专利名称：用于dna和rna分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法
技术领域：
本发明属于分子生物学技术领域，涉及核酸DNA或RNA分离纯化及回收的一种核酸吸附材料的制备，具体涉及一种对动物、植物、微生物的组织及细胞中的DNA或RNA特异吸附的核酸吸附材料的制备方法，采用该吸附材料能简单、快速分离出超纯的DNA或RNA。
背景技术：
目前，国内外提取动物、植物、微生物的组织及细胞中的DNA或RNA多采用有机溶剂抽提方法。该方法操作繁琐、耗时长、不易被掌握，提取的核酸DNA或RNA易受蛋白质及杂质污染，且纯度和产量不高，而且有机溶剂有害人体健康。
发明内容
针对上述方法存在的不足，本发明目的在于，用于DNA和RNA快速分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法。为了实现上述任务，本发明采用如下的技术方案一种用于DNA和RNA快速分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法，其特征在于，按以下步骤操作I)原料组成及重量百分比纸纤维3% 15%，硅粉3% 20%，羧甲基纤维素5% 15%，余量为去离子水，原料的重量百分比总和为100% ；2)将配方中的原料加热溶解形成混合物，然后用电动搅拌器进行匀浆；3)将得到的匀浆液倒入直径为4cm的六孔模具中；放置60°C烤箱中烘烤30min或常温下自然干燥，即可得到核酸吸附材料。本发明的方法制备的核酸吸附材料，在特定的溶液中能特异性吸附DNA或RNA，从而使提取DNA或RNA操作方法简单快速，且纯度高、产量高，避免使用有机溶剂。可用于分子生物学研究领域中的动物、植物、微生物的组织及细胞中DNA或RNA的分离、纯化和回收。
图I是本发明制备核酸吸附材料的流程图；图2是制成的核酸吸附纸纤维材料图片；下面结合附图和实施例进一步详细说明。
具体实施例方式以下是发明人给出的实施例，需要说明的是，这些实施例是较优的例子，本发明不限于这些实施例。实施例I :参见图1，本实施例的操作步骤为
I)在三角瓶中按重量取优质纸纤维10%、硅粉15%，羧甲基纤维素15%，用去离子水补至总体积500ml。2)将三角瓶放入水浴中，加热，直至上述混合物完全溶解。3)用电动搅拌器进行匀浆。4)将匀浆液倒入直径为4cm的六孔模具中，将模具放置在60°C烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥，即可得到核酸吸附材料。5)将制备好的核酸吸附材料做成直径O. 7cm圆形纸片(如图2所示)。实施例2 参见图1，本实施例的操作步骤为I)在三角瓶中按重量取优质纸纤维5%、硅粉10%，羧甲基纤维素10%，用去离子水补至总体积500ml。2)将三角瓶放入水浴中，加热，直至上述混合物完全溶解。3)用电动搅拌器进行匀浆。4)将匀浆液倒入直径为4cm的六孔模具中，将模具放置在60°C烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥，即可得到核酸吸附材料。5)将制备好的吸附材料做成直径O. 7cm圆形纸片(如图2所示)。实验例I :微量血液RNA核酸吸附快速分离采用上述实施例制备的核酸吸附材料，放入核酸吸附离心套管的内层中作为核酸吸附介质，外层套管为液体收集管，使用时将内层吸附管插入到外层收集管中。 RNA提取试剂由红细胞裂解溶液，离解溶液，清除溶液，洗涤液溶和分离溶液组成。所述的RNA提取试剂各组分及物质浓度(摩尔/升)组成按终浓度体积为红细胞裂解溶液0.01-lmol/L 的 NH4C1，0. 0001-0. 3mol/L 的 KHCO3,O. 00001-lmol/L EDTA余量为去离子水；离解溶液0.l-10mol/L 的胍盐，O. 005-0. 5mol/L 的 C6H5Na3O7,0. 0001-lmol/L 的C15H28NaNO3, ,0. 01_2mol/L 的 C2H6OS, O. Ι-lOmol/L 的 NaAc，余量为去离子水；清除溶液0. 01-20mol/L的胍盐，O. 001-0. 60mol/L的C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水(2:1，v/v)的混合溶液；洗涤溶液0.001-2mol/L 的 NaCl，0. 0001_2mol/L 的 C4H11NO3，余量为乙醇和去离子水(2:1，v/v)的混合溶液；操作步骤是I、取O. 5-lml血液，加入3倍体积红细胞裂解溶液混匀，室温放置5min。2、4000r离心Imin弃去上清。3、沉淀中加入Iml离解溶液混匀，室温放置5min。4、将液体吸入核酸吸附管中室温放置5min。5. 12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中。6、加清除溶液，12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中。7、加洗涤溶液，12000r,离心30s，弃去收集管中的废液。8、将吸附管插入一干净的离心管中，加分离溶液室温放置2min后，12000r离心Imin，即获得纯化的RNA。
实验例2 :组织细胞基因组DNA的核酸快速分离本实施例与实验实施例I不同的是，选用的DNA核酸提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液和分离溶液组成。DNA核酸提取试剂各组分及物质浓度(摩尔/升)组成按终浓度体积为悬浮溶液0.01-0. 2mol/L 的 C4H11NO3,0. 001-0. 5mol/L 的 EDTA, O. 0001-0. 9mol/L的C15H28NaNO3,余量为去离子水；离解溶液0. 5-1OmoI/L是胍盐，余量为去离子水；清除溶液0. l-10mol/L的胍盐，O. 01_4mol/L的C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水(2:1, v/v)的混合溶液；洗涤溶液0. 01-8mol/L的NaCl，0. 001_3mol/L的C4H11NO3,余量为乙醇和去离子 水(2:1, v/v)的混合溶液；，分离溶液0.01-10mol/L 的 EDTA，0. 001-0. 6mol/L 的 C4H11NO3,余量为去离子水。操作步骤是I、收集经匀浆后的组织或消化后的细胞，加悬浮溶液悬浮。2、加离解溶液混匀，室温5min。3、将液体吸入吸附管中，12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收
集管中。4、加清除溶液，12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中。5、加洗涤溶液，12000r,离心30s，弃去收集管中的废液。6、将吸附管插入一干净的收集管中，加分离溶液室温放置2min后，12000r离心Imin，即获得纯化的DNA。
权利要求
1 .一种用于DNA和RNA快速分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法，其特征在于，按以下步骤操作 1)原料组成及重量百分比 纸纤维3% 15%，硅粉3% 20%，羧甲基纤维素5% 15%，余量为去离子水，原料的重量百分比总和为100% ； 2)将配方中的原料加热溶解形成混合物，然后用电动搅拌器进行匀浆； 3)将得到的匀浆液倒入直径为4cm的六孔模具中；放置在60°C烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥，即可得到核酸吸附材料。
全文摘要
本发明公开了一种用于DNA和RNA快速分离纯化回收的核酸吸附材料的制备方法，制得的核酸吸附材料由以下原料按重量百分比制成；纸纤维3%～15%，硅粉3%～20%，羧甲基纤维素5%～15%，余量为去离子水，原料的重量百分比总和为100％；首先将配方中的原料加热溶解形成混合物，然后用电动搅拌器进行匀浆后倒入直径为4cm的六孔模具中；放置在60℃烤箱中烘烤30min或在常温下自然干燥，即可得到核酸吸附材料。制得的核酸吸附材料做成直径为0.7cm的圆形纸片，放入核酸吸附离心套管中作为核酸吸附介质，在特定溶液中能特异地吸附DNA或RNA，从而降低了蛋白质和其他杂质的污染，提高了DNA或RNA的纯度和产量，避免使用有机溶剂提取DNA或RNA时所对人体引起的毒副作用。
文档编号B01J20/24GK102836698SQ201210334908
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月11日 优先权日2012年9月11日
发明者饶国洲, 李昂, 周洪, 李晓红 申请人:西安交通大学口腔医院