得的微生物培养基的pH值至7.3,将培养基倾倒至9cm平板，待完全凝 固，转移至4°C保存。
[0050] 实施例4
[0051]培养基的微生物培养效果检测(检测参照2015版中国药典）
[0052] 1 )、未引入抗生素条件下的微生物培养效果：
[0053] 取13个培养皿，加入实施例1制得的培养基，然后分别接种小于lOOcfu的金黄色葡 萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和曲霉菌各2皿，另外一个皿为 阴性对照，不接种任何菌种;接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和生孢梭菌平皿放置37°C培 养，接种枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和曲霉菌平皿放置25°C培养，培养时间为5天，观察菌落 生长状态，如表1所示：
[0054] 表1未引入抗生素条件下的菌落生长状态
[0055]
[0056] 注：表1中，"一，，为无生长菌，"+，，为有菌生长，"土，，为抑制生长，"++，，为生长良好， "+++"为生长旺盛。
[0057] 由表1可知，各菌种在培养基上都能良好生长，没有出现抑制作用，说明本发明提 供的培养基可用于微生物的培养和检出。
[0058] 2)、引入抗生素条件下的微生物培养效果：
[0059] 取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和曲霉菌， 各配制成小于lOOcfu菌液，向各菌液中加入一定量的青霉素和链霉素（剂量不能直接杀死 细菌）。
[0060] 将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和生孢梭菌等体积混合菌液接分别接种lOOcfu于 两个装有硫乙醇酸盐培养基(购于广东环凯微生物科技有限公司）的平皿和两个装有实施 例1培养基的平皿中；将枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和曲霉菌等体积混合菌液接种于两个装 有胰酪大豆胨肉汤培养基(TSB)(购于广东环凯微生物科技有限公司）平皿和两个装有实施 例1培养基的平皿中。分别放置相应培养条件中培养5天，观察菌落生长状态，结果如表2所 示：
[0061] 表2引入抗生素条件下的菌落生长状态
[0062]
[0063]
[0064] 注:表2中，"一"为无生长菌，"+"为有菌生长，"土"为抑制生长，"++"为生长良好， "+++"为生长旺盛。
[0065] 由表2可知:本发明的培养基对混有青链霉、链霉素的菌液菌体培养没有被抑制， 而常规的培养基培养泽出现大部分菌体被抑制甚至不生长，故进一步说明本发明的培养基 能够减小抗生素对微生物生长的影响，即降低抗生素对微生物生长的抑制作用。
[0066] 实施例5
[0067] 由实施例3调制得到的培养基进行微生物检测：由来源有细菌污染的细胞液，经过 加入双抗处理后，镜下未观察到细菌，抽取其细胞悬液，200μ1接种到由实施例3调制的两个 培养基中，同样抽取细胞悬液200μ1接种到两个营养琼脂培养基中，另外同样抽取200μ1细 胞悬液接种到两个单独添加了 β-内酰胺拮抗剂的培养基中，37°c培养连续观察五天菌落生 长情况，如下表3:
[0068] 表3不同培养基的微生物菌落生长情况
[0069]
[0071] 注:表3中，为无生长菌，"+"为有菌生长，"土"为抑制生长，"++"为生长良好，"+ ++"为生长旺盛。
[0072]由上表3中可得到，由实施例3调制的培养基既不会抑制微生物生长，还可以破坏 抗生素，而其他拮抗剂则可能抑制微生物生长。
[0073]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种微生物培养基，包括基础培养基、血清、β-内酰胺拮抗剂和氨基糖苷类拮抗剂； 所述基础培养基、血清、β-内酰胺拮抗剂和氨基糖苷类拮抗剂的用量比800~1300(g) :0.5 ~7(mL):1~5(mL):1~5(mL)〇2. 根据权利要求1所述的微生物培养基，其特征在于，所述基础培养基包括水、无机盐、 维生素、氨基酸和葡萄糖。3.根据权利要求2所述的微生物培养基，其特征在于，所述维生素包括B族维生素和/或 维生素D。4.根据权利要求2所述的微生物培养基，其特征在于，所述无机盐包括NaCl。5. 根据权利要求2所述的微生物培养基，其特征在于，所述基础培养基还包括凝固剂。6. 根据权利要求5所述的微生物培养基，其特征在于，所述凝固剂为琼脂。7. 根据权利要求2所述的微生物培养基，其特征在于，所述基础培养基还包括酵母膏。8. 根据权利要求1~7任一项所述的微生物培养基，其特征在于，所述微生物培养基还 包括显色剂。9. 根据权利要求8所述的微生物培养基，其特征在于，所述显色剂为酚红。10. -种权利要求1~9任一项所述的微生物培养基在细胞样本微生物检出中的应用。
【专利摘要】本发明属于培养基领域，尤其涉及一种微生物培养基及其应用。本发明提供的养基包括基础培养基、血清、β-内酰胺拮抗剂和氨基糖苷类拮抗剂；所述基础培养基、血清、β-内酰胺拮抗剂和氨基糖苷类拮抗剂的用量比800～1300(g)：0.5～7(mL)：1～5(mL)：1～5(mL)。本发明提供的培养基含有基础培养基、血清、β-内酰胺拮抗剂和氨基糖苷类拮抗剂，通过各组分之间的协同作用保证微生物可以在该培养基中良好生长，减小抗生素对微生物的生长抑制，从而提高细胞样本中微生物的检出速度和准确度。实验结果表明：微生物在本发明提供的培养基中可以保持良好的生长态势，该培养基能够有效降低抗生素对微生物生长的抑制作用。
【IPC分类】C12Q1/04, C12N1/14, C12N1/20
【公开号】CN105483056
【申请号】CN201610018395
【发明人】陈海佳, 王一飞, 葛啸虎, 黎娟妹
【申请人】广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2016年1月11日