德西亚维虫 (Trypanosoma rhodesiense)(非洲昏睡病），克鲁斯维虫（Trypanosoma cruzi)(恰加斯氏 病)和弓形虫。
[0162] 其他医学相关微生物已经在文献中广泛描述，所述文献例如，参见C.G. A托马斯， 医学微生物学，贝利廷德尔，大不列颠1983年（C.G.A Thomas，Medical Microbiology， Bailliere Tindall，Great Britainl983)，在此通过引用并入所述文献全部内容。
[0163] 变应原是指能够诱导易感受试者中变态反应性或哮喘性应答的物质(抗原）。变应 原的列表是巨大的并可以包括花粉、昆虫毒液、动物皮肩尘、真菌孢子和药物（例如青霉 素）。天然的、动物的和植物的变应原的实例包括但不限于特异性针对以下属的蛋白质:犬 (Canine)(家犬（Cani s familiar is));尘螨属（Derma tophago i des )(例如粉尘螨 (Dermatophagoides farinae));猫属（Felis)(家猫（Felis domesticus)); Ambrosia (Ambrosia artemiisfolia);黑麦草属（Lolium)(例如多年生黑麦草(Lolium perenne)或 多花黑麦草（Lol ium mul tif lorum));柳杉属（Cryptomeria)(日本柳杉（Cryptomeria japonica));链格抱属(Alternaria)(链格抱(Alternaria alternata));桦木(Alder);梢 木属（Alnus)(欧洲梢木（Alnus gultinoasa));桦木属（Betula)(垂枝桦（Betula verrucosa));栎属（Quercus)(美洲白栎（Quercus alba));木犀榄属（Olea)(橄榄（Olea europa));蒿属(Artemisia)(北艾(Artemisia vulgaris));车前属（Plantago)(例如长叶 Parietaria judaica);小臟（Blattella)(例如德国小臟（Blattella germanica));蜜蜂 (Apis)(例如Apis multif lorum);桕木属（Cupressus)(例如地中海桕木（Cupressus sempervirens)、绿干桕（Cupressus arizonica)和大果桕木（Cupressus macrocarpa));刺 桕属（Juniperus)(例如Juniperus sabinoides、Juniperus virginiana、欧洲刺桕 (Jun iperus communi s)和 Juniperus ashei);崖桕属（Thuya)(例如侧桕（Thuya orientalis));扁桕属（Chamaecyparis)(例如日本扁桕（Chamaecyparis obtusa));大臟 (Periplaneta)(例如美洲大蠊（Periplaneta americana));冰草属(Agropyron)(例如匍匍 冰草（Agropyron repens));黑麦属（Secale)(例如黑麦（Secale cereale));小麦 (1'1'；^；!_(311111)(例如普通小麦（1'1'；^；!_(311111368七；!_￥11111));鸭茅属（〇3(^7118)(例如鸭茅 (Dactylis glomerata));羊茅属(Festuca)(例如欧洲羊茅(Festuca elatior));早熟禾属 (Poa)(例如草地早熟禾（Poa pratensis)或加拿大早熟禾（Poa compressa));燕麦属 (Avena)(例如燕麦(Avena sativa));绒毛草属(Holcus)(例如绒毛草(Holcus lanatus)); 黄花茅属（Anthoxanthum)(例如黄花茅（Anthoxanthum odoratum));燕麦草属 (Arrhenatherum)(例如燕麦草（Arrhenatherum elatius));剪股颖属（Agrostis)(例如 Agrostis alba);梯牧草属(Phleum)(例如梯牧草(Phleum pratense));鹬草属(Phalaris) (例如鹬草（Phalaris arundinacea));雀稗属（Paspalum)(例如百喜草（Paspalum notatum));高粱属（Sorghum)(例如石茅（Sorghum halepensis));和雀麦属(Bromus)(例如 无芒雀麦（Bromus inermis))。
[0164] 本发明的纳米级构建体还可以用抗微生物剂进行涂覆或者与其组合施用。本文中 使用的抗微生物剂是指天然存在的或合成的化合物，其能够杀灭或抑制感染性微生物。根 据本发明有用的抗微生物剂的类型将依赖于微生物的类型，其感染受试者或者使受试者具 有变得感染的风险。抗微生物剂包括但不限于抗细菌剂、抗病毒剂、抗真菌剂和抗寄生物 剂。诸如"抗感染剂"、"抗细菌剂"、"抗病毒剂"、"抗真菌剂"、"抗寄生物剂"和"杀寄生物药" 的短语对本领域普通技术人员具有公知的(well-established)含义，并以标准医学文本进 行定义。简而言之，抗细菌剂杀灭或抑制细菌，并且包括抗生素以及其他具有类似功能的合 成的或天然的化合物。抗生素是低分子量的分子，其由细胞(诸如微生物)作为次级代谢物 产生。一般而言，抗生素干扰一种或多种细菌功能或结构，其特异性针对微生物并且其不存 在于宿主细胞中。可以从天然来源分离抗病毒剂或合成抗病毒剂，并且抗病毒剂用于杀灭 或抑制病毒。抗真菌剂被用于治疗浅表真菌感染以及机会性和原发性全身真菌感染。抗寄 生物剂杀灭或抑制寄生物。
[0165] 抗细菌剂杀灭或抑制细菌的生长或功能。一大类的抗细菌剂是抗生素。有效杀灭 或抑制范围广泛的细菌的抗生素被称为广谱抗生素。其他类型的抗生素主要有效对抗革兰 氏阳性或革兰氏阴性类的细菌。这些类型的抗生素被称为窄谱抗生素。有效对抗单个生物 或疾病并且不对抗其他类型的细菌的其他抗生素被称为限谱抗生素（limited-spectrum antibiotics)。抗细菌剂有时基于它们的主要作用模式进行分类。一般而言，抗细菌剂是细 胞壁合成抑制剂、细胞膜抑制剂、蛋白质合成抑制剂、核酸合成或功能抑制剂、以及竞争性 抑制剂。
[0166] 抗病毒剂是阻止病毒感染细胞或细胞内病毒的复制的化合物。抗病毒药物比抗细 菌药物少得多，这是因为病毒复制的过程与宿主细胞内的DNA复制如此密切相关以至于非 特异性的抗病毒剂常常会对宿主具有毒性。病毒感染过程内有几个阶段可以被抗病毒剂阻 断或抑制。这些阶段包括病毒附着至宿主细胞(免疫球蛋白或结合肽）、病毒脱壳(例如金刚 烷胺）、病毒mRNA的合成或翻译(例如干扰素）、病毒RNA或DNA的复制（例如核苷酸类似物）、 新病毒蛋白质的成熟(例如蛋白酶抑制剂)和病毒的出芽和释放。
[0167] 本发明的构建体也可结合治疗或诊断抗体给药。在一个实施方案中，抗体可以选 自 Ributaxin，赫赛汀，Quadramet (来昔决南钐[153Sm])，Panorex(单抗17-1A)，IDEC-Y2B8， BEC2，C225，Oncolym，SMART Ml%，ATRAGEN，Ovarex，Bexxar (托西莫单抗），LDP-〇3，ior t6， MDX-210，MDX-11，MDX-22，0V103，3622W94，抗 VEGF，赛尼哌，MDX-220，MDX-447，MELIMMUNE-2，MELIMMUNE-1，CEACIDE，Pretarget，NovoMAb-G2，TNT，G1iomab-H，GNI-250，EMD-72000， LymphoCide，CMA676，Monopharm-C，4B5，ior egf·r3，ior c5，BABS，抗FLK-2，MDX-260，ANA Ab，SMARTIDlOAb，SMART ABL364AB，利妥昔单抗，贝伐单抗和ImmuRAIT-CEA。
[0168]核酸相互作用复合物的激动剂还用于治疗和预防自身免疫性疾病。自身免疫性疾 病是一类其中受试者的自身抗体与宿主组织反应或其中免疫效应T细胞对于内源性的自身 肽是自身反应性的并引起组织破坏的疾病。因此，针对受试者的自体抗原（被称为自体抗 原）启动免疫应答。自身免疫性疾病包括但不限于类风湿性关节炎、克罗恩病、多发性硬化、 系统性红斑狼疮(SLE)、自身免疫性脑脊髓炎、重症肌无力(MG)、桥本甲状腺炎、肺出血肾炎 综合征、天疱疮(例如寻常型天疱疮）、格雷夫斯病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性血 小板减少性紫癜、具有抗胶原抗体的硬皮病、混合性结缔组织病、多肌炎、恶性贫血、特发性 艾迪生病、自身免疫相关不育、肾小球肾炎（例如新月体性肾小球肾炎、增生性肾小球肾 炎）、大疱性类天疱疮、舍格伦综合征、胰岛素抵抗，以及自身免疫性糖尿病。
[0169]本文中使用的"自体抗原"是指正常宿主组织的抗原。正常宿主组织不包括癌细 胞。因此，在自身免疫性疾病的情形下，对抗自体抗原所启动的免疫应答是不期望的免疫应 答并帮助破坏和损伤正常组织，而对抗癌症抗原所启动的免疫应答是期望的免疫应答并帮 助破坏肿瘤或癌症。因此，在本发明的致力于治疗自身免疫性紊乱的一些方面，不建议CpG 免疫调节核酸与自体抗原进行施用，特别是是自身免疫性紊乱的靶标的那些。
[0170] 在其他情况下，CpG免疫调节核酸可以与低剂量的自体抗原进行递送。许多动物研 究已经证实粘膜施用低剂量的抗原可以导致免疫低响应性或"耐受"的状态。活性机制似乎 是远离Thl而朝向主要Th2和Th3(即TGF-β主导的）的细胞因子介导的免疫偏离。低剂量抗原 递送的活性抑制也可以抑制不相关的免疫应答(旁路抑制(bystandersuppression))，其在 自身免疫性疾病(例如类风湿性关节炎和SLE)的治疗中相当令人感兴趣。旁路抑制涉及局 部环境中Thl反调节、抑制细胞因子的分泌，其中促炎和Thl细胞因子以抗原特异性或抗原 非特异性的方式进行释放。本文中使用的"耐受"被用来指这种现象。实际上，口服耐受已经 有效用于治疗动物中的许多自身免疫性疾病，包括:实验自身免疫性脑脊髓炎(EAE)、实验 自身免疫性重症肌无力、胶原诱导的关节炎(CIA)、以及胰岛素依赖的糖尿病。在这些模型 中，自身免疫性疾病的防止和抑制与抗原特异性体液和细胞应答从Thl向Th2/Th3应答的转 换(shift)有关。
[0171] 在另一方面，本发明涉及包括之前所讨论的一个或多个组合物的试剂盒。本文中 使用的"试剂盒"通常定义包括例如之前所述的本发明的一个或多个组合物和/或与本发明 相关的其他组合物的包装或套装(assembly)。如果存在的话，试剂盒的每种组合物可以液 体形式(例如溶液中）或以固体形式(例如干粉)提供。在某些情况下，一些组合物可以是可 组成型的或者否则可加工的（例如可加工成活性形式），例如通过加入合适的溶剂或其他物 质，其可以与或不与试剂盒一起提供。可与本发明相关的其他组合物的实例包括、但不限于 溶剂、表面活性剂、稀释剂、盐、缓冲剂、乳化剂、螯合剂、填充剂、抗氧化剂、粘合剂、填充剂、 防腐剂、干燥剂、抗微生物剂、针、注射器、包装材料、管、瓶、烧瓶、烧杯、皿、筛板(fri ts )、滤 器、环、夹具、包裹物(wraps )、贴片(patches )、容器、带子（tapes )、粘接剂等，例如用于使 用、施用、修饰、组装、存储、包装、制备、混合、稀释和/或保存组合物成分用于特定用途，例 如至样品和/或受试者。
[0172] 在一些实施方案中，与本发明相关的试剂盒包括一种或多种纳米颗粒核心，诸如 包含金的纳米颗粒核心。试剂盒还可以包括核酸相互作用复合物的一种或多种激动剂。试 剂盒还可以包括一种或多种抗原。
[0173] 在一些情况下，本发明的试剂盒包括任何形式的说明，与本发明的组合物相关的 说明以这样的方式提供使得本领域普通技术人员将会认识到说明与本发明的组合物相关。 例如，说明可以包括使用、修饰、混合、稀释、保存、施用、组装、存储、包装和/或制备该组合 物和/或与该试剂盒相关的其他组合物的说明。在一些情况下，说明还可以包括组合物的使 用说明，例如用于特定用途，例如至样品。可以本领域普通技术人员可认识到的以任何方式 提供含有这样的说明的合适的载体的任何形式提供说明，例如书面的或发表的、口头的、可 听的（例如电话）、数字的、光学的、可视化的（例如录像带、DVD等)或电子通信(包括互联网 或基于网络的通信）。
[0174] 在一些实施方案中，本发明涉及推广本文中所讨论的本发明的一个或多个实施方 案的方法。本文中使用的"推广"包括进行商业化的所有方法，包括、但不限于与本文中所讨 论的本发明的系统、设备、装置、物品、方法、组合物、试剂盒等相关的销售、广告、分配、许 可、合同、指导、教育、研究、进□、出□、谈判、融资、垫资、交易、自动售货、转售、分发、修理、 更换、保证、起诉、专利等。可以由任一方执行推广的方法，包括、但不限于个人方、商业机构 (公共或私人）、伙伴关系、公司、信托、合同或子合同代理、教育机构诸如学院和大学、研究 机构、医院或其他临床机构、政府部门等。推广活动可以包括与本发明明确相关的任何形式 的通信(例如书面的、口头的、和/或电子通信，诸如、但不限于电子邮件、电话、互联网、基于 网络等）。
[0175] 在一组实施方案中，推广的方法可以涉及一种或多种说明。本文中使用的"说明" 可以定义说明工具的组成(例如使用说明书、指南、警告、标记、注释、FAQ或"常见问题"等）， 并通常涉及关于本发明或与本发明相关和/或与本发明的包装一起的书面说明。说明还可 以包括任何形式的说明性通信（例如口头的、电子的、可听的、数字的、光学的、可视化的 等），以任何方式提供，使得用户将清楚地认识到说明与本发明例如本文中所讨论的相关。
[0176] 本发明通过下列实施例进一步说明，这决不应被解释为进一步限制。本申请所有 的引用的参考文献(包括文献来源、授权的专利、公开的专利申请和共同未决的专利申请） 的全部内容在此明确通过引用并入。 实施例
[0177] 实施例1:
[0178] 材料和方法
[0179]免疫刺激SNA的合成
[0180]如在别处7_12描述的、采用以下重要修改，实现免疫SNA(isSNA)的合成。简言之，20 毫升(mL) 13纳米(nm)的金胶体与10 %吐温20和在适当的浓度，如5μΜ的疏基修饰的核酸的 TLR激动剂序列(TLR 3，7/8，9)混合，并使其反应过夜。可与在别处描述的方法类似地实现 抗原的加成。1()SNA的纯化可以通过在75，OOOxg反复超离心30分钟来实现。
[0181] 细胞系
[0182] 从ATCC获得RAW 264.7细胞系。从11^丨￥〇6611获得1^1-81116巨噬细胞。从11^丨￥〇6611 得到Ramos-Blue和THPl-XBlue细胞。根据经销商的建议培养所有细胞。
[0183] 结果与讨论
[0184]被发现的是，相对于在溶液中的未配制的核酸相互作用复合物(CpG寡核苷酸）的 激动剂，本发明的纳米级构建体显著提高在巨噬细胞中的效力（图2)。将RAW-Blue巨噬细胞 以每孔65000个细胞铺板并使其附着过夜。在实验的当天，在oligo的指定浓度用AST-008-ps或CpG 1826-ps，处理细胞30分钟（顶部图片），4小时（中部图片），或过夜（底部图片）。对 于30分钟和4小时的时间点，吸出整个上清液，将细胞洗涤，施用无测试试剂的完全生长培 养基。在过夜时间点，使用QuantiBlue测定试剂盒测定细胞的活化状态。结果表明，尤其是 在很短的时间点，与17800nM(来自平均值的9-1000倍减少一个标准偏差)相比，AST-008-ps 显示大于比188nM的CpG1826-ps显著更低的EC50。在4小时，与CpG 1826-ps相比，AST-008-ps显示了一个较低的EC50(32nM与57nM)和更大的激活状态。这种差异在过夜孵育后变窄， 在该点处EC 50彼此不具有统计学差异。这表明，在与试剂与靶细胞的停留时间被有限于， 特别是30分钟或以下的条件下，AST-008-ps制剂可以导致更快速和强大的免疫激活。
[0185]也表明的是，在过夜孵育后，相对于在溶液中的核酸相互作用复合物(CpG寡核苷 酸）的未配制的激动剂，本发明的纳米级构建体显著增强在巨噬细胞中的效力（图3)。以每 孔65000个细胞将RAW-Blue巨噬细胞铺板并使其附着过夜。在实验当天，将AST-007-po， AST-007-ps，AST-008-po，AST-008-ps，CpG 1826-po，CpG 1826-ps 与细胞孵育过夜。然后使 用QuantiBlue测定试剂盒来确定活化程度。结果表明，与CpG 1826-p〇(16032nM相比分别为 191nM和194nM)相比，只包含磷酸二酯（-po)键（上部图片）的化合物，AST-007-po和AST-008-po是~50-150倍更有效的，如通过EC50值所确定的。硫代磷酸酯修饰的化合物(_ps，底 部图片），AST-007-ps和AST-008-ps是大致相当于CpG 1826-ps，前述物质分别具有29nM， 27nM，20nM的EC 50。
[0186] 检验了，在暴露于本发明的纳米级构建体