d. M+for C37H36N4O 2j 568. 2838 ；found, 568. 2836〇
[0030]
[0031] 实施例2钯离子荧光探针化合物RD-TP对钯离子的选择性：
[0032] 将40 μ M浓度的金属阳离子加入到10 μ m的钯离子荧光探针化合物Rd-TP、乙醇和 水（EtOH = H2O= 1:1，体积比）溶液中，选择的金属阳离子分别为：K+，Na+，Ag+，NH4+，Ca 2+，Mg 2+，Zn2+, Cd2+, Ba2+, Pb2+, Cu2+, Hg2+, Mn2+, Ni2+, Co2+, Pt2+Fe3+, Cr3+, Rh3+和 Ru 3+。结果如图 1 所示， 在10分钟的静置过程中，钯离子荧光探针化合物Rd-TP对各种阳离子都没有吸收和荧光的 变化，只有钯离子存在时，吸收和荧光才表现出明显的增强变化，所以本发明的钯离子荧光 探针化合物Rd-TP的选择性好，对其他阳离子没有选择性。
[0033] 实施例3钯离子荧光探针化合物Rd-TP对钯离子的灵敏度测试：
[0034] 使用本发明的钯离子荧光探针化合物Rd-TP对ppb级别的钯离子浓度进行测 试。将钯离子荧光探针化合物Rd-TP(IOym)加入到含有O-IOOppb浓度钯离子的乙醇和水 (EtOH = H2O = 1:1，体积比）溶液中，记录相应的荧光强度变化，结果如图2所示，从图2中 可以看到钯离子荧光探针化合物Rd-TP在O-IOOppb浓度的钯离子中有明显的强度变化，并 且这种强度变化与加入的钯离子的浓度有很好的线性关系。这个结果表明，钯离子荧光探 针化合物Rd-TP可以在极低浓度下进行使用。
[0035] 实施例4钯离子荧光探针化合物Rd-TP与不同浓度的钯离子响应后光谱的变化：
[0036] 将钯离子荧光探针化合物Rd-TP (10 μ m)加入到分别含有0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10和20 μΜ浓度钯离子的乙醇和水（EtOH = H2O= 1:1，体积比）溶液中，记录相应的荧光强 度和吸收强度变化。如图3所示，随着钯离子浓度的逐渐增大，吸收和荧光都逐渐变强，在 浓度达到10 μ M后，吸收和荧光都已经达到最大值，继续增加离子的浓度，吸收和荧光变化 已经比较小，说明钯离子荧光探针化合物Rd-TP与钯离子是1比1的络合方式。
[0037] 实施例5钯离子荧光探针化合物Rd-TP对不同状态钯离子盐的测试：
[0038] 荧光探针化合物RD-TP与钯的浓度都为10 μΜ。将不同钯盐溶液和不同价态钯加 入钯离子荧光探针化合物Rd-TP的乙醇和水（EtOH = H2O= 1:1，体积比）溶液中，记录应该 强度变化。结果如图4所示，图4中的横坐标为不同盐和价态钯，纵坐标为探针变化的荧光 强度。从图4可以看出，荧光相应都比较大，荧光变化明显。也就是说荧光探针化合物RD-TP 能对不同价态和不同盐形式的钯都有识别效果，可广泛应用于钯元素的测试。
[0039] 实施例6荧光探针化合物RD-TP与钯离子响应变化与时间关系
[0040] 将荧光探针化合物RD-TP (10 μ Μ)与钯离子（10 μ Μ)置于乙醇和水（1:1，体积比） 溶液中，每隔一分钟取样品测试荧光强度的变化，结果如图5所示，从图5可知，荧光探针化 合物RD-TP在五分钟后达到荧光平稳的状态，荧光强度不再随时间呈现强度的增强。
[0041 ] 实施例7ρΗ对钯离子荧光探针化合物Rd-TP的干扰研宄：
[0042] 将10 μ M浓度的荧光探针化合物RD-TP溶液进行pH滴定测试。在10 μ M浓度的 荧光探针化合物RD-TP溶液中，边搅拌边加入配好的用氢氧化钠（IM)和盐酸（IM)溶液调 节pH。测定其pH在2. 0~12. 0时的溶液的荧光光谱变化。根据荧光强度和pH值，通过 Origin软件拟核得到pKa。结果如图6所示，荧光探针化合物RD-TP在pH 5-12之间没有荧 光出现，因此荧光探针化合物RD-TP可以用于此pH范围内对钯离子检测，不受pH的影响。 生物体的PH-般为中性条件，所以这为在中性条件下探针的应用奠定了基础。
[0043] 实施例8钯离子荧光探针化合物RD-TP与不同浓度钯离子响应后的质谱测定：
[0044] 将钯离子焚光探针化合物RD-TP分别加入到含有10 μ M和30 μ M的钯离子的乙醇 和水（EtOH:H2O = 1: 1，体积比）溶液中，使钯离子荧光探针化合物RD-TP的浓度为20 μ Μ， 然后进行反应，反应时间为5分钟。然后对反应液进行质谱的测定。结果如图7所示，结果 显示，钯离子荧光探针化合物RD-TP :钯离子=1:0. 5时质谱中分别存在钯离子荧光探针化 合物RD-TP和罗丹明B的分子量（图7Α)，也就是说，钯离子荧光探针化合物RD-TP与钯离 子反应后生成了罗丹明Β，但钯离子浓度变成探针浓度的1. 5倍量时，钯离子荧光探针化合 物RD-TP完全消失，只有罗丹明B留在溶液中（图7Β)，这也就说明了钯离子荧光探针化合 物RD-TP与钯离子的响应为水解反应。
[0045] 实施例9钯离子荧光探针化合物RD-TP对斑马鱼中钯离子识别染色：
[0046] 选取斑马鱼胚胎，1天年龄和5天年龄的斑马鱼浸泡于含有10 μ M二价钮离子溶 液中。浸泡1小时后，将溶液除去，清洗胚胎和斑马鱼幼体。再加入到含有荧光探针化合物 RD-TP (5 μ Μ)溶液中，染色40分钟后清洗胚胎和斑马鱼，将粘附于表面的探针分子清洗掉， 在激光聚焦显微镜下观察。结果如图8所示，钯离子荧光探针化合物RD-TP在对浸泡在钯 离子溶液的胚胎染色后，对新生的胚胎着色点主要在卵膜上，并没有进入胚胎内部，也就是 说卵膜保护着胚胎，污染物不能进入胚胎中。但随着时间的增长，卵膜在胚胎后期，通透性 变好，离子和钯离子荧光探针化合物RD-TP都进入到胚胎中，对胚胎中的斑马鱼染色明显。 在对孵出时间1天年龄的斑马鱼染色时发现，斑马鱼全身都被染色，而对比与孵出时间5天 年龄的斑马鱼时，其主要着色于肠道和围心囊位置。从这个结果可以看出，孵出时间1天年 龄的斑马鱼，由于孵出时间短，钯离子可以通过皮肤渗透入体内，而孵出时间5天年龄的斑 马鱼主要是通过吞食和呼吸方式把离子运到体内。随着年龄的增长，皮肤渗透进入体内的 重金属离子已经非常少，皮肤起到了保护的作用。
[0047] 实施例10钯离子荧光探针化合物RD-TP对大型潘中钯离子识别染色：
[0048] 选取1天年龄和5天年龄的大型潘浸泡于含有10 μ M二价钯离子溶液中。浸泡1 小时后，将溶液除去，用曝气水清洗大型潘。再加入到含有荧光探针化合物RD-TP (5 μ Μ)溶 液中，染色40分钟后再次用曝气水清洗胚胎和斑马鱼，将粘附于表面的探针分子清洗掉， 在激光聚焦显微镜下观察。结果如图9所示，在对1天年龄的大型潘染色时发现，大型潘几 乎全身都被染色，而对比与5天年龄的大型潘时，5天年龄的大型潘主要着色于肠道位置。 从这个结果可以看出，1天年龄的大型潘由于年龄小，离子可以通过皮肤渗透入体内，而5 天年龄的大型潘主要是通过吞食把钯离子运到体内。随着年龄的增长，皮肤渗透进入体内 的重金属离子已经非常少，皮肤起到了一个保护的作用。
[0049] 实施例11不同浓度钯离子对不同年龄段斑马鱼存活率的影响。
[0050] 将两个不同孵出时间年龄段斑马鱼放置于多个钯离子浓度梯度中，每个浓度梯度 设3组平行，每组10只。钮离子暴露组浓度分别为：1 μ m，3 μ m, 5 μ m, 7 μ m, 9 μ m。统计72 小时后实验组的存活率。
[0051] 结果如图10所示，从图10可以看出，随着Pd2+浓度的增加，对斑马鱼的存活率有 明显的影响。在低浓度Pd 2+(1 μπι，3 μπι，）暴露组下，孵出时间5天年龄段斑马鱼与对照组 差别不是很明显，存活率相对较高，但随着钯离子浓度的升高，孵出时间5天内的斑马鱼随 着暴露时间的增长，存活率下降明显。相对于孵出时间5天内的斑马鱼，孵出时间1天内 的斑马鱼变化更加明显，在低浓度（1 μ m，3 μ m，）的时候，其存活率就已经受到了明显的影 响。随着Pd2+浓度的增加，1天年龄段的斑马鱼随着暴露时间的增加，存活率急剧降低。结 果与钯离子荧光探针化合物RD-TP的荧光颜色结果得出的结论相同，随着年龄的增长，皮 肤渗透进入体内的重金属离子已经非常少，皮肤起到了一个保护的作用，导致5天年龄段 的斑马鱼的存活率明显高于1天年龄段的斑马鱼的存活率。
[0052] 实施例12不同浓度钯离子对不同年龄段大型潘存活率的影响。
[0053] 将两个不同年龄段大型潘放置于多个钯离子浓度梯度中，每个浓度梯度设3组平 行，每组10只。钯离子暴露组浓度分别为：1 μ m，3 μ m，5 μ m，7 μ m，9 μ m。统计72小时后实 验组的存活率。
[0054] 结果如图11所示，从图11所知，随着Pd2+浓度的增加，对大型潘的存活率有明显 的影响。在低浓度Pd 2+暴露组下，5天年龄段大型潘与对照组差别不是很明显，存活率相对 较高，但随着钯离子浓度的升高，5天年龄段的大型潘随着暴露时间的增长，存活率下降明 显。相对而言，1天年龄段的大型潘随着Pd 2+浓度的增加，存活率变化更加明显，在低浓度 (1 μπι，3μπι，）的时候，其存活率就已经受到了明显的影响。随着Pd2+浓度的增加，1天年龄 段的大型潘随着暴露时间的增加，存活率急剧降低。这个结果也与钯离子荧光探针化合物 RD-TP的荧光颜色结果得出的结论相同，随着年龄的增长，皮肤渗透进入体内的重金属离子 已经非常少，皮肤起到了一个保护的作用，导致5天年龄段的撒行骚的存活率明显高于1天 年龄段的大型潘的存活率。存活率实验验证了通过荧光染色我们所得出的结论。
【主权项】
1. 钯离子荧光探针化合物Rd-TP，其特征在于，其结构式如式1所示：2. 权利要求1所述的钯离子荧光探针化合物Rd-TP在评估检测钯离子中的应用。3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的应用是评估检测环境水样和土壤 样品中的钯残留或生物体中的钯。
【专利摘要】本发明公开了一种钯离子荧光探针化合物及其应用。本发明的钯离子荧光探针化合物Rd-TP(其结构式如式1所示)，其是一粒新型的反应型探针，钯离子的存在促进了罗丹明的开环，出现比色和荧光的变化，而且最终导致了探针的水解，这种识别机理在以前的报道中并未见过。本发明首次通过水解的方式对钯离子进行检测。本发明探针灵敏度高，在ppb级别能对钯离子进行识别，并且不受其他重金属离子干扰，可信度高，抗干扰能力强，并且稳定性好，具有优良的选择性。
【IPC分类】C09K11/06, C07D491/107, G01N21/64
【公开号】CN104946237
【申请号】CN201510179434
【发明人】许玫英, 刘飞, 孙国萍
【申请人】广东省微生物研究所
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2015年4月15日