>[0015]本实例方法独特新颖，工艺水平高，最终制得的胰激肽原酶颜色为微黄色、干品效价每Img为90单位、比活达到了865单位/mg蛋白、纯度达到94%;使用时，将本发明制得的胰激肽原酶放入医学制药机中，制成胰激肽原酶片，其中每片含量为110IU，食用时，配合320mL温开水口服即可，每天早晚一次，每次2.5片，坚持服用10天，可以明显感觉抵抗了得到了提高，高血压患者血压从收缩压183mmHg降低到了 113mmHg，舒张压从115mmHg降低到了78mmHg，达到了血压标准，减少了患者痛苦。
[0016]实例3
首先取1cm厚的农村河道淤泥8kg，放置在干燥机中，在70°C下干燥处理，当河道淤泥中含水量为15%时，停止干燥，取出放入容器中，置于阴凉处自行冷却至室温，并使其上下分层，之后用刮刀轻轻刮去上层8cm后的河道淤泥，得下层河道腐殖质污泥;然后取600g干燥无霉菌的茶籽，放入清水中反复清洗，去除表面残留污物后，平铺在铺有纱布的钢筛中，置于干燥机中，在温度为105°C下干燥处理25min，使得茶籽含水量为5%，再将干燥后的茶籽放入烧杯中，加入100mL质量浓度为75%的乙醇溶液，混合均匀，置于超声振荡仪中，设置超声振荡频率为25KHz，超声功率为150W，超声振荡反应3h，过滤，得滤液;将上述得到的滤液放入索式抽提器中，抽提55min，得滤液抽提液，再将得打的滤液抽提液放入蒸馏装置中，在65°C下水浴加热40min，去除乙醇，得到茶油提取物；将上述得茶油提取物放入容器中，向其中加入上述得到的河道腐殖质污泥，以600r/min的转速搅拌30min，使其完全混合均匀，得混合物，随后将得到是混合物放入高速离心机中，在1500r/min的转速下离心处理45min，去渣，得上清液;再取600g干燥无霉菌的茶籽，放入清水中反复清洗，去除表面残留污物后，平铺在铺有纱布的钢筛中，放置于太阳光下翻晒，其中每隔2h翻晒一次，直至茶籽含水量为12%为止，随后将翻晒后的茶籽放入锅中，在55°C下翻炒60min，待翻炒完毕，将炒后的茶籽送入螺旋挤出机中进行挤压、排油，得茶籽麸;之后将上述得到的上清液加入到上述得到的茶籽麸中，以450r/min的速度搅拌15min，使其完全混合，随后将混合后的物质放入蒸锅中，在100°C下蒸煮35min，待蒸煮结束，自行冷却至室温，并移入挤压机中挤压成直径为15cm的圆形茶籽麸饼;取SOOg新鲜冷冻猪胰腺洗净，用清水反复搓洗后，置于打浆机中，打浆5min，得猪胰腺浆，随后将得到的猪胰腺浆置于烧杯中，并向烧杯中加入猪胰腺浆质量65%的人体唾液，用搅拌棒充分混合均匀，在搅拌过程中，以6°C/min的速率程序升温至65°C时，停止搅拌，得混合物;随后将上述混合物进行过滤，得滤液，随后取30 %的滤液放入容器中，向其中加入65g上述得到的圆形茶籽麸饼，搅拌浸泡ISmin后取出，用去离子对其进行淋洗，使得PH值为8，收集淋洗液I，再取40 %的滤液放入烧杯中，向其中加入75g上述得到的圆形茶籽麸饼，搅拌浸泡25min后取出，用质量浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液淋洗4h，收集淋洗液2，再取60%的滤液放入反应釜中，向其中加入120g上述得到的圆形茶籽麸饼，搅拌浸泡30min后取出，用质量浓度为lmol/L的氯化钠溶液淋洗2h，收集淋洗液3;将上述得到的淋洗液1、淋洗液2、淋洗液3置于容器中，充分混合均匀，向容器中加入35mL质量浓度为30 %的氢氧化钠溶液，调节pH值为10后，静置6h，待静置结束，再在其中加入淋洗液总体积2倍质量浓度为98%的乙醇溶液，搅拌均匀后，沉淀22h，之后收集沉淀物放入布式漏斗中，对其抽滤，收集滤渣；最后将上述收集得到的滤渣放入干燥机中，在温度110°C下干燥处理45min，即可得到一种高纯度胰激肽原酶。
[0017]本实例方法独特新颖，工艺水平高，最终制得的胰激肽原酶颜色为微黄色、干品效价每Img为95单位、比活达到了880单位/mg蛋白、纯度达到95%;使用时，将本发明制得的胰激肽原酶放入医学制药机中，制成胰激肽原酶片，其中每片含量为120IU，食用时，配合350mL温开水口服即可，每天早晚一次，每次3片，坚持服用14天，可以明显感觉抵抗了得到了提高，高血压患者血压从收缩压185mmHg降低到了 115mmHg，舒张压从118mmHg降低到了79mmHg，达到了血压标准，减少了患者痛苦。
【主权项】
1.一种高纯度胰激肽原酶的制备方法，其特征在于具体操作步骤为: (1)取7?10cm厚的农村河道淤泥7?8kg，放置在干燥机中，在65?70°C下干燥处理，当河道淤泥中含水量为10?15%时，停止干燥，取出放入容器中，置于阴凉处自行冷却至室温，并使其上下分层，之后用刮刀轻轻刮去上层4?8cm后的河道淤泥，得下层河道腐殖质污泥； (2)取500?600g干燥无霉菌的茶籽，放入清水中反复清洗，去除表面残留污物后，平铺在铺有纱布的钢筛中，置于干燥机中，在温度为100?105°C下干燥处理15?25min，使得茶籽含水量为3?5%，再将干燥后的茶籽放入烧杯中，加入800?1000mL质量浓度为75%的乙醇溶液，混合均匀，置于超声振荡仪中，设置超声振荡频率为20?25KHz，超声功率为100?150W，超声振荡反应1?3h，过滤，得滤液； (3)将上述得到的滤液放入索式抽提器中，抽提50?55min，得滤液抽提液，再将得打的滤液抽提液放入蒸馏装置中，在55?65°C下水浴加热35?40min，去除乙醇，得到茶油提取物； (4)将上述得茶油提取物放入容器中，向其中加入上述步骤(1)得到的河道腐殖质污泥，以500?600r/min的转速搅拌20?30min，使其完全混合均匀，得混合物，随后将得到是混合物放入高速离心机中，在1200?1500r/min的转速下离心处理40?45min，去渣，得上清液； (5)再取500?600g干燥无霉菌的茶籽，放入清水中反复清洗，去除表面残留污物后，平铺在铺有纱布的钢筛中，放置于太阳光下翻晒，其中每隔2h翻晒一次，直至茶籽含水量为8?12%为止，随后将翻晒后的茶籽放入锅中，在45?55°C下翻炒30?60min，待翻炒完毕，将炒后的茶籽送入螺旋挤出机中进行挤压、排油，得茶籽麸； (6)将上述步骤(4)得到的上清液加入到上述得到的茶籽麸中，以300?450r/min的速度搅拌10?15min，使其完全混合，随后将混合后的物质放入蒸锅中，在90?100°C下蒸煮30?35min，待蒸煮结束，自行冷却至室温，并移入挤压机中挤压成直径为10?15cm的圆形茶籽麸饼； (7)取400?800g新鲜冷冻猪胰腺洗净，用清水反复搓洗后，置于打浆机中，打浆3?5min，得猪胰腺浆，随后将得到的猪胰腺浆置于烧杯中，并向烧杯中加入猪胰腺浆质量60?65%的人体唾液，用搅拌棒充分混合均匀，在搅拌过程中，以5?6°C/min的速率程序升温至58?65°C时，停止搅拌，得混合物； (8)将上述混合物进行过滤，得滤液，随后取5?30%的滤液放入容器中，向其中加入55?65g上述步骤(6)得到的圆形茶籽麸饼，搅拌浸泡15?18min后取出，用去离子对其进行淋洗，使得pH值为6?8，收集淋洗液1，再取30?40 %的滤液放入烧杯中，向其中加入62?75g上述步骤(6)得到的圆形茶籽麸饼，搅拌浸泡20?25min后取出，用质量浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液淋洗3?4h，收集淋洗液2，再取30?60%的滤液放入反应釜中，向其中加入100?120g上述步骤(6)得到的圆形茶籽麸饼，搅拌浸泡25?30min后取出，用质量浓度为lmol/L的氯化钠溶液淋洗1?2h，收集淋洗液3 ； (9)将上述得到的淋洗液1、淋洗液2、淋洗液3置于容器中，充分混合均匀，向容器中加入20?35mL质量浓度为30%的氢氧化钠溶液，调节pH值为9?10后，静置4?6h，待静置结束，再在其中加入淋洗液总体积1?2倍质量浓度为98 %的乙醇溶液，搅拌均匀后，沉淀20?22h，之后收集沉淀物放入布式漏斗中，对其抽滤，收集滤渣； (10)将上述收集得到的滤渣放入干燥机中，在温度100?110°C下干燥处理30?45min，即可得到一种高纯度胰激肽原酶。
【专利摘要】本发明公开了一种高纯度胰激肽原酶的制备方法，属于胰激肽原酶提取制备技术领域。本发明利用茶籽提取液和腐殖质污泥混合、经过滤得过滤液，放入茶籽麸中蒸煮、挤压制成茶籽麸饼，随后收集猪胰腺和口水，待混合后程序升温，并依次与茶籽麸饼进行混合，混合过程中逐渐加量，并使用不同浓度的去离子水和氯化钠分别进行三次淋洗，随后收集淋洗液，通过氢氧化钠调节pH值后，加入乙醇过滤，最终将得到的滤液进行抽滤，干燥，从而得到高纯度胰激肽原酶的制备方法。实例证明，本发明操作简单，工艺水平高，不仅使得比活达到了850单位/mg蛋白以上，而且纯度达到了92％以上，达到了国家指标，适合大规模应用。
【IPC分类】C12N9/64
【公开号】CN105483103
【申请号】CN201510987584
【发明人】高玉梅, 张帆
【申请人】常州亚环环保科技有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月27日