核酸样本可从棉签、涂片标本等载体材料上获得，也可以从其他 液体样本中获得。
[0108] 使用本实用新型的裂解结合液，可用于纯化核酸（包括DNA)。代表性的例子包括 (但并不限于）基因组DNA，cDNA，总RNA等。
[0109] 在一优选例中，本实用新型采用上述的试剂盒，无需蛋白酶K消化过程，细胞膜裂 解、核酸及核酸结合相结合使用同一溶液，从而快速、高效、简便地从多种样本中提取核酸， 且可以稳定储存核酸样本。
[0110] 应理解，本实用新型的试剂盒也可包含其他的任选的通用组分，其中包括（但并 不限于）：洗涤试剂、缓冲液、细胞壁裂解液等。
[0111] 本实用新型的主要优点包括：
[0112] (1)本实用新型的试剂盒提取快速、操作简便。采用本实用新型的试剂盒，细胞裂 解结合液一步裂解细胞并特异性的将核酸吸附于核酸结合相，水溶液亦可直接进行核酸与 核酸结合相的解离洗脱过程，无需蛋白酶K处理，仅需简单的漂洗步骤后即可将核酸结合 相上结合的核酸洗脱下来，方法步骤简单。
[0113] (2)条件温和。本实用新型中，核酸在温和的条件下（pH6. 5-8. 0)与核酸结合相结 合，并在水或弱碱性（PH7. 5-8. 5)条件下进行洗脱，操作在室温下进行。
[0114] (3)核酸的收率高。lmg磁性微球可结合高达10ug的基因组DNA，或提取高达90% 以上的人全血基因组总DNA。
[0115] (4)提取的核酸纯度高。与目前的核酸提取试剂盒及操作方法相比，本试剂盒提取 核酸具有纯度高、杂质低等优点，提取的核酸适用于PCR检测、核酸杂交等多种下游实验， 无需进一步纯化。
[0116] (5)自动化程度高。
[0117] (6)本实用新型的试剂盒可以在样品加入时即开始提取过程，在试剂盒进行运输 或保存的过程中即可完成核酸提取，且保存过程中核酸不易变质，因而可以用于大量样本 的采集工作。
[0118] 下面结合具体实施例，进一步阐述本实用新型。应理解，这些实施例仅用于说明本 实用新型而不用于限制本实用新型的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通 常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否 则百分比和份数按重量计算。
[0119] 实施例1不同表面修饰磁性微球的制备
[0120] 1)氨基化氧化硅磁性微球的制备：称取市售硅醇基氧化硅磁性微球适量，加入无 水乙醇、水、浓氨水，最后加入3'-氨丙基三乙氧基硅烷，混合后常温搅拌反应3h，将产物依 次用无水乙醇和蒸馏水洗涤，得表面键合氨基的磁性微球。
[0121] 2)羧基化氧化硅磁性微球的制备：称取市售硅醇基氧化硅磁性微球适量，加入无 水乙醇、水、浓氨水，最后加入3' -缩水甘油醚氧基丙基三甲氧基硅烷，混合后常温搅拌反 应3h，将产物依次用无水乙醇和蒸馏水洗涤，得表面键合环氧基的磁性微球。将4-氨基丁 酸与表面键合环氧基的磁性微球反应，即得表面羧基化的氧化硅微球。
[0122] 实施例2用试剂盒纯化核酸
[0123] 本试剂盒所述提取DNA的试剂盒具体配置实例包括：
[0124] 磁性微球：上述自制羧基化氧化硅磁性微球
[0125] 裂解结合液：411盐酸胍，2%1'1'行〇11乂-100,0.1%505,0.01%巯基乙醇，0.说 NaCl，0.6M LiCl，10mM Tris-HCl(pH5.5)，lmM EDTA，25%异丙醇
[0126] 洗涤液 I :200mM NaCl 溶液，0? 8M LiCl，70% 乙醇，50mM Tris 缓冲液（pH6. 5)
[0127] 洗涤液II:70%乙醇
[0128] 洗脱液：lmM EDTA，lOmM Tris-HCl (pH8. 0)
[0129] 纯化步骤：
[0130] 1)取200 y L抗凝血于1. 5ml离心管中，加入750 y L裂解吸附液振荡混和均匀裂 解细胞，静置5min ;
[0131] 2)加入lmg磁性微球，温和摇勾10min ;
[0132] 3)用磁分离架吸附磁性微球，弃上清；
[0133] 4)用850 y L洗涤液I洗涤2次，温和摇匀2min，吸附磁性微球，弃上清；
[0134] 5)用850 y L洗涤液II洗涤2次，温和摇匀2min，吸附磁性微球，弃上清；
[0135] 6)静置5min使残留的乙醇挥发；
[0136] 7)加入100 y L洗脱液，混和均匀后于室温放置5min ;
[0137] 8)磁场吸附磁性微球，回收洗脱液至离心管内，进行DNA检测及后续实验。
[0138] 实施例3几种表面修饰磁性微球纯化全血基因组DNA的比较
[0139] 样本：肝素钠处理的小鼠抗凝血
[0140] 材料：
[0141] 裂解结合液：411盐酸胍，2%1'1'行〇11乂-100,0.1%505,0.01%巯基乙醇，0.说 NaCl，0.6M LiCl，10mM Tris-HCl(pH5.5)，lmM EGTA，25%异丙醇
[0142] 洗涤液 I :100mM NaCl 溶液，0? 8M LiCl，70% 乙醇，50mM Tris 缓冲液（pH6. 5)
[0143] 洗涤液II:70%乙醇
[0144] 洗脱液：lmM EDTA，lOmM Tris-HCl (pH8. 0)
[0145] 磁性微球：
[0146] 磁性微球A:市售硅醇基氧化硅磁性微球
[0147] 磁性微球B:氨基化氧化硅磁性微球
[0148] 磁性微球C:羧基化氧化硅磁性微球
[0149] 使用实施例2中实验步骤纯化基因组DNA，结果如下表：
[0150]
【主权项】
1. 一种用于提取及保存核酸的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括： 一个或多个储存容器，所述的储存容器具有一用于储存磁珠内核及裂解结合液的内管 部分和一采样管部分，且所述的内管部分位于采样管部分内。
2. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述且的储存容器选自下组；试管、离屯、 官、e卵endo计官、培养瓶；且 所述的内管下部可W被塑料物体、注射器或毛细管扎入或穿刺。
3. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的采样管还具有一穿刺部分，且所述 的穿刺部分用于扎入或穿刺所述的内管，从而破坏所述内管的完整性。
4. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的储存容器的容量为1. 5-15ml。
5. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的储存容器由两部分组成： 内管巧），所述的内管（5)为储存磁珠内核及裂解结合液的容器、裂解结合液（3) W及 核酸结合相（3)位于所述内管巧）中；所述内管巧）的下部为薄膜或橡胶部分； 采样管化），所述的采样管为带刻度的样本收集管，且底部固定薄膜穿刺部分。
6. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括样本采集装置。
7. 如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的样本采集装置为采血装置。
8. 如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的样本采集装置为采集口腔黏膜细 胞的刮椿或唾液收集器。
【专利摘要】本实用新型提供了一种用于提取及保存核酸的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括：一个或多个储存容器，所述的储存容器中包括：核酸结合相，所述的核酸结合相用于吸附和/或结合待纯化的核酸；裂解-结合液，所述的裂解-结合液用于裂解细胞膜，释放待纯化核酸，并促使待纯化的核酸结合于所述的核酸结合相；且所述的核酸结合相具有：(1)内核；(2)位于所述内核上的氧化硅层；(3)位于所述氧化硅层表面的羧基修饰层。本实用新型的试剂盒可以用于非实验室条件下的采样和核酸提取，以及核酸样品保存。
【IPC分类】C12N15-10
【公开号】CN204369906
【申请号】CN201420212643
【发明人】李莉, 李永梅, 李海涛
【申请人】上海医脉赛科技有限公司
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2014年4月28日