一种高纯度胰激肽原酶的制备方法_2

文档序号:9722641阅读:来源:国知局
600g干燥无霉菌的茶籽,放入清水中反复清洗,去除表面残留污物后,平铺在铺有纱布的钢筛中,放置于太阳光下翻晒,其中每隔2h翻晒一次,直至茶籽含水量为8?12%为止,随后将翻晒后的茶籽放入锅中,在45?55°C下翻炒30?60min,待翻炒完毕,将炒后的茶籽送入螺旋挤出机中进行挤压、排油,得茶籽麸;之后将上述得到的上清液加入到上述得到的茶籽麸中,以300?450r/min的速度搅拌10?15min,使其完全混合,随后将混合后的物质放入蒸锅中,在90?100°C下蒸煮30?35min,待蒸煮结束,自行冷却至室温,并移入挤压机中挤压成直径为10?15cm的圆形茶籽麸饼;取400?SOOg新鲜冷冻猪胰腺洗净,用清水反复搓洗后,置于打浆机中,打浆3?5min,得猪胰腺浆,随后将得到的猪胰腺浆置于烧杯中,并向烧杯中加入猪胰腺浆质量60?65%的人体唾液,用搅拌棒充分混合均匀,在搅拌过程中,以5?6°C/min的速率程序升温至58?65°C时,停止搅拌,得混合物;随后将上述混合物进行过滤,得滤液,随后取5?30 %的滤液放入容器中,向其中加入55?65g上述得到的圆形茶籽麸饼,搅拌浸泡15?ISmin后取出,用去离子对其进行淋洗,使得PH值为6?8,收集淋洗液I,再取30?40 %的滤液放入烧杯中,向其中加入62?75g上述得到的圆形茶籽麸饼,搅拌浸泡20?25min后取出,用质量浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液淋洗3?4h,收集淋洗液2,再取30?60%的滤液放入反应釜中,向其中加入100?120g上述得到的圆形茶籽麸饼,搅拌浸泡25?30min后取出,用质量浓度为lmol/L的氯化钠溶液淋洗I?2h,收集淋洗液3;将上述得到的淋洗液1、淋洗液2、淋洗液3置于容器中,充分混合均匀,向容器中加入20?35mL质量浓度为30 %的氢氧化钠溶液,调节pH值为9?10后,静置4?6h,待静置结束,再在其中加入淋洗液总体积I?2倍质量浓度为98 %的乙醇溶液,搅拌均匀后,沉淀20?22h,之后收集沉淀物放入布式漏斗中,对其抽滤,收集滤渣;
最后将上述收集得到的滤渣放入干燥机中,在温度100?110°C下干燥处理30?45min,即可得到一种高纯度胰激肽原酶。
[0012]实例I
首先取7cm厚的农村河道淤泥7kg,放置在干燥机中,在65°C下干燥处理,当河道淤泥中含水量为10%时,停止干燥,取出放入容器中,置于阴凉处自行冷却至室温,并使其上下分层,之后用刮刀轻轻刮去上层4cm后的河道淤泥,得下层河道腐殖质污泥;然后取500g干燥无霉菌的茶籽,放入清水中反复清洗,去除表面残留污物后,平铺在铺有纱布的钢筛中,置于干燥机中,在温度为100°C下干燥处理15min,使得茶籽含水量为3%,再将干燥后的茶籽放入烧杯中,加入SOOmL质量浓度为75 %的乙醇溶液,混合均匀,置于超声振荡仪中,设置超声振荡频率为20KHz,超声功率为100W,超声振荡反应Ih,过滤,得滤液;将上述得到的滤液放入索式抽提器中,抽提50min,得滤液抽提液,再将得打的滤液抽提液放入蒸馏装置中,在55°C下水浴加热35min,去除乙醇,得到茶油提取物;将上述得茶油提取物放入容器中,向其中加入上述得到的河道腐殖质污泥,以500r/min的转速搅拌20min,使其完全混合均匀,得混合物,随后将得到是混合物放入高速离心机中,在1200r/min的转速下离心处理40min,去渣,得上清液;再取500g干燥无霉菌的茶籽,放入清水中反复清洗,去除表面残留污物后,平铺在铺有纱布的钢筛中,放置于太阳光下翻晒,其中每隔2h翻晒一次,直至茶籽含水量为8%为止,随后将翻晒后的茶籽放入锅中,在45°C下翻炒30min,待翻炒完毕,将炒后的茶籽送入螺旋挤出机中进行挤压、排油,得茶籽麸;之后将上述得到的上清液加入到上述得到的茶籽麸中,以300r/min的速度搅拌lOmin,使其完全混合,随后将混合后的物质放入蒸锅中,在90°C下蒸煮30min,待蒸煮结束,自行冷却至室温,并移入挤压机中挤压成直径为1cm的圆形茶籽麸饼;取400g新鲜冷冻猪胰腺洗净,用清水反复搓洗后,置于打浆机中,打浆3min,得猪胰腺浆,随后将得到的猪胰腺浆置于烧杯中,并向烧杯中加入猪胰腺浆质量60%的人体唾液,用搅拌棒充分混合均匀,在搅拌过程中,以5°C/min的速率程序升温至58°C时,停止搅拌,得混合物;随后将上述混合物进行过滤,得滤液,随后取5 %的滤液放入容器中,向其中加入55g上述得到的圆形茶籽麸饼,搅拌浸泡15min后取出,用去离子对其进行淋洗,使得PH值为6,收集淋洗液I,再取30%的滤液放入烧杯中,向其中加入62g上述得到的圆形茶籽麸饼,搅拌浸泡20min后取出,用质量浓度为0.5mo 1/L的氯化钠溶液淋洗3h,收集淋洗液2,再取30%的滤液放入反应釜中,向其中加入10g上述得到的圆形茶籽麸饼,搅拌浸泡25min后取出,用质量浓度为lmol/L的氯化钠溶液淋洗Ih,收集淋洗液3;将上述得到的淋洗液1、淋洗液2、淋洗液3置于容器中,充分混合均匀,向容器中加入20mL质量浓度为30%的氢氧化钠溶液,调节pH值为9后,静置4h,待静置结束,再在其中加入淋洗液总体积I倍质量浓度为98 %的乙醇溶液,搅拌均匀后,沉淀20h,之后收集沉淀物放入布式漏斗中,对其抽滤,收集滤渣;
最后将上述收集得到的滤渣放入干燥机中,在温度100°c下干燥处理30min,即可得到一种高纯度胰激肽原酶。
[0013]本实例方法独特新颖,工艺水平高,最终制得的胰激肽原酶颜色为微黄色、干品效价每Img为80单位、比活达到了850单位/mg蛋白、纯度达到92%;使用时,将本发明制得的胰激肽原酶放入医学制药机中,制成胰激肽原酶片,其中每片含量为100IU,食用时,配合300mL温开水□服即可,每天早晚一次,每次2片,坚持服用7天,可以明显感觉抵抗了得到了提高,高血压患者血压从收缩压18OmmHg降低到了 11 OmmHg,舒张压从11 OmmHg降低到了75mmHg,达到了血压标准,减少了患者痛苦。
[0014]实例2
首先取9cm厚的农村河道淤泥7.5kg,放置在干燥机中,在68°C下干燥处理,当河道淤泥中含水量为13%时,停止干燥,取出放入容器中,置于阴凉处自行冷却至室温,并使其上下分层,之后用刮刀轻轻刮去上层7cm后的河道淤泥,得下层河道腐殖质污泥;然后取550g干燥无霉菌的茶籽,放入清水中反复清洗,去除表面残留污物后,平铺在铺有纱布的钢筛中,置于干燥机中,在温度为103°C下干燥处理20min,使得茶籽含水量为4%,再将干燥后的茶籽放入烧杯中,加入900mL质量浓度为75 %的乙醇溶液,混合均匀,置于超声振荡仪中,设置超声振荡频率为23KHz,超声功率为130W,超声振荡反应2h,过滤,得滤液;将上述得到的滤液放入索式抽提器中,抽提53min,得滤液抽提液,再将得打的滤液抽提液放入蒸馏装置中,在60°C下水浴加热38min,去除乙醇,得到茶油提取物;将上述得茶油提取物放入容器中,向其中加入上述得到的河道腐殖质污泥,以550r/min的转速搅拌25min,使其完全混合均匀,得混合物,随后将得到是混合物放入高速离心机中,在1400r/min的转速下离心处理43min,去渣,得上清液;再取550g干燥无霉菌的茶籽,放入清水中反复清洗,去除表面残留污物后,平铺在铺有纱布的钢筛中,放置于太阳光下翻晒,其中每隔2h翻晒一次,直至茶籽含水量为10%为止,随后将翻晒后的茶籽放入锅中,在50°C下翻炒45min,待翻炒完毕,将炒后的茶籽送入螺旋挤出机中进行挤压、排油,得茶籽麸;之后将上述得到的上清液加入到上述得到的茶籽麸中,以400r/min的速度搅拌13min,使其完全混合,随后将混合后的物质放入蒸锅中,在95°C下蒸煮33min,待蒸煮结束,自行冷却至室温,并移入挤压机中挤压成直径为13cm的圆形茶籽麸饼;取650g新鲜冷冻猪胰腺洗净,用清水反复搓洗后,置于打浆机中,打浆4min,得猪胰腺浆,随后将得到的猪胰腺浆置于烧杯中,并向烧杯中加入猪胰腺浆质量63%的人体唾液,用搅拌棒充分混合均匀,在搅拌过程中,以5.5°C/min的速率程序升温至60°C时,停止搅拌,得混合物;随后将上述混合物进行过滤,得滤液,随后取25%的滤液放入容器中,向其中加入60g上述得到的圆形茶籽麸饼,搅拌浸泡17min后取出,用去离子对其进行淋洗,使得PH值为7,收集淋洗液I,再取35%的滤液放入烧杯中,向其中加入70g上述得到的圆形茶籽麸饼,搅拌浸泡23min后取出,用质量浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液淋洗3.5h,收集淋洗液2,再取45%的滤液放入反应釜中,向其中加入IlOg上述得到的圆形茶籽麸饼,搅拌浸泡28min后取出,用质量浓度为lmol/L的氯化钠溶液淋洗1.5h,收集淋洗液3;将上述得到的淋洗液1、淋洗液2、淋洗液3置于容器中,充分混合均匀,向容器中加入30mL质量浓度为30%的氢氧化钠溶液,调节pH值为9.5后,静置5h,待静置结束,再在其中加入淋洗液总体积1.5倍质量浓度为98%的乙醇溶液,搅拌均匀后,沉淀21h,之后收集沉淀物放入布式漏斗中,对其抽滤,收集滤渣;最后将上述收集得到的滤渣放入干燥机中,在温度105°C下干燥处理38min,即可得到一种高纯度胰激肽原酶。
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